藜芦乙醇提取物对植物病原真菌的抑菌活性研究

通过测定藜芦的乙醇提取物以及各萃取部分对植物病原真菌的抑菌活性,寻找藜芦中的农用活性物质,为其综合开发利用提供科学依据。采用菌丝生长速率法测定了藜芦球茎和根乙醇提取物对6种植物病原菌的抑制作用。试验结果表明,当供试浓度为5.0 mg/mL时,对苹果腐烂病菌(Valsa mali)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)和苹果轮纹病菌(Physalospora piricola nose)的抑菌率比较高,分别为96.4%、78.1%和74.3%。藜芦乙醇提取物的不同极性溶剂萃取物的抑菌活性较高,乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌和苹果轮纹病菌的EC50分别为0.161 mg/mL和0.551 mg/mL;正丁醇萃取物对苹果腐烂病菌和苹果轮纹病菌的EC50分别为0.190 mg/mL和0.451 mg/mL。乙酸乙酯萃取物是进一步研究的重点。     

落地生根萃取物的抑菌活性

[目的]比较落地生根根、茎、芽和花各萃取相提取物的抑菌活性,进一步明确起抑菌作用的活性成分,为以后的分离打下基础.[方法]以番茄早疫病菌、水稻立枯病菌为指示菌,采用生长速率法和孢子萌发法,测定各自的抑菌活性.[结果]落地生根芽氯仿萃取物对2种菌的菌丝生长和孢子萌发具有较好的抑制作用,菌丝生长抑制率分别为92.41%和89.22%,孢子的萌发抑制率依次为91.85%、86.11%.[结论]芽氯仿相萃取物的抑菌效果最好,表明落地生根植物中起抑菌作用的活性成分主要集中在芽部位,且抑菌活性成分主要为弱极性物质.     

石榴皮抑菌活性物质的初步研究

研究了石榴皮初提物对黄瓜枯萎病菌的室内生物活性.结果表明:在甲醇、氯仿及正己烷提取物中,甲醇提取物的抑菌活性最为显著.采用生长速率法和孢子萌发法测定了石榴皮溶剂萃取物对黄瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、玉米小斑病菌和棉花立枯病菌等4种病原菌的生物活性.在甲醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取物中,以正丁醇萃取物的抑菌活性最强,在质量浓度为200 g/L时.对4种供试真菌的抑制率均大于70%,而对玉米小斑菌的抑制作用达90.67%,其EC50值为26.2 g/L.     

粤蛇葡萄及几种杀菌药剂对柑橘溃疡病菌的抑茵活性

采用带药平板涂布法测定了粤蛇葡萄甲醇提取物及5种杀菌药剂对柑橘溃疡病菌的抑菌活性.结果表明:粤蛇葡萄茎和叶提取物对柑橘溃疡病菌均有抑菌活性,最低抑菌质量浓度(MIC)分别为4、2 g/L;杀菌药剂60%甲硫·异菌脲WP、72%农用链霉素SP、硫酸铜晶体、53.8%氢氧化铜WG和64%吧霜灵WP对柑橘溃疡病菌的最低抑菌浓度分别为10、2.5、0.625、0.3125、0.1563 g/L.采用液-液萃取法对粤蛇葡萄的抑菌活性成分进行了初步分离,结合活性测定,发现抑菌活性成分主要存在于茎和叶提取物的乙酸乙酯萃取物中.     

四种植物提取物及复配的抑菌效果

紫苏、甘草、丁香、连翘经乙醇提取得到提取物,提取物再经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到最好的抑菌部位;再将这四种最好的萃取物按照正交表L_(25)(5~6)复配,相同浓度不同配比的萃取物抑菌活性差别很大,有降低抑菌活性,有提高抑菌活性,当四者的比例为5:3:2:1时,混合物具有最佳抑菌活性,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的抑菌圈直径分别为(28.97+1.23) mm、(24.17+0.29) mm,(27.87+0.23) mm。提取物复配抑菌活性不同,可能是不同成分的抑菌机理不同。     

白鲜皮水提物对植物病原真菌的抑菌活性

[目的]研究白鲜皮水提物抑制植物病原菌活性成分并进行鉴定,为开发植物源农药提供依据。[方法]采用生长速率法测定抑菌效果。采用大孔树脂、高速逆流、柱层析法等对活性成分分离。[结果]白鲜皮水提物对辣椒立枯病菌、番茄灰霉病菌、人参枯萎病菌、人参根腐病菌等具有良好的抑菌活性。且对番茄灰霉病菌抑菌活性显著,40%乙醇洗脱部位及单体的EC50值分别为1 203、393.36 mg/L,单体经鉴定为梣酮。[结论]白鲜皮水提物具有良好的抑菌活性,分离所得单体为白鲜皮中抑制番茄灰霉病菌的主要活性成分。     

洋葱提取物抑菌活性研究

采用70%乙醇提取洋葱,将其提取液经过三种不同溶剂萃取,萃取物对土壤中的放线菌、细菌及真菌的抑菌活性进行实验研究,测定并比较不同萃取物对土壤放线菌、细菌、真菌的抑菌活性。对土壤放线菌、细菌、真菌抑制效果最好的溶剂萃取物分别为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇,其抑菌率依次为51.1%,75.1%,77.3%。洋葱的不同溶剂萃取物抑菌效果不同,且同一萃取物对土壤不同种类微生物的抑制效率亦不同。     

大孔树脂静态吸附番茄内生菌Brevibacillus brevis W4抑细菌成分

[目的]Brevibacillus brevis W4是从番茄茎中分离得到的1株对灰霉病菌有强烈抑制作用的内生菌.为明确其发酵液抑细菌活性,并探索抑细菌物质的大孔树脂吸附条件.[方法]采用管碟法测定了B.brevis W4发酵液对6种病原细菌的抑制活性.并以金黄色葡萄球菌为指示菌,选用大孔树脂对发酵液中的抑细菌活性物质进行静态吸附条件优化.[结果]B.brevis W4发酵液对供试枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜软腐病菌、姜青枯假单孢杆菌均有抑制活性,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈突出,直径分别为21.7、20.1 mm.大孔树脂AB-8对活性物质的吸附效果最好,其较优的静态吸附条件为上样液pH值为8.0,上样量为树脂质量的15倍,最佳的洗脱液体积分数为40％甲醇.[结论]B.brevis W4发酵液具有抑制细菌作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用最强.AB-8可以作为抑细菌活性成分的吸附树脂.     

细菌抑制剂离体生物活性试验

[目的]为明确化学药剂对病原细菌的离体抑菌活性,进而为田间病害防治提供优秀的候选药剂。[方法]将黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)等常见病原细菌作为防治靶标,利用带菌平板法,对药剂的离体抑菌活性进行对比研究。[结果]不同的药剂对病原细菌的离体抑菌活性差异很大,链霉素、土霉素等药剂对多种病原细菌具有较高的离体抑菌活性。[结论]试验采用带菌平板法,能够对药剂的离体抑菌活性进行准确检测。     

水溶性壳聚糖稀土配合物的合成、表征及其抑菌活性

[目的]研究水溶性壳聚糖及其稀土离子金属配合物的抑菌活性。[方法]合成水溶性壳聚糖和稀土离子La(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)、Nd(Ⅲ)的配合物,利用FT-IR、UV-Vis和热重分析仪对配合物进行表征,研究壳聚糖及其配合物对芦笋茎枯病菌Phomopsis asparagus的抑制活性。[结果]壳聚糖Ce(Ⅲ)配合物对Phomopsis asparagus的抑菌活性较单一的水溶性壳聚糖及其他稀土配合物显著提高。[结论]水溶性壳聚糖稀土配合物抑菌活性分别为Ce(Ⅲ)配合物>La(Ⅲ)配合物>Nd(Ⅲ)配合物>壳聚糖。     

深海独岛枝芽孢杆菌A493产活性物质特性与发酵条件优化研究

以一株抗菌谱较窄并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽孢杆菌(V.dokdonensis)A493为研究对象,研究了其产活性物质特性及发酵条件的优化。A493产抗菌活性物质可以耐受100℃的高温,在pH值4～10和紫外照射环境中活性稳定,可以通过3kDa的超滤管,对蛋白酶不敏感,只能溶解于水和甲醇。酸沉淀和硫酸铵沉淀实验结果排除了活性物质是脂肽类物质的可能性,初步研究显示该活性物质可能是极性较强的水溶性活性小分子新化合物。确定A493最佳发酵条件为:接种菌龄12h、接种量1%、发酵时间48h、发酵温度28℃、培养转速180r·min-1、250mL锥形瓶中的装液量为70mL。优化后,其单位体积发酵液抑菌效果提高了18.7%,活性物质对水稻黄单胞菌的抑菌效价相当于15.6μg·mL-1的标准链霉素。     

深海枝芽胞杆菌A493产生的新活性物质Z11的抗菌机理

以一株抗菌谱窄的深海枝芽胞杆菌（Virgibacillus dokdonensis）A493为研究对象,对其产生的新的氨基糖苷类抗菌活性物质Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围和抗菌作用机理进行了研究。结果表明Z11抑制水稻黄单胞菌的浓度范围为14-56μg·mL^-1;机理研究显示Z11不改变水稻黄单胞菌细胞膜的通透性,但能影响其蛋白质的合成及细胞壁合成关键酶N-乙酰葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶（GlmU）的活性。     

海洋细菌抗菌筛选及深海独岛枝芽胞杆菌A493活性物质分离鉴定

以水稻黄单胞菌等植物病原菌为指示菌,采用平板对峙法对411株海洋细菌进行了抗菌筛选,初筛获得具有抗菌活性的海洋菌株81株,复筛获得具有稳定抗菌活性的菌株7株,最后通过测定抗菌谱,得到1株抗菌谱特异并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽胞杆菌（Virgibacillus dokdonensis）A493.对水稻白叶枯病害的温室生防实验表明,经过A493无菌发酵上清波处理,水稻生长20 d后对水稻白叶枯病害的防治效果达到了66.7％,且对水稻的正常生长无不良影响.通过离子交换色谱法提取,再经2次薄层层析硅胶板回收分离,得到了纯化活性物质,经过ESI-MS＂分析,初步判断活性物质分子量为317 Da.Doskochilova系统纸层析结果显示活性物质很可能为新的氨基糖苷类物质.     

Ozone for Plant Pathological Applications

The effect of ozone on Xanthomonas oryzae pv. oryzae, a bacterium causing leaf blight disease in Paddy (Oryza sativa), was studied in culture. Viability of this pathogen was lost by flushing ozone at a flow rate of 300 ml/min for 3 minutes in culture condition. The inhibitory effect was dependant on cell concentration and time. With a cell concentration of 0.008 OD at 540 nm, the inhibition of the bacterium was total and no growth was observed in nutrient agar plates even after 36 hrs. With higher concentrations of cells (0.08 OD and above) the bacterium survived, though there was a bacteriostatic effect initially. Conductivity of the cell suspension increased after ozone treatment owing to altered cell membrane permeability and subsequent release of cellular contents. As the bacterium is seed borne, washing the paddy seeds with ozonized water would help control the bacterial blight of rice, the most serious disease of rice in Asia.     

白头翁提取物抗TMV生物活性初探

[目的]探讨白头翁提取物的抗TMV活性,为从植物中开发抗病毒类生物农药提供依据.[方法]以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,采用半叶枯斑法测定了白头翁提取物对TMV的生物活性.[结果]在供试质量浓度为10 g/L时,白头翁石油醚提取物对TMV具有明显的体外钝化作用,钝化0.5 h后,其抑制率达65.19％,对TMV的初侵染和增殖也有一定的抑制作用,处理24 h后,抑制率分别为46.67％和23.53％.     

噻森铜对水稻白叶枯病和细菌性条斑病室内杀菌活性

噻森铜是一种新杀细菌剂。室内活体杀菌活性测定表明，噻森铜对水稻白叶枯病菌和细菌性条斑病菌的毒力EC50分别为160．69、214．47mg/L，与噻枯唑差异不显著；离体抑菌活性测定显示，噻森铜抑菌作用明显低于噻枯唑，噻森铜的作用机制可能不同于噻枯唑。噻森铜具有良好的开发和应用前景。     

黄花蒿提取物的杀虫活性

黄花蒿精油对米象、玉米象、绿豆象和蚕豆象等４种仓库害虫具有很强的熏杀活性,其甲醇和乙醇提取物对小菜蛾、菜青虫、大菜粉蝶、银纹夜蛾和斜纹夜娥幼虫也具有一定的杀虫活性。     

放线菌酮对米根霉积累L-苹果酸代谢途径的调控作用

实验考察了富马酸酶活抑制剂放线菌酮对米根霉发酵产L-苹果酸和富马酸的影响. 结果表明,发酵16 h加入浓度15 mg/L的放线菌酮使米根霉富马酸酶胞质同功酶比活力峰值降低48.7%,而苹果酸脱氢酶胞质同功酶活力却未有明显改变,生成的富马酸比对照样减少37.1%,而L-苹果酸积累量提高54.6%,达到21.7 g/L. 表明通过对米根霉富马酸酶胞质同功酶的抑制作用能减弱米根霉积累富马酸代谢途径中由L-苹果酸向富马酸的转化,从而促进米根霉积累L-苹果酸.     

Whole Genome Sequencing and Tn5-Insertion Mutagenesis of Pseudomonas taiwanensis CMS to Probe Its Antagonistic Activity Against Rice Bacterial Blight Disease

The Gram-negative bacterium Pseudomonas taiwanensis is a novel bacterium that uses shrimp shell waste as its sole sources of carbon and nitrogen. It is a versatile bacterium with potential for use in biological control, with activities including toxicity toward insects, fungi, and the rice pathogen Xanthomonas oryzae pv.oryzae (Xoo). In this study, the complete 5.08-Mb genome sequence of P. taiwanensis CMS was determined by a combination of NGS/Sanger sequencing and optical mapping. Comparison of optical maps of seven Pseudomonas species showed that P. taiwanensis is most closely related to P. putida KT 2400. We screened a total of 11,646 individual Tn5-transponson tagged strains to identify genes that are involved in the production and regulation of the iron-chelator pyoverdine in P. taiwanensis, which is a key anti-Xoo factor. Our results indicated that the two-component system (TCS) EnvZ/OmpR plays a positive regulatory role in the production of pyoverdine, whereas the sigma factor RpoS functions as a repressor. The knowledge of the molecular basis of the regulation of pyoverdine by P. taiwanensis provided herein will be useful for its development for use in biological control, including as an anti-Xoo agent.