酪蛋白抗氧化肽的胃肠消化稳定性研究

目的:研究酪蛋白抗氧化肽的活性在模拟胃肠消化过程中的稳定性。方法:采用脱脂乳粉为原料提取酪蛋白,经酶解,初步分离得到酪蛋白抗氧化肽。以氧自由基清除能力(ORAC)和2,2′-联氮-双-(3-乙基苯并噻错啉-6-磺酸)(ABTS)自由基清除率为抗氧化指标,采取单因素试验,体外模拟胃肠消化模型研究酪蛋白抗氧化肽的胃肠消化稳定性。结果:酪蛋白抗氧化肽经胃蛋白酶消化后其抗氧化活性显著降低,而在随后的模拟肠消化中抗氧化活性逐渐回升至消化前的水平。在模拟胃消化阶段,胃液pH对于酪蛋白抗氧化肽的抗氧化活性没有显著影响,酶与底物比(E/S)越小,酪蛋白抗氧化肽活性保留得越多;在模拟肠消化阶段,底物浓度越大,其活性恢复得越缓慢。结论:酪蛋白抗氧化肽在模拟胃肠消化过程中的稳定性研究,为日常膳食中生物活性肽的合理搭配提供了理论依据。     

卵白蛋白体外模拟胃肠道消化产物的抗氧化活性及其结构表征

为探究蛋白经体外模拟胃肠道消化后消化产物的抗氧化活性变化规律,以卵白蛋白为研究对象,测定消化产物的体外抗氧化活性,然后利用H2O2构建Caco-2细胞氧化损伤模型,测定细胞存活率、活性氧(ROS)水平,探究消化产物的细胞抗氧化活性。利用电喷雾轨道阱串联质谱鉴定抗氧化活性最强组分(分子质量1 ku的产物)的抗氧化肽。结果表明:卵白蛋白经体外模拟胃肠道消化后,产物的体外抗氧化活性增强并具有浓度依赖性。其组分分子质量越小,抗氧化活性越强。分子质量1 ku的产物具有最强的抑制细胞氧化损伤和清除活性氧能力。质谱鉴定出的3条肽序列均具有较强的抗氧化活性,序列分别为CFDV、CVSP和MPFR。以上结果显示,体外模拟胃肠道消化对卵白蛋白消化产物的抗氧化活性提高以及抗氧化活性肽段的释放具有积极作用。     

苦荞蛋白模拟消化过程抗氧化活性相关模型分析

为探索苦养蛋白质体外消化过程中的动力学特性及其抗氧化活性变化;采用胃蛋白酶、胰蛋白酶,模拟人体胃肠道消化;建立苦养蛋白质体外消化动力学模型:从6种抗氧化指标中选择与水解度相关性最好的指标;在动力学模型基础上,建立苦养蛋白质体外消化过程中抗氧化活性变化的相关模型.结果表明:苦荞蛋白质模拟消化动力学模型所得水解度指标与抗氧化活性指标中H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血抑制率有较强的相关性,相关系数ra0.01=0.98,以此指标建立苦养蛋白质模拟消化相关模型,建立模型与实际观测结果符合良好.     

苦荞抗氧化肽AFYRW稳定性研究

为研究苦荞抗氧化肽AFYRW在生产加工、胃肠消化中的稳定性以及细胞毒性,以羟自由基(·OH)清除率和DPPH自由基清除率作为评价指标,研究pH值、温度、反复冻融、金属离子以及胃肠消化对苦荞抗氧化肽AFYRW体外抗氧化活性的影响,以红细胞溶血率评价细胞毒性。结果表明:高温、反复冻融、Na+、Mg²⁺对抗氧化肽AFYRW的抗氧化活性无显著影响;Ca²⁺会降低抗氧化肽AFYRW的DPPH自由基清除率,K+会提高抗氧化肽AFYRW的·OH清除率;体外模拟胃肠消化后或者pH值升高都会降低抗氧化肽AFYRW的抗氧化活性;苦荞抗氧化肽AFYRW对红细胞无溶血作用。综上苦荞抗氧化肽AFYRW具有良好的抗氧化活性,对红细胞无溶血作用,在生产和储存过程中,应避免过碱、接触Ca²⁺。     

辣木籽抗氧化肽的制备及其对氧化损伤红细胞的保护作用

采用酶法制备辣木籽水解物,以抗氧化活性为跟踪指标,通过乙醇分级沉淀和大孔树脂柱层析法定向制备辣木籽抗氧化肽,构建模拟胃、肠道消化模型,评价辣木籽抗氧化肽胃、肠道消化物的氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）,利用超高效液相色谱-四极杆-高分辨飞行时间串联质谱技术解析消化物中多肽组成与结构,建立2,2’-偶氮二异丁脒盐酸盐（2,2’-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride,AAPH）诱导大鼠红细胞氧化损伤模型,研究经胃、肠道消化后的辣木籽抗氧化肽对氧化损伤红细胞溶血的抑制作用。结果表明：采用20%（体积分数,下同）、40%乙醇分级沉淀辣木籽水解物去除杂质,取60%乙醇分级沉淀组分进行柱层析分离纯化,经水、20%乙醇、40%乙醇洗脱除杂,采用60%乙醇洗脱,定向制备得到富含抗氧化氨基酸、疏水性氨基酸的辣木籽抗氧化肽（蛋白质量分数92.84%,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力、ORAC分别为39.95、1454.57 μmol/g）;辣木籽抗氧化肽经模拟胃、肠道消化后,抗氧化活性增强,释放出更多短肽段,包括11条二肽、5 条三肽;辣木籽抗氧化肽消化物、Gln-Met、Leu-Phe通过清除胞内活性氧,下调丙二醛含量与超氧化物歧化酶活力,拮抗AAPH所致氧化应激,有效抑制氧化损伤红细胞发生溶血。     

大鼠肠囊外翻法分析核桃肽吸收特性及抗氧化肽筛选鉴定

本研究通过大鼠肠囊外翻法探讨了<3 kDa核桃蛋白肽模拟胃肠消化产物的吸收特性,以抗氧化能力(DPPH自由基清除率、ABTS⁺自由基清除率、Fe²⁺螯合率)和活性肽吸收率为指标筛选核桃肽在肠道吸收的最优条件,并应用模拟分子对接技术和Nano-HPLC-MS/MS技术对吸收肽组分进行筛选和鉴定,得到能够以完整形式被吸收并发挥抗氧化活性的新型核桃源肽。结果表明:当核桃肽消化产物吸收浓度为6 mg/mL,吸收时间为2 h时,其抗氧化活性最高且在小肠吸收率最高:进一步通过Nano-HPLC-MS/MS鉴定结果表明0.5～1 kDa活性肽数量最多,其中位于C端/N端氨基酸主要集中在Pro、Thr、Leu,鉴定出33条活性肽能够以完整形式被吸收,穿过肠道屏障;最后通过分子对接技术与DPP-Ⅳ相结合,获得三条结合能最低的活性肽NLRFPL、NPDDEFRPQ、KGHLFPN,其结合能分别为-8.8、-8.6、-8.6 kal/mol,其中KGHLFPN抗氧化能力最强。综上,<3 kDa核桃肽模拟胃肠道消化能够释放抗氧化活性更高且能够被小肠吸收的...     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

模拟消化对乳清肽结构和抗氧化活性的影响

为开发乳清肽在抗氧化食品方面的应用,该研究通过酶解乳清蛋白获得乳清肽,以分子质量分布、紫外全波长扫描及圆二色光谱表征乳清肽在经模拟胃肠液消化后结构方面的变化;对比模拟胃肠液消化前后乳清肽的DPPH自由基清除率、ABTS＋自由基清除率、铁离子还原能力（ferric ion reducing antioxidant power,FRAP）及氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）。结果表明,乳清肽主要由分子质量为150 Da～1 000 Da的小肽组成,所占比例均高于80%;紫外全波长扫描显示模拟胃肠液消化以后乳清肽的氨基酸芳香杂环电子跃迁发生变化;圆二色光谱结果表明乳清肽对胃蛋白酶和胰蛋白酶的消化均具有一定的稳定性。此外4个抗氧化指标中除了DPPH自由基清除率外,其余3个指标在模拟胃肠液消化后抗氧化活性均有所提高,ORAC值在经模拟胰液消化后提升最明显（p＜0.05）。     

丰年虫水溶性蛋白的分离纯化及体外抗氧化性研究

目的:对丰年虫水溶性蛋白进行分离纯化,获得体外抗氧化活性最好的水溶性蛋白组分,并测定其分子质量。方法:丰年虫水溶性粗蛋白经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析分离纯化,对纯化后的蛋白质进行体外抗氧化活性的研究,利用SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子质量。结果:丰年虫水溶性蛋白经DEAE-Sepharose FF离子交换层析,梯度洗脱得到4个洗脱峰(峰1～4),峰2的体外抗氧化活性最强。峰2经Sephadex G-100凝胶层析分离纯化得到3个洗脱峰(峰2-1～2-3),峰2-1的体外抗氧化活性最强。利用SDS-PAGE对峰2-1进行鉴定,得到单一蛋白条带,纯度较高,蛋白分子质量为82.47kD。体外抗氧化活性比较,峰2-1远远强于水溶性粗蛋白。结论:蛋白组分峰2-1体外抗氧化活性最强,为单一蛋白组分,其分子质量为82.47kD。     

杨梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性研究

研究杨梅蛋白模拟体内消化后形成的活性肽所具有的抗氧化及降血糖活性。采用碱溶酸沉法提取杨梅粗蛋白,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解,获得酶解产物,经分子质量截留管获取不同分子质量段多肽,探究其总抗氧化、抑制羟基自由基、抗超氧阴离子、DPPH自由基清除能力和对α-葡糖糖苷酶的抑制能力。进一步分离纯化获取最佳活性肽段,研究其分子质量及氨基酸组成。结果表明:杨梅蛋白酶解肽具有良好的抗氧化和α-葡糖糖苷酶抑制活性,且活性最佳分子质量段为MW5 ku。此段多肽经G-25、G-10葡聚糖凝胶两步分离纯化所得小肽分子的分子质量分布范围为174~561 u,共由9种氨基酸组成,其中His、Arg、Asp和Ile4种氨基酸含量最高。