红酵母原生质体制备及其紫外诱变育种的研究

研 究 了 一 株 产 类 胡 萝 卜 素 红 酵 母 ns-1原 生 质 体 的 最 佳 制 备 条 件 ,并 在 此 基 础 上 进 行 诱 变 育 种 。 通 过 实 验 ,初 步 确 定 ns-1菌 株 原 生 质 体 最 佳 形 成 和 再 生 条 件 为 1.5%β- glucuronidase、1.5%lysing enzym e 和 1.5%lyticase 分 别 先 后 处 理 对 数 期 红 酵 母 细 胞 各 3h。通 过 紫 外 线 诱 变 原 生 质 体 , 获 得 类 胡 萝 卜 素 产 量 明 显 提 高 的 突 变 菌 株 U V ss,其 生 物 量 、色 素 含 量 、色 素 产 量 分 别 为 6.15g/L、1043.57μg/g 干 重 、6.41m g/L,生 物 量 、色 素 产 量 分 别 比 原 始 菌 株 提 高 了 67.6%、54.1%。     

酱油曲霉孢子原生质体的制备与紫外诱变育种

由1株分离、纯化自曲精的酱油曲霉的分生孢子制备原生质体,并进行紫外诱变,得到7株中性蛋白酶活提高幅度较大的紫外突变株U系,中性蛋白酶活最高的1株达到6 197.4U,为出发株的1.94倍。对原生质体制备条件进行了优化:选取孢子生长旺盛的新鲜斜面培养物(培养5 d左右)制备孢子悬浮液;采用25 mmol/L-巯基乙醇+5 mmol/L Na2EDTA体系预处理20 min;酶解条件是:1%溶菌酶+1%蜗牛酶+1%纤维素酶,山梨醇作为渗透压稳定剂(0.6 mol/L,pH6.88),酶解温度33℃,酶解5 h;再生培养基为0.6 mol/L NaCl高渗透压豆汁培养基,涂布法再生。     

红酵母原生质体制备及其紫外诱变育种的研究

研 究 了 一 株 产 类 胡 萝 卜 素 红 酵 母 ns-1原 生 质 体 的 最 佳 制 备 条 件 ,并 在 此 基 础 上 进 行 诱 变 育 种 。 通 过 实 验 ,初 步 确 定 ns-1菌 株 原 生 质 体 最 佳 形 成 和 再 生 条 件 为 1.5%β- glucuronidase、1.5%lysing enzym e 和 1.5%lyticase 分 别 先 后 处 理 对 数 期 红 酵 母 细 胞 各 3h。通 过 紫 外 线 诱 变 原 生 质 体 , 获 得 类 胡 萝 卜 素 产 量 明 显 提 高 的 突 变 菌 株 U V ss,其 生 物 量 、色 素 含 量 、色 素 产 量 分 别 为 6.15g/L、1043.57μg/g 干 重 、6.41m g/L,生 物 量 、色 素 产 量 分 别 比 原 始 菌 株 提 高 了 67.6%、54.1%。      

高酯化力低产桔霉素的红曲霉诱变育种的研究

对红曲霉菌株的原生质体进行紫外线和超声波的复合诱变,来选育高酯化力和低产桔霉素菌株,以三丁酸甘油酯为平皿显色剂,采用测定透明圈和抑菌圈大小进行初筛,然后用TLC和HPLC方法对初筛菌株的固态发酵物进行酯化力和桔霉素含量进行定量分析。实验结果表明,在紫外线照射60～80s、超声波作用25～30min的复合诱变条件下的菌株,经固态发酵后酯化力高达0.698mg/100mL,与出发菌株相比,提高了83.2%,桔霉素含量相当微量,几乎不可检出。该菌株3代接种后,其酯化力和桔霉素产量相对稳定。     

高酯化力低产桔霉素的红曲霉诱变育种的研究

对红曲霉菌株的原生质体进行紫外线和超声波的复合诱变,来选育高酯化力和低产桔霉素菌株,以三丁酸甘油酯为平皿显色剂,采用测定透明圈和抑菌圈大小进行初筛,然后用TLC和HPLC方法对初筛菌株的固态发酵物进行酯化力和桔霉素含量进行定量分析。实验结果表明,在紫外线照射60～80s、超声波作用25～30min的复合诱变条件下的菌株,经固态发酵后酯化力高达0.698mg/100mL,与出发菌株相比,提高了83.2%,桔霉素含量相当微量,几乎不可检出。该菌株3代接种后,其酯化力和桔霉素产量相对稳定。      

红曲霉发酵液酯化酿酒尾水制备酯化液的研究

利用红曲霉发酵生成的酯化酶液,催化酿酒尾水中的有机酸和醇,来制备含酯量较高的酯化液。本研究采用液态发酵法制备酯化酶液,添加到酿酒尾水、乙醇、己酸的混合液中,在一定条件下进行酯化反应,以混合液总酯含量和各有效成分含量为指标,设计单因素实验考察影响酯化反应因素的范围,采用正交设计实验优化各酯化反应的条件。正交实验所得的最优条件为乙醇添加量为10%、酯化酶液添加量为9%、己酸添加量为1.5%、酯化反应温度为35℃,在此条件下混合液中总酯的含量达137.01 mg/100 mL,其中己酸乙酯含量高达222.71 mg/L,乳酸乙酯的含量由92.93 mg/L下降到74.61 mg/L,乳酸乙酯与己酸乙酯的比值小于1。所得酯化液适合用于白酒的勾调,不仅大幅提高了酒体中总酯含量,还减少了乳酸乙酯对主体香型的抑制和青涩杂味,使酒体香气更为突出协调。     

红曲霉红色素高产菌株的诱变选育

该文以紫红曲霉(Monascus purpureus)No．1为出发菌株，经紫外线诱变处理，获得一株制备原生质体的起始菌N0.18，该菌株红色素含量比No．1提高1倍。进而对其制备原生质体的条件进行了研究，在优化方案基础上，紫外诱变原生质体，诱变株经筛选，最后得到一株具有稳定遗传性的红色素高产菌株N0．154。在摇瓶培养基中进行液态发酵，连续传3代，发酵液中红色素量稳定在20．6U／mL-22．8U／mL，其红色素产量大约是菌株No．1的3倍。     

产洛伐他汀的红曲霉诱变育种研究

目的:提高红曲霉发酵生产洛伐他汀产量。方法:对红曲霉进行紫外线诱变处理,采用抑菌圈法初筛和HPLC法复筛。结果:筛选得到两株高产突变株,分别命名为UV-7、UV-12,洛伐他汀产量为0.246 mg/m L、0.249 mg/m L,较出发菌株分别提高了55.6%、57.6%;另外,红曲霉产红色素能力以及菌落特征可能与产洛伐他汀能力有一定内在联系。结论:紫外线诱变是提高红曲霉产洛伐他汀产量的一种有效方法。     

红曲霉酯化能力的初步研究

本文报道对几株红曲霉进行实际催化己酸乙酯合成能力检测的结果。研究表明，供试菌并没有表现出特别的催化性能。     

高产洛伐他汀红曲霉氮离子束诱变育种

为了提高洛伐他汀产量,以红曲霉M14为出发菌株进行N+束诱变。诱变剂量分别为:78×1013、130×1013、182×1013、234×1013N+/cm2,通过高效液相色谱检测诱变菌株发酵产物中洛伐他汀的含量,筛选正突变菌株。结果显示,诱变剂量为130×1013N+/cm2时表现出相对较高的正突变率。最优诱变菌株M50-2洛伐他汀产量4.42 mg/g,相对于出发菌株提高70%。对其进行12次传代培养,发现产洛伐他汀的能力下降了2.3%,表现为良好的遗传稳定性,该菌株具有潜在的应用价值。     

红曲霉产酯化酶条件的研究

从大曲中筛选到酯化红曲霉9株,其中MH27菌株的酯化能力较高.对MH27菌株产酯化酶的条件进行了研究.结果表明,该菌在液体培养基中几乎不产生酯化酶;在固体培养基中均有酯化酶产生,大米培养基中酯化酶产量最高.在34℃、发酵7d的条件下,其酯化力可达90U.     

五粮液大曲中产酯化酶红曲霉的分离及酯化酶的纯化

从五粮液大曲中分离筛选出三株红色霉菌株,编号分别为M1、M2、M3,经形态观察、生理生化鉴定,初步确定此三种菌株为红曲霉.从这三株菌种选出具有酯化活性的菌株M1进行研究,用超滤法对其产的固态发酵物浸液进行浓缩,浓缩后的固态发酵物浸液比浓缩前的酯化活力提高了2倍左右:然后又确定M1菌株固态培养时最适温度和pH分别为33℃...     

酿酒大曲中酯化红曲的分离及应用

从优质大曲中筛选分离了具有出超强酯化功能的红曲酯化菌,并将其应用于原酒酿造和黄浆水酯化生产。用于原酒生产时,即在保持传统酿酒工艺的基础上加入红曲酯化菌种参与酒醅发酵,生产的原酒更具有"窖香突出,幽雅细腻,酒体醇厚,回味悠长"之特点;而将其应用于黄浆水酯化研究也取得突破性的进展,加入红曲酯化菌生产的酯化液中已酸乙酯、乳酸乙酯均有较大的提升,将这种酯化液用于原酒生产,不仅改善酒体风格,提高原酒产量,而且可以大大提高酒的优质品率,实现了酿酒副产物的综合利用,提高了行业竞争力。     

红曲霉产琥珀酸与酯化酶的变化规律

分别对红曲霉生长过程中产生的琥珀酸和酯化酶进行色谱分析和酶活力测定,探讨红曲霉产琥珀酸与酯化酶的变化规律。研究在不同时间、不同培养条件及菌体状态下,红曲霉产琥珀酸及酯化酶的动态变化情况,以获得红曲霉产琥珀酸和酯化酶的最佳培养时间和最佳培养状态。结果表明：琥珀酸在红曲霉生长的第5天即达到最大值3.62 g/L,随后琥珀酸质量浓度明显下降;酯化酶在红曲霉生长过程中可不断地积累,在第9天酯化酶酶活力达到143.65 U/mL;接种量、pH值、温度、转速及菌体形状等影响琥珀酸及酯化酶的产量;颗粒状菌体发酵有利于琥珀酸及酯化酶的积累;接种量为10%、初始pH 6.5、30 ℃、180 r/min条件下培养至第6天,可兼顾琥珀酸及酯化酶的积累。     

Co60诱变原生质体选育高产酒精酵母

将较高产酒精酵母制备成原生质体,经Co^60诱变后,采用四级筛选,得到高产酒精酵母菌株Co-158,其遗传性状稳定。以玉米粉糖化醪为基质发酵72h,成熟醪酒精体积分数为17～％（v／v）,残还原糖为0．0137％。Co-158菌;洙成熟醪酒精体积分数比出发菌株提高了16．34％,比ADY提高了24．48％,残还原糖含量亦远远低于出发菌株和ADY。     

黑曲霉原生质体诱变选育内切型菊粉酶生产菌株

从徐州市沛县河口镇秦庄村牛蒡种植基地腐烂牛蒡根附近采集土壤,经过初筛得到了3批菌株(包括从中国科学院购买菌株黑曲霉AS3.316),经过测定内切型菊粉酶酶活力(I)和外切型菊粉酶酶活力(S),筛选出I/S值大于10的菌株,共17株菌株。从17株黑曲霉菌株样本中,再筛选出一株产菊粉酶酶活力最高的菌株C122803,其酶活力为2.78U/mL。对菌株C122803进行原生质体制备及LiCl诱变后,得到一株内切型菊粉酶酶活力最高的菌株YY18,其酶活力为3.97U/mL,比出发菌株的酶活力提高了42.80%。     

冬虫夏草原生质体诱变育种研究

以冬虫夏草原生质体为材料,经紫外诱变获得了性状优于出发菌株的突变株。实验结果表明:生物量最高的再生菌株为诱变30s的8号菌株,生物量达到1.3445g/100mL,比出发菌株生物量提高55.16%;胞内多糖产量最高的再生菌株为诱变30s的3号菌株,胞内多糖产量达到54.570mg/g,比出发菌株多糖产量提高52.9%;富硒能力较高的突变菌株是诱变30s的8号菌株,富硒量达到125.8μg/g,比出发菌株提高50.11%。由结果可知,原生质体诱变技术可以用于冬虫夏草的菌种选育。     

一株产酯化酶菌株的分离鉴定及产酶

从浓香大曲中分离筛选得到一株产酯化酶的菌株,鉴定并研究了其产酯化酶的特性。利用微生物分离技术筛选得到产酯化酶的红曲霉FBKL3.0018,根据形态特征、培养特征、生理生化特征并结合分子生物学方法进行鉴定。结果鉴定菌株FBKL3.0018为红曲属的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)。菌株的酯化力较高,可用于生产酯化酶制剂和高酯化大曲等。     

贝壳状革耳菌诱变提高产漆酶能力及其生物漂白的研究

本研究从贝壳状革耳菌（Parus conduaus，是一株具有选择性降解木素的白腐菌）菌株出发，通过原生质体融合和紫外诱变技术处理，获得产漆酶酶活较高的诱变融合菌株，诱变株28-7的漆酶酶活高峰达17290IU／L，比原始菌的酶活高峰2318IU／L提高约7.5倍。诱变菌株分泌的漆酶预处理荻苇浆、麦草浆和芦苇浆，LOP浆和OLQP浆的白度较未经处理的高，卡伯值下降，黏度变化不大。经过漆酶／介体生物处理可提高纸浆的可漂性。对后续漂白有促进作用。实验结果初步证明，原生质体融合和紫外诱变技术可以作为改良白腐菌Parus conduaus的手段。     

酯化红曲的筛选和酯化酶酶学性质研究

从洋河大曲中筛选到l株具有较高酯化活力的红曲霉,经26S RNA分子鉴定为紫红曲霉(Monascus purpureus),命名为YHM-6.YHM-6菌株能分别耐受8‰的乳酸和10 ％vol的酒精.以YHM-6为出发菌株,生产得到酯化红曲粗酶制剂催化己酸合成己酸乙酯具有很强的专一性和选择性.结果表明,其最适催化温度为35℃,最适催化pH值为3.5,最适催化酒精浓度为28 ％vol,最适己酸浓度为1％,其适合于浓香型白酒和黄水酯化液的生产.