应用反相HPLC法测定生物制品中苯酚含量

目的　采用反相高效液相色谱法测定 3种生物制品中苯酚含量。方法　以C18化学键合硅胶为固定相 ,以乙腈 /水 (70∶30 ,V/V)为流动相 ,UV检测波长 2 78nm进行测定。结果　平均回收率为 98. 5 % (n =6 ) ,3种生物制品 6次独立测定的相对标准偏差分别为伤寒ViRSD =0 . 77% ,PPDRSD =1 6. 1% ,气管炎疫苗RSD =1 4. 4 % ,苯酚在 0 . 0 5～ 0 . 5mg/ml范围内 ,浓度与吸收面积呈良好的线性关系。结论　本法操作简单 ,结果准确 ,重复性好 ,可用于实际检测分析。     

HPLC法测定一种吡啶酮类医药中间体中5种杂质含量

目的 建立1-(4-氨基苯基)-5,6-二氢-3-(4-吗啉基)-2(1H)-吡啶酮(以下简称SM1)中5种杂质的分析方法.方法 采用HPLC方法,色谱柱:Waters SunFire C18(150mm×4.6mm,3.5μm);流动相A:0.03mol·L-1乙酸铵缓冲液-甲醇(75∶25),流动相B:0.03mo...     

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物研究进展

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)作为肠促胰素的一种,是治疗Ⅱ型糖尿病的重要靶点之一,具有促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、延迟胃排空等作用。GLP-1治疗效果明显,用药安全性高,但体内循环时间短,易被清除,因此,需要对GLP-1进行修饰,以达到延长药物作用时间、提高生物利用度、增强用药安全性等目的。对GLP-1及其生理学作用进行了简单介绍,对GLP-1治疗Ⅱ型糖尿病的作用机理及GLP-1类似物的研究现状进行概述,重点比较不同GLP-1类药物经过不同修饰,在药动学、药效学等方面体现的差异,分析GLP-1类药物在临床应用中存在的问题,并针对现有问题讨论未来长效GLP-1类似物的发展方向。     

高效液相色谱法检测重组人干扰素α2b注射液中间甲酚含量

目的建立重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b)注射液中间甲酚含量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并对方法进行验证。方法采用RP-HPLC法,选用ZORBAX 300SB-C18(4. 6 mm×250 mm 5-Micron)色谱柱,流动相为水∶甲醇(50∶50),柱温45℃,上样量20μL,流速0. 5 mL/min,检测波长270 nm。对方法进行线性、专属性、准确性、精密性、定量限及耐用性验证。分别采用建立的方法及《中国药典》四部(2015版)4-氨基安替比林分光光度法测定3批rhIFNα2b注射液中的间甲酚含量,比较两种方法的测定结果。结果该方法在间甲酚含量为1 000～0. 1μg/mL范围内线性良好,R~2为0. 999 3;药用辅料与IFN蛋白对间甲酚含量检测无干扰;该方法检测高、中、低3种浓度样品的平均回收率分别为97. 10%、99. 00%和103. 94%,总的平均回收率为100. 01%;重复性验证中RSD为0. 105%,中间精密性验证中RSD为0. 26%;该方法的定量限为0. 1μg/mL;同一色谱柱条件下,不同设备与不同时间配制的流动相对检测结果无明显影响;而使用不同程度色谱柱理论塔板数有明显差异。结论建立的HPLC检测方法专属性、精密性、耐用性良好,准确性高,可用于检测rhIFNα2b注射液中的间甲酚含量。     

HPLC法测定火麻仁中α-亚麻酸的含量

本文采用HPLC法对中药火麻仁中α-亚麻酸进行了含量测定.确定色谱条件为:色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水(体积比为80:20);流速1.0mL·min-1;检测波长210hm;柱温30℃.在此条件下,α-亚麻酸甲酯与其它组分得到良好的分离,线性范围...     

pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析分离人胰高血糖素样肽-1融合蛋白的影响

目的探讨pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography,IMAC)分离含His-Tag标签的人胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的影响,并确定最佳洗脱条件。方法在0.50mol/L盐浓度条件下,分别取pH6.0、7.0、7.8和9.04种缓冲液进行咪唑梯度洗脱;在合适的pH值条件下,分别取氯化钠浓度0.25、0.50和0.75mol/L3种缓冲液进行咪唑梯度洗脱。分析在不同pH值及盐浓度条件下洗脱融合蛋白所需要的咪唑浓度及回收率。结果在所考察的pH值范围内,洗脱融合蛋白所需的咪唑浓度随洗脱液pH值的升高而逐渐降低,当洗脱液pH值为7.8时,融合蛋白的分离效果最佳,大部分杂蛋白被0～40mmol/L咪唑洗脱液去除且不含融合蛋白,而绝大部分融合蛋白在咪唑浓度达80～200mmol/L时被洗出,总回收率达(83.7±1.0)%,且比例较高;在此pH值条件下,氯化钠浓度达0.75mol/L,才会影响融合蛋白的回收率,氯化钠浓度为0.25或0.50mol/L的洗脱液洗出融合蛋白的效果相近;在pH7.8,含0.25mol/L氯化钠的洗脱体系下,用50mmol/L咪唑溶液洗脱杂蛋白,200mmol/L咪唑溶液洗脱融合蛋白,融合蛋白的回收率和比例分别可达(85.2±2.0)%和(80.5±1.0)%。结论在所考察的pH值和盐浓度范围内,提高洗脱液pH值和盐浓度均可降低洗脱融合蛋白需要的咪唑量,但也会降低融合蛋白的回收率。     

1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇含量高效液相色谱法分析实验结果与讨论

本文对行业标准HG/T 5711-2020《1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇》中1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇含量的测定方法进行了验证,针对1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇含量高效液相色谱分析方法的特异性、线性相关性、精密度、准确度、重复性进行了考察,验证了方法的可靠性。     

HPLC法测定生姜提取液中6-姜酚含量的研究

建立了测定生姜提取液中6-姜酚含量的高效液相色谱方法。采用Agilent ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以纯水-乙腈(体积比为58∶42)为流动相,流速为1.2 mL/min,柱温35℃,在282 nm用紫外检测器进行检测。结果表明,重复测定结果的相对标准偏差在0.77%,回收率在95%~105%范围内。该方法的灵敏度高,准确性和重现性良好,有效消除了样品中其他组分对目标峰的干扰,线性范围宽,分离度好,可用来准确分析生姜提取液中6-姜酚的含量。     

HPLC法测定5-氟-1H-吲哚-2,3-二酮中的有关物质

采用高效液相色谱法建立了5-氟-1H-吲哚-2,3-二酮中有关物质的检测方法.采用YMC-Pack ODS-A(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以含0.04％辛烷磺酸钠的0.013mol·L-1磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH=7.1)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1.2mL·min-1,柱温30℃,...     

HPLC法测定反应液中7-氨基头孢烷酸的残留

建立了用HPLC测定反应液中7-氨基头孢烷酸（7-ACA）残留含量的分析方法。经过验证,7-ACA在2.895～11.582μg/ml范围内线性关系良好（r=1.0000）,该方法具有较好的专属性,操作简单,重复性好,可为头孢类品种检测母核7-ACA残留提供试验依据。     

HPLC法测定注射用替加环素葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛含量

目的:建立HPLC法测定注射用替加环素葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的含量.方法:采用Phenomenex Luna C18(4.6 mm×150 mm,3 μm)色谱柱;以磷酸盐缓冲液(称取磷酸氢二钾4.35 g,乙二胺四乙酸二钠0.93 g,加水1 000 mL使溶解,用磷酸调节pH值至6.2)为流动相A,乙腈为流动...     

重组人干扰素α1b蛋白质含量HPLC检测方法的建立

目的建立测定重组人干扰素α1b(Recombinant human interferonα1b,rhIFNα1b)蛋白质含量的HPLC检测方法,并进行验证。方法应用HPLC外标法测定IFNα1b对照品的蛋白质含量,并对方法的线性及精密度进行验证。采用建立的HPLC外标法测定3批rhIFNα1b样品的蛋白质含量,并与Lowry法的检测结果进行比较。结果蛋白质在进样量5～50μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 1);用建立的方法重复进样6次,检测rhIFNα1b对照品溶液的蛋白质含量,相对标准偏差(RSD)为0.92%,<2%;用建立的方法检测0812001、0812003、0812006批rhIFNα1b样品溶液的蛋白质含量分别为0.465、0.503和0.496 mg/ml;HPLC外标法与Lowry法测定的蛋白质浓度有一定的差异,HPLC法的RSD<2%,Lowry法的RSD>4%,HPLC法的精密度较Lowry法好。结论建立了测定rhIFNα1b蛋白质含量的HPLC外标法,该方法操作简便,精密度较好,可用于IFNα1b原液蛋白质含量的检测。     

反相液相色谱法测定7-羟基-3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮的含量

建立了反相液相色谱测定7-羟基-3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮含量的方法。采用shim-pack C18柱(5μm,4.6mmi.d.×250mm),流动相为v(甲醇)∶v[缓冲溶液(含事先配制好的0.075mol/L的磷酸二氢铵,磷酸调至pH=3)]=50∶50,流速为0.8mL/min,检测波长为250nm。外标法定量,7-羟基-3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮1～100μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r为0.9997,平均回收率为99.26%,RSD=1.17%(n=9)。     

反相高效液相色谱法测定1-(4-硝基苯)-3-(5-氯-2-吡啶)三氮烯

采用Zorbax Eclipse XDB-C8(4.6mm内径×150mm,5μm)色谱柱,乙腈流动相,流速0.70mL/min,检测波长407nm,建立了测定标题化合物的反相高效液相色谱法。该方法的线性范围是0.5~12.0μg/mL,回归方程为A=82.06c+10.16(r=0.9996),相对标准偏差3.218%(c=6.0μg/mL,n=5),检出限为0.05427μg/mL,平均回收率在96.81%~105.1%之间。     

高效液相色谱法测定重组人干扰素α1b滴眼液中苯扎氯铵的含量

目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定重组人干扰素α1b(recombi-nant human interferonα1b,rhIFNα1b)滴眼液中苯扎氯铵(benzalkonium chloride)的含量。方法采用HPLC法测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵含量,色谱条件:流动相:乙腈:5 mmol/L醋酸铵[含1%三乙胺,用冰醋酸调节pH值至(5.0±0.2)]体积比为65∶35;流速:1.0 ml/min;检测波长:262 nm;进样量20μl;柱温:室温。对该方法进行验证,并应用该方法检测3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。结果该方法检测苯扎氯铵专属性和系统适应性良好;最低检测限和定量限分别为0.53μg/ml和1.48μg/ml;苯扎氯铵在10～50μg/ml浓度范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 1;连续6次进样,峰面积的RSD=1.78%;苯扎氯铵理论浓度为22、24、26μg/ml的加样回收率平均为97.90%,RSD=0.96%。3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的相对含量分别为19.27、19.89和19.76μg/ml,分别为标示量的96.34%、94.46%和98.80%。结论 HPLC法简便、灵敏、准确,可用于测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。     

HPLC法测定复元胶囊中五味子醇甲的含量

建立复元胶囊中五味子醇甲的含量测定方法。采用高效液相色谱(HPLC)法对复元胶囊中五味子主要成分五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)进行含量测定;流动相为甲醇-水(65∶35),检测波长为250 nm。五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)在4.096～40.96μg/mL范围内溶液浓度与峰面积存在良好的线性关系,定量限为0.399μg/mL,检测限为0.120μg/mL,平均回收率为94.4%,RSD为0.6%(n=6);精密度试验、重复性试验、稳定性试验均良好。该方法灵敏度高、准确可靠,可以有效地控制复元胶囊的质量。     

HPLC法测定N-羟基-N-(2-((1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-基)氧)甲基)苯基氨基甲酸甲酯

采用Aglient Extend-C185μm 250 mm×4.6 mm色谱柱,流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(v∶v=75∶25),流速为1 m L/min,275 nm为检测波长,建立了测定N-羟基-N-(2-((1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-基)氧)甲基)苯基氨基甲酸甲酯含量的高效液相色谱分析方法。在进样量为0.53~3.52μg的范围内线性关系良好(y=125679.4x+15010.4,r=0.9999),RSD 0.24%,回收率99.2%~100.4%,分析周期为15 min。方法快速、简便、准确,可用于N-羟基-N-(2-((1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-基)氧)甲基)苯基氨基甲酸甲酯反应液及产品的质量控制。     

重组人白细胞介素-12注射液蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的 建立重组人白细胞介素-12(recombinant human interleukin-12,rhIL-12)注射液蛋白纯度反相高效液相色谱（reversephase high performance liquid chroomatography,RP-HPLC）检测方法,并进行验证。方法 采用YMC C4液相色谱柱（250 mm×4.6 mm）检测rhIL-12纯度。流动相A:0.05%三氟乙酸-水溶液;流动相B:0.05%三氟乙酸-乙腈溶液;流速为：1.0 mL/min;柱温为：30℃;检测波长为：280 nm;进样量为：1 000μL;进行梯度洗脱。验证方法的专属性、精密性和耐用性,并确定检测限及定量限。同时采用建立的方法检测3批rhIL-12注射液的蛋白纯度。结果 rhIL-12注射液的保留时间为16.957 min,积分范围内可见单一目的峰;空白溶剂（流动相A、流动相B、制剂Buffer）在积分范围内均无吸收峰;rhIL-12注射液降解峰杂质与目的峰分离情况良好,分离度为2.58,理论塔板数为17 666;同一实验员连续6次检测的主峰保留时间、主峰面积及主峰百分比RSD...     

HPLC法测定36%咪鲜·丙环唑悬浮剂中有效成分和2,4,6-三氯苯酚

建立了36%咪鲜·丙环唑悬浮剂中有效成分咪鲜胺、丙环唑以及相关杂质2,4,6-三氯苯酚的高效液相色谱定量分析方法,采用甲醇–乙腈–水(pH=3,磷酸调节)体系为流动相,150mm×4.6 mm Kromasil C18(5 m)不锈钢柱,紫外检测器(225 nm)。结果表明,本方法线性相关系数为0.999 9(有效成分)、0.998 7(杂质),标准偏差均小于0.10,变异系数均小于3.8%,平均回收率在99.8%～102.4%之间。     

高效液相色谱法测定1,3,5-三(4-氨基苯氧基)苯的含量

提出了高效液相色谱法测定1,3,5-三(4-氨基苯氧基)苯(TAPOB)的分离方法。采用Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为V(甲醇)∶V(水)=80∶20,检测波长245 nm。在0.08~0.24 mg/m L范围内,方法线性良好(r=0.999 8),回收率为98.33%~113.02%,重现性RSD≤0.91%(n=5),可简便、快速地测定TAPOB的含量。