色谱法在鸡蛋清主要过敏原分离纯化中研究进展

鸡蛋营养丰富,同时也是引起人体过敏的主要食物之一。蛋清中含有4种主要过敏原,包括卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白和溶菌酶。概述了鸡蛋中4种主要过敏原的理化特性及色谱法纯化过敏原的研究进展,旨在为规模化分离得到高纯度和高活性的过敏原提供参考。     

鸡蛋清中三种主要蛋白质的连续化提取分离研究

对鸡蛋清进行微滤、超滤浓缩后,加入60%的饱和硫酸铵盐析,得到了卵白蛋白粗品;上清液用Q-sepharoseF.F.离子交换层析,分离得到溶菌酶和卵铁传递蛋白,从而实现了蛋清中三种蛋白质的连续化提取。      

鸡蛋清中三种主要蛋白质的连续化提取分离研究

对鸡蛋清进行微滤、超滤浓缩后,加入60%的饱和硫酸铵盐析,得到了卵白蛋白粗品;上清液用Q-sepharoseF.F.离子交换层析,分离得到溶菌酶和卵铁传递蛋白,从而实现了蛋清中三种蛋白质的连续化提取。     

一步层析法分离高纯度蛋清过敏原卵转铁蛋白

鸡蛋是引起食物过敏最常见的食物之一.为了快速高效分离鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白,开展鸡蛋过敏的研究,采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析一步分离出高纯度、高回收卒的卵转铁蛋白,纯度达97%,回收率为87.47%.本实验所建立的方法操作简便,设备简单,分离效率高,纯化出的卵转铁蛋白可为进一步研究提供实验材料.     

一步层析法分离高纯度蛋清过敏原卵转铁蛋白

鸡蛋是引起食物过敏最常见的食物之一。为了快速高效分离鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白,开展鸡蛋过敏的研究,采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析一步分离出高纯度、高回收率的卵转铁蛋白,纯度达97%,回收率为87.47%。本实验所建立的方法操作简便,设备简单,分离效率高,纯化出的卵转铁蛋白可为进一步研究提供实验材料。      

高效特异的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白多克隆抗体的制备

为得到高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,通过用商品化的卵转铁蛋白(OVT)标品和自制纯化的OVT 免疫新西兰大白兔,用ELISA 及Western blotting 方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果表明获得的抗体效价均高达1:819200 以上,抗体特异性强。本实验所建立的方法可成功制备高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,可为进一步研究提供实验材料。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原B细胞线性表位的预测研究

为预测鸡蛋过敏原卵转铁蛋白的B细胞线性表位,以GenBank中提供的鸡蛋卵转铁蛋白氨基酸序列为基础,分别用Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法和Karplus-Schulz法对鸡蛋卵转铁蛋白的抗原指数、亲水性、蛋白表面可及性及柔韧性进行预测,并用Chou-Fasman法和Deleage-Roux法预测其二级结构,综合分析以上预测结果,得出鸡蛋卵转铁蛋白可能的B细胞线性表位区。结果表明鸡蛋卵转铁蛋白存在7个潜在表位区,包括蛋白第174～181、215～222、231～240、288～294、332～344、415～429、547～555位可能为B细胞线性表位优势区域。该结果将有助于鸡蛋卵转铁蛋白B细胞表位的进一步精确定位。     

不同贮藏条件下鸡蛋清中主要蛋白质特性的变化

目的探讨贮藏条件对鸡蛋品质的影响及品质变化机制。方法研究25℃室温贮藏、4℃冷藏及50%CO2+9%O2+41%N2三元气体包装室温贮藏条件下,鸡蛋清卵白蛋白、卵黏蛋白、溶菌酶的品质变化。结果实验结果表明:在35 d贮藏期间,室温组蛋清S-卵白蛋白含量从初始值14.867%迅速增至94.345%;卵黏蛋白含量从2.931 mg/g降至0.341 mg/g;溶菌酶含量从1.488 mg/m L增加到4.851 mg/m L,溶菌酶活力从30166.7 U/m L降低到15933.3 U/m L。冷藏组和气调组均能有效降低卵白蛋白N-构型向S-构型转化的速度,降低S-卵白蛋白含量(P0.01);抑制卵黏蛋白分解,保持卵黏蛋白含量(P0.01),阻止溶菌酶变性和卵黏蛋白-溶菌酶复合体解离,保持溶菌酶含量(P0.01),并维持溶菌酶活力(P0.01),三者综合作用可以减缓蛋清稀化的进程。结论 4℃冷藏和气调包装室温贮藏均能保持蛋清蛋白质的特性。     

鸡蛋清中主要过敏原的研究进展

鸡蛋是引起食物过敏最常见的过敏原食物之一。本文重点介绍了鸡蛋清中主要过敏原卵类粘蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶的研究进展。     

聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用

研究3 种pH值条件下4 种聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）对卵白蛋白（ovalbumin,OVA）、卵转 铁蛋白（ovotransferrin,OVT）与溶菌酶（lysozyme,LYZ）的沉淀效率,根据变化规律建立无需后续脱盐的OVA 分离新工艺。结果表明：PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ,沉淀率受PEG质量分 数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时,OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大,当pH值从7.5调至 5.5时,3 种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺：首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至 质量分数为12%,离心收集上清液,即得纯度88.1%的OVA,提取率为95.1%;再将所得上清液pH值调至5.5,离心 收集上清液,所得OVA纯度提高至99.7%,提取率为87.3%。该工艺简便易行,有利于OVA的大规模制备及在食品 及医药领域的应用。     

膜分离技术制备蛋清卵转铁蛋白的工艺技术研究

利用微滤、超滤和钠滤技术,并结合冷冻干燥处理从蛋清中分离制备卵转铁蛋白(OVT).结果表明,经5倍生理盐水稀释,20℃和40MPa均质处理后的蛋清液黏度适宜,微滤除杂质后,通过10kD超滤膜除去大分子蛋白,再经5kD超滤膜连续处理,回收浓液经纳滤脱盐浓缩,冷冻干燥即为卵转铁蛋白混合物.混合物经SDS-PAGE电泳分析,OVT的相对分子质量为80kD,OVT纯度为28.46%.     

三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白

鸡卵类黏蛋白（hen’s egg ovomucoid,HOVM）是鸡蛋清中最重要的过敏原蛋白,探讨三步沉淀（一步三氯乙酸沉淀以及两步硫酸铵盐析沉淀）从鸡蛋清中提取并纯化HOVM的工艺条件,并利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）技术检测纯化效果。结果表明：用等体积去离子水稀释的鸡卵清液加入质量分数10%三氯乙酸去除大部分杂蛋白后,所得上清液加入硫酸铵至终饱和度50%,盐析沉淀进一步去除非HOVM的杂蛋白,上清液中最后再追加硫酸铵至终饱和度80%,离心所得沉淀再经过透析冻干即为高纯度的HOVM;HPLC（检测波长220 nm）检测所获HOVM的纯度为99.202%,此工艺条件下得到HOVM的提取率约为27.05%。     

Separation of Egg White Lysozyme by Anionic Polysaccharides

Anionic polysaccharides (Na-alginate, Na-carboxyl-methyl-cellulose, high methoxy pectin and κ-carrageenan) were evaluated for their suitability towards simple and more efficient separation of lysozyme from salted or fresh duck eggs and hen egg whites for use in foods. Only κ-carrageenan interacted and formed precipitates with lysozyme. Recovery of lysozyme from fivefold diluted salted duck egg whites was 60–65% and 78–81% from fresh duck and hen egg whites using 0.7%κ-carrageenan. The recovered lysozyme from the salted duck egg whites was stable during storage at 4°C for 35 days.     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原的体外模拟消化特性

采用体外静态消化模式,分别模拟婴幼儿和成年人的胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶消化鸡卵转铁蛋白,利用Tricine-SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS对消化产物进行分析,研究鸡蛋蛋清过敏原卵转铁蛋白的消化特性.结果表明:婴幼儿和成年人的模拟胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶都能够消化卵转铁蛋白.在模拟婴幼儿消化体系中...     

热加工对鸡蛋中4种主要过敏原结构的影响

为探究热加工对鸡蛋主要过敏原结构的影响,对鸡蛋清中的4种过敏原进行不同条件的热加工,并利用圆二色光谱、紫外-可见光光谱、外源荧光光谱对加热前后过敏原的空间结构进行表征。结果表明,卵转铁蛋白对热不稳定,随加热时间的延长和温度的升高,分子结构逐渐展开,芳香族残基和疏水基团暴露于分子表面;轻微加热使卵白蛋白分子的二级结构更加有序,吸光度减小,表面疏水性增大,随着加热程度的增大,其二级结构变得无序,分子发生聚集;加热后卵类黏蛋白的二级结构较为稳定,轻微加热其分子展开,吸光度和荧光强度增大,继续加热使蛋白分子部分聚集;热处理使溶菌酶分子的有序性下降,芳香族残基和疏水基团逐渐暴露,但随着加热程度的增加,蛋白分子发生部分聚集。本实验结果为后续研究加热对鸡蛋过敏原致敏性的影响提供理论依据。     

蛋清中溶菌酶的提取

研究了从新鲜蛋清中提取溶菌酶的方法。通过控制温度，调酸和加盐，可以使溶菌酶得到分离和纯化。采用超滤的方法将溶菌酶提取液浓缩及脱盐并进一步纯化。最后采用喷雾干燥的方法制成产品。产品活力可达１１０００ｕ／ｍｇ．     

热加工及超高压处理对卵白蛋白抗原性的影响

以蛋清为原料,采用加热加工、动态超高压加工及两种方法结合处理,研究不同加工方式对蛋清中卵白蛋白抗原性的影响。结果表明：卵白蛋白抗原性随着加热温度的升高而降低,最高降低68%,且抗原性急剧降低的临界温度是80℃;经超高压均质处理后,其抗原性随着压力的升高先降低后回升;经二者结合处理后,卵白蛋白抗原性与单独加热处理变化趋势相似,但无单独热处理变化幅度大,最高降低52.5%;表明了热处理对卵白蛋白抗原性的影响比超高压大,结果为研发低致敏性或无致敏性蛋制品提供参考。