硝苯地平免疫胶体金探针的制备

目的优化硝苯地平药物的免疫胶体金探针的制备条件。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,采用紫外分光光度法在400~700 nm处测定胶体金溶液吸光度,判断胶体金颗粒大小。调整标记胶体金溶液p H、抗体蛋白量以及复溶液等因素,试制试纸条并进行加标验证实验,确定制备免疫胶体金探针的最优条件。结果实验制备胶体金颗粒大小在20~40 nm;最佳制备条件为:单抗标记p H为9.0,单抗标记量为5.0μL,复溶液为0.5 mol/L Tris(p H 9.0,含0.5%Tween20)。经加标实验验证,试纸条的检测灵敏度可以达到设计要求。结论硝苯地平免疫胶体金探针的制备条件优化,可为下一步制作高质量的免疫胶体金试纸条提供技术准备,可应用于对食品中非法添加硝苯地平的快速检测。     

基于预孵育处理的牛奶中四环素增敏型胶体金检测

在传统胶体金检测方法的基础上,采用预孵育反应模式,在均匀的液相中进行胶体金标记抗体与待测物的反应,提高抗原抗体间免疫识别反应的效率。将反应后的溶液滴加至试纸条上进行结果判读。结果表明:通过简单的反应模式改变,预孵育反应后再滴加至试纸条检测,四环素检测灵敏度提高了5倍,达1μg/L。说明改变传统胶体金试纸条反应的模式,从直接加样改为预孵育再加样,可以提高胶体金试纸条方法学的检测灵敏度。     

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

基于胶体金侧向层析原理的大米中痕量镉现场快速检测方法

目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术，对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 ng/g的水平。在实际应用中，此方法样品前处理过程操作简单，低浓度酸直接提取并稀释后即可用于试纸条检测。结论:胶体金试纸条快速检测方法适用于大米镉的现场快速筛检。     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条的研制

采用胶体金标记抗大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌O157:H7 多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌O157:H7 胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记pH8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳pH7.0～7.5。对26 株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311 和金黄色葡萄球菌CMCC 26003 有轻微交叉反应外,与其他24 株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌O157:H7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。     

四环素胶体金免疫检测技术的研究

为研制四环素(tetracycline,TC)胶体金免疫层析试纸条,对胶体金的制备及与四环素多克隆抗体的标记进行研究。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金,向加热沸腾的100 mL0.01%氯金酸中加入1.8 mL1%柠檬酸钠,加热15 min后冷却定容;已制备好的胶体金溶液标记四环素抗体,将装有1 mL胶体金的离心管中加入一定量K_2CO_3调节p H值,加入一定量抗体蛋白后4℃条件下反应30 min,加入100μLNa Cl后4℃条件下保存备用,标记成功后优化条件。结果表明,胶体金颜色为紫红色、清亮透明、无沉淀及漂浮物,可见光光谱峰宽较小,证明胶体金大小分布均匀,制备成功;硝酸纤维素膜(NC膜)上有明显红色斑点,可见光光谱中最大吸收峰出现偏移,证明金标抗体标记成功;胶体金标记四环素抗体的最佳p H值为7.5,最佳标记蛋白量为稀释抗体6 000倍。胶体金的制备及与四环素多克隆抗体标记的成功,为装配四环素胶体金试纸条奠定了基础,为四环素在食品样品中快速检测方法的建立提供理论参考。     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

乳品中多种抗生素残留胶体金检测方法研究

研究用于牛奶和奶粉中多种抗生素残留同时检测的胶体金免疫层析试纸条。基于胶体金免疫层析技术,搭建抗原包被体系和胶体金标记抗体体系,优化检测方法,考察胶体金快速检测试纸条的检测灵敏度、特异性、准确度和实际样本适应性。试纸条可同时检测卡那霉素、红霉素、林可霉素3种药物在牛奶、奶粉中的残留,检测限分别为50.0,20.0和75.0μg/L,假阳性率和假阴性率均为0,样本无需前处理,检测操作简单,10 min内实现3种药物同时检测。采用胶体金试纸条和液相色谱串联质谱法对20份牛奶和奶粉盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,2种方法测定结果一致。建立的胶体金免疫层析技术及试纸条检测准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。     

基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利

为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法（colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA）应用的可行性，以农药腐霉利为模型，系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明：胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下，纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L，其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理，利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性，省去了有机溶剂吹干程序，加标样品平均回收率介于80.1%～109.6%之间，且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测，所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势，可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立

通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。     

3种快速检测沙门氏菌方法的比较分析

目的 比较PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法检测沙门氏菌的检测效果。方法 使用PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法和国标法分别对待测样品进行检测, 并将3种快速检测方法的检测结果与国标法检测结果进行对比分析。结果 3种快速检测法的检测结果和国标法检测结果符合率分别为100%、92.9%和100%, PCR法和VITEK-2 Compact法符合率略高于胶体金法, 但3种快速检测方法总检出率与国标法比较差异均无统计学意义(P>0.05), PCR法、胶体金法和VITEK-2 Compact法对35个沙门氏菌阳性样本的检出率分别为100%、85.7%和100%。针对阳性样品, PCR法和VITEK-2 Compact法高于胶体金法, 且差异有统计学意义(P<0.05)。PCR法和VITEK-2 Compact法对沙门氏菌的最低检出限为1×101 CFU/mL, 而胶体金法为1×102 CFU/mL。结论 3种快速检测方法均可作为沙门氏菌国标检测方法的有效补充。     

胶体金粒径对氯霉素胶体金试纸条性能的影响

采用柠檬酸三钠法分别制备出粒径为20、30、40nm的3种胶体金溶液,并标记抗氯霉素(CAP)单克隆抗体,另分别制备出竞争法氯霉素胶体金试纸条,并且对各种粒径胶体金制备试纸条的工艺进行优化,比较各种试纸条的性能。结果发现,利用30nm的胶体金制得的试纸条检测限(消线)为3ng/mL,检测快速、稳定,而20、40nm的胶体金制得的试纸条检测限(消线)分别为7、9ng/mL,稳定性较差。30nm的胶体金制备的胶体金试纸条在稳定性、灵敏度方面都明显优于20nm和40nm。     

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的：旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法：应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果：该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论：该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用

研制了一种可快速检测羊乳及制品中牛源β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析试纸条。通过杂交瘤技术制备牛β-lg特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成30 nm胶体金颗粒,并用于标记牛β-lgmAb。采用竞争法研制免疫层析试纸条,将胶体金标记的牛β-lgmAb包被于金标垫,牛β-lg和羊抗鼠IgG标记于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),牛β-lg和二抗的最佳包被浓度均为1.0 mg/mL。制得的单克隆抗体纯度都在90%以上,效价均在10000以上且特异性较好。该试纸条对牛β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为3.13μg/mL,对牛源α-CN,牛源β-CN,牛源κ-CN,牛源α-LA,BSA均未产生交叉反应,对脱脂羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉的LOD值为5%,并用该方法对市售羊奶及配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化的ELISA试剂盒一致。该方法前处理快速简单,可在5 min内对牛β-lg进行检测,可用于羊乳制品的现场快速检测。     

Advantage of Eu3+‐Doped Polystyrene Microspheres Compared with Colloidal Gold Used in Immunochromatographic Assays for the Detection of Melamine in Milk

Colloidal gold and Eu³⁺‐doped fluorescent microspheres were applied as labels to develop the immunochromatographic strips for detecting melamine in milk. Under the optimized condition, the visual detection limit of colloidal gold‐immunochromatographic test strip (ICTS) was 150 μg/L of melamine in phosphate‐buffered saline (PBS), although the visual detection limit of fluorescent nanoparticles (FN)‐ICTS was 75 μg/L in PBS. As thermal acceleration test, FN‐ICTS could be stored at 37 °C for at least 11 d before sample testing, but the color of the lines on colloidal gold‐ICTS faded away after 7‐d storage. The visual result of FN‐ICTS was more stable than that of colloidal gold‐ICTS, and the fluorescence intensity of the line on FN‐ICTS could be maintained up to 30 d at 22 °C after sample testing. Once the immunochromatographic strips were used to detect melamine in milk, no negative effect of milk components on the performance of FN‐ICTS was identified, whereas the performance of colloidal gold‐ICTS was significantly influenced by milk matrix.