刺玫果多酚对HepG2细胞氧化应激损伤保护作用的研究

研究对刺玫果中天然抗氧化成分多酚、黄酮、Vc、β-胡萝卜素和番茄红素的含量进行测定。将刺玫果多酚用不同极性的溶剂连续分级萃取分为8部分。利用AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激损伤模型评价各组分的抗氧化能力。结果证明:刺玫果富含大量的抗氧化物质,乙酸乙酯提取物含有最高含量的多酚和黄酮、具有很强的清除细胞内ROS的能力。刺玫果提取物抗氧化能力与其多酚的含量具有一定的关系。研究为刺玫果抗氧化物质的确定和抗氧化能力的研究奠定了理论基础。     

东紫苏多酚提取物对HepG2细胞氧化损伤的保护作用研究

目的测定东紫苏（Elsholtzia bodinieri Vaniot）多酚提取物的抗氧化活性,并研究其对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法采用福林酚(Folin-Ciocalte)法测定东紫苏提取物的多酚含量,通过测定1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力（DPPH radical scavenging activity,DRSA）、铁离子还原/抗氧化能力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）、过氧化氢清除活性（hydrogen peroxide scavenging activity,HPSA）和总抗氧化能力（trolox equivalent antioxidant capacity,TEAC）来评价东紫苏多酚体外抗氧化活性,用MTT法测定不同浓度的东紫苏多酚对HepG2细胞的毒性作用,并确定3个无毒性作用浓度,研究其对HepG2细胞增殖抑制作用,以800 μmol/L的H2O2诱导HepG2细胞建立氧化应激损伤模型,通过测定HepG2细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量、抗氧化酶（superoxide dismutase,SOD;catalase,CAT）活力、谷胱甘肽（glutathione, GSH）含量以及丙二醛（malonicdialdehyde,MDA）含量的变化情况,研究在5.00、2.50和1.25μg/mL无毒性作用浓度下东紫苏多酚对HepG2细胞氧化损伤的保护作用。结果东紫苏多酚含量为（30.91±1.33）μmol/g DW,DRSA值为（17.45±0.54） μmol/g DW,FRAP值为（52.64±0.05） μmol/g DW,HPSA值为（27.12±0.17）μmol/g DW,TEAC值为（186.45±0.16）μmol/g DW。东紫苏多酚提取物能使受氧化损伤的HepG2细胞内ROS和MDA含量明显减少,并且能提高受氧化损伤细胞内GSH含量以及SOD和CAT活力。结论东紫苏多酚提取物具有较好的体外抗氧化活性,对HepG2细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用。     

加速溶剂萃取法提取小米多酚及其组分分析

[目的] 小米多酚具有多种生物活性,对人体健康有着积极的促进作用,本文旨在采用加速溶剂萃取方法构建快速高效的小米多酚提取方法。[方法] 研究中采用加速溶剂萃取方法,以小米粉为原料,通过加速溶剂萃取仪,分析乙醇体积分数、萃取温度和萃取时间对小米多酚含量的影响。通过响应面法对提取工艺进行优化,并通过超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS) 对所得小米多酚的组成及滋味成分进行分析。[结果] 结果表明,随着乙醇体积分数、萃取温度和萃取时间的增加,小米多酚含量呈现先增加后减少的趋势,其中萃取时间对小米多酚含量的影响最大,其次是乙醇体积分数,萃取温度对其影响最小;乙醇体积分数、萃取温度和萃取时间三者之间的两两交互作用对小米多酚含量的影响也较为显著,其中乙醇体积分数和萃取时间的交互作用对小米多酚含量的影响较大。小米粉经过UHPLC-QTRAP-MS/MS检测后,共鉴定出822种多酚类化合物,其中黄酮类化合物最多,占总多酚类化合物的47.20%;其次为酚酸类化合物,占42.09%。[结论]采用加速溶剂萃取法,乙醇体积分数为59%,萃取时间 9 min,萃取温度60 ℃,此条件下小米多酚含量最高达2.90mg/g。通过UHPLC-QTRAP-MS/MS方法,定性分析出822 种多酚类化合物,其中与滋味有关的有16种。     

酶法辅助提取小米多酚的工艺研究

以武安小米为原料,研究以木瓜蛋白酶和α-淀粉酶复合辅助提取多酚的最佳工艺参数,通过单因素实验和响应面优化实验分析液料比、酶用量、酶解时间、酶解温度对小米多酚提取率的影响,结果表明:液料比为14:1,双酶添加量为0.9%,酶解时间为2 h,酶解温度为40℃。这种处理条件下,小米多酚得率可达4. 83 mg/g,所建立的模型精确,能够准确预测多酚的提取率,除此之外,DPPH自由基消除能力为83.42%,抗氧化能为为3.67%,展现了优异的抗氧化能力。     

复合酶法提取小米多酚及其抗油脂氧化作用的研究

以东方亮1号小米为原料,采用复合酶法提取多酚类化合物并对其进行了抗油脂氧化作用的评价。在单因素试验基础上设计响应面试验优化了其工艺条件,结果表明:纤维素酶和果胶酶的最佳比例为7∶3,酶浓度为1.1%,酶解时间为88min,酶解温度为58℃,pH值为3.0。在此条件下,小米多酚得率为1.521%±0.004%。在抗油脂氧化的分析中,得出小米多酚和大豆油的最佳混合比例为0.02%。相同条件下,测定的小米多酚、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的抗油脂氧化作用为:TBHQ>小米多酚>BHA>BHT,这表明小米多酚对油脂的氧化能起一定的抑制作用,为天然提取物在调味品等食品行业的应用提供了一定的理论基础。     

茶碱及其复配多酚协同清除丙烯醛作用研究

目的 考察茶碱及结构相似的生物碱在模拟加工体系中对丙烯醛（acrolein, ACR）的清除活性并探究12种常见多酚与茶碱复配对其活性的影响。方法 通过高效液相色谱法分析模拟加工体系中茶碱及结构相似的生物碱对ACR的清除活性以及模拟生理条件下12种多酚与茶碱复配后反应体系中茶碱和ACR一加合产物（TP-ACR）含量的变化,并以表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate, EGCG）为代表,根据Chou-Talalay法则将茶碱与EGCG以1:50的比例进行复配, 计算联合作用指数,分析复配组分之间作用效果。结果 茶碱、副黄嘌呤、可可碱在模拟加工体系均有良好的ACR清除活性,茶碱的活性最佳,30min时可清除体系中79%的ACR。12种多酚中杨梅素、槲皮素、山奈酚、高良姜素和姜黄素可促进茶碱对ACR的清除作用,促进效果分别可达10.7%、26.8%、20.1%、19.4%、43.1%,而根皮素、表儿茶素、EGCG、阿魏酸、绿原酸、咖啡酸和白藜芦醇则抑制了茶碱的清除活性。茶碱与EGCG的添加浓度范围分别为0.05-0.5 μg/mL与2.5-25 μg/mL时联用在低温和高温条件下均可表现出较好的协同效应。结论 茶碱自身可在模拟加工条件下发挥良好的ACR清除作用,且可与多酚联用协同增效,从而提高其清除活性。     

小米多酚及其复配剂体系对花生油抗氧化作用的研究

选择Vc、VE、柠檬酸与小米多酚进行复配,以花生油的过氧化值、茴香胺值和全氧化值为指标,探究小米多酚对花生油酸败的抑制作用,并与常见的人工抗氧化剂进行对比。采用气相色谱-甲酯化法对添加最佳复配抗氧化剂的花生油脂肪酸成分进行测定。得出最佳复配体系为2%聚甘油酯+0.08%小米多酚+0.04%Vc,其抗氧化效果为最佳复配组>TBHQ>BHT。同时,花生油中加入小米多酚复配抗氧化剂在一定程度上抑制了不饱和脂肪酸向饱和脂肪酸的转化,抑制率达28.23%。     

刺梨多酚对丙烯酰胺致肝脏氧化损伤的保护作用

目的 探究刺梨多酚(Rosa roxburghii Tratt. polyphenols, RRTP)对丙烯酰胺致肝脏氧化损伤的缓解效果及可能影响机制。方法 采用丙烯酰胺诱导小鼠肝脏氧化损伤模型, 通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肝脏组织病理情况; 运用试剂盒测定血清中谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)活性, 肝脏中活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)活性; 蛋白质免疫印迹法检测肝脏组织中核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2)和血红素加氧酶-1 (heme oxygenase-1, Ho-1)蛋白相对表达量。结果 与模型组相比, RRTP能够显著降低血清中ALT、AST活性和肝脏中ROS和MDA含量, 提高SOD和GSH活性, 并上调Nrf2和Ho-1蛋白表达量, 改善肝脏组织病理现象。结论 RRTP对丙烯酰胺诱导的肝脏毒性具有较好的改善作用, 其作用机制可能与Nrf2/Ho-1信号通路有关。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

小米多酚的分离纯化及其组分分析

使用AB-8大孔树脂对提取的小米多酚分离纯化,对其静态与动态吸附和解吸动力学进行研究,通过计算得出AB-8大孔树脂对小米多酚的吸附量为（12.70±0.95）mg/g,吸附率为（42.10±0.98）%,解吸率为（80.63±0.73）%,洗脱率为（84.00±1.22）%,纯化后多酚纯度由31.80%提高到72.80%。采用化学鉴定法、红外光谱法、紫外-可见光谱法、液相色谱-质谱联用法对纯化后的小米多酚进行组分分析,并初步推断出小米多酚中可能含有黄酮类物质,主要含有的化合物可能为羟基咖啡酸、氯化矢车菊素-3-O-半乳糖苷和对香豆酰苹果酸,且这三种物质均为谷物中最为常见的多酚类化合物。     

提取发芽粟米多酚工艺研究

研究发芽对粟米中多酚含量变化影响,并采用响应面法优化超声波提取发芽粟米多酚工艺条件,在单因素试验基础上,选取乙醇浓度、提取时间和料液比为自变量,以总酚得率为响应值,设计Box–Behnken试验;结果表明,粟米中总酚含量在发芽过程中得到显著提高(ρ<0.05);提取总酚最佳工艺条件为:乙醇浓度为70%、提取时间为8 min、料液比为1∶30,在此条件下,提取总酚得率为2.65 mg/g。     

Finger millet polyphenols: Optimization of extraction and the effect of pH on their stability

Finger millet, one of the minor cereals, is known for several health benefits and some of the health benefits are attributed to its polyphenol contents. Investigations of suitable solvents for extraction of polyphenols and their stability, during changes of pH and temperature, were carried out. Histochemical examination of the millet kernels, and also analysis of the seed coat and the endosperm fractions of the millet for the polyphenol contents, revealed that nearly 90% of the polyphenols were concentrated in the seed coat tissue. In view of that, the polyphenol contents of the seed coat fraction of the millet were extracted with different polar and non-polar solvents, and it was observed that 1% HCl–methanol was very effective for extraction of the millet polyphenols. Accordingly, the polyphenols were extracted with acidic methanol and the polyphenols obtained were examined for pH and temperature stability. The phenolic contents (6.4 ± 1.0%) of the extract remained constant at highly acidic to near neutral pH (6.5) but decreased gradually to 2.5 ± 0.3% as the alkalinity increased to pH 10. The increase in pH resulted in precipitation of some of the extracted matter, and this increased from 4 ± 0.5% to 40 ± 3% of the extracted matter, as the pH increased from 1 to 10. But, the polyphenol contents of the extract were stable to the changes in the temperature of the extract. Fractionation of the polyphenols extracted by high performance liquid chromatography (HPLC) showed that the analytes were derivatives of benzoic acid (gallic acid, proto-catechuic acid, and p-hydroxy benzoic acid) and cinnamic acid (p-coumaric acid, syringic acid, ferulic acid and trans-cinnamic acid). However, in a highly alkaline condition (pH 10) of the extract, only gallic acid and proto-catechuic acid were detected.     

不同溶剂提取穇子多酚的抗氧化性及对龙眼保鲜作用的研究

本文采用不同溶剂提取穇子多酚,并对其抗氧化性和保鲜作用进行了研究。结果表明：穇子多酚消除DPPH自由基的能力大于BHT接近Vc;还原能力接近BHT与Vc;低浓度条件下对羟基自由基的清除能力均低于BHT与Vc,高浓度时则接近BHT。经过穇子多酚处理的龙眼果实在可滴定酸含量方面优于茶多酚和Vc处理组,在失重率、腐烂率、Vc含量、还原糖和总糖含量方面接近于茶多酚和Vc。整体而言,穇子多酚都表现出较好的抗氧化活性和保鲜作用,其中以酸性乙醇提取的效果最好。可作为天然保鲜剂进行进一步开发与利用。     

黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用

研究部分黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用。建立AAPH诱导HepG2细胞氧化应激的模型,比较对照组和实验组细胞内的氧化自由基ROS的含量。结果表明,用不同浓度的黄酮处理HepG2细胞1h后,经过相同浓度的氧化剂作用后,细胞内自由基ROS的含量相对空白对照组均发生变化。这些选择性的黄酮对于AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激具有促进或者抑制作用,其作用机制可能清除HepG2细胞内ROS以及与细胞内氧化酶和抗氧化酶系统的作用有关。