蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

金属离子对蒜氨酸酶活性的影响

旨在对大蒜中的蒜氨酸酶和蒜氨酸进行提取的基础上,研究不同金属离子对蒜氨酸酶活性的影响。研究表明,大多数金属离子对蒜氨酸酶活性有影响,其中Mg2 、Fe3 、Ca2 、Fe2 、Mn2 对蒜氨酸酶有明显的激活作用,且这种激活作用在有甘油、葡萄糖、蔗糖等多羟基化合物存在的条件下激活效果更好;Cu2 对蒜氨酸酶有抑制作用。     

香葱中蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质

对香葱中蒜氨酸酶进行分离纯化并研究其酶学性质。通过均浆、离心、硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G200凝胶过滤层析技术分离纯化得到纯度较高的蒜氨酸酶,并利用SDS-PAGE电泳对其纯度进行鉴定。结果表明,经分离纯化可得纯化倍数为19.6倍的蒜氨酸酶,酶比活力为11.44U/mg,酶活回收率为32.1%,达到电泳纯,其亚基的分子质量约为54.5ku。纯酶的最适反应温度为45℃,最适pH7.0,以S-甲基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为45.31mmol/L,Vmax为40.32μmol/(mg·min)。     

金属离子对蒜氨酸酶活性的影响

旨在对大蒜中的蒜氨酸酶和蒜氨酸进行提取的基础上,研究不同金属离子对蒜氨酸酶活性的影响。研究表明,大多数金属离子对蒜氨酸酶活性有影响,其中Mg2+、Fe3+、Ca2+、Fe2+、Mn2+对蒜氨酸酶有明显的激活作用,且这种激活作用在有甘油、葡萄糖、蔗糖等多羟基化合物存在的条件下激活效果更好;Cu2+对蒜氨酸酶有抑制作用。      

一步亲和纯化蒜氨酸酶及其酶学性质研究

以自制S-烷基-L-半胱氨酸为配基的亲和凝胶直接从独头蒜粉碎液中提取蒜氨酸酶.用自制亲和凝胶吸附蒜氨酸酶后,考察含0.2 mol·L-1葡萄糖溶液的洗脱效果.利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验,并研究温度、pH和底物浓度对酶活性的影响.结果表明,利用葡萄糖溶液洗脱,得到8.29倍的纯酶.而阴性对照纯化倍数为3.78倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为50 kDa和44 kDa.以合成的蒜氨酸为底物,蒜氨酸酶的最适温度是40℃,最适pH4.92,Kin为19.795μmol·mL-1,Vmax=8.446 μmol·mg-1·min-1.     

超声波条件下蒜氨酸酶性质研究

对新鲜大蒜中的蒜氨酸酶进行分离、纯化,研究超声波条件下已纯化的蒜氨酸酶的酶学性质。研究结果表明,最佳超声波作用条件为频率135 kHz、功率110 W。在该条件下,蒜氨酸酶的最适温度35℃,最适pH 6.5,在20～40℃温度范围酶活性较稳定;Na+、Ca2+、Fe2+、Fe3+、Mn2+对蒜氨酸酶的活性有激活作用,K+、Mg2+、Cu2+抑制酶的活性;0.025 mmol/L外源PLP和0.5 mmol/L L-半胱氨酸对蒜氨酸酶的活性有促进作用。     

蒜氨酸酶的分离纯化及其动力学特性

采用 (NH4 ) 2 SO4 盐析、SephadexG 2 0 0凝胶过滤和ConA Sepharose亲和层析方法对蒜氨酸酶进行了部分纯化 ,并研究了其酶动力学特性 ,结果表明其最适反应温度为 3 0℃ ,最适pH值为6 2 4,以蒜氨酸为底物 ,最大反应速度Vmax =1 2 0u/mg(蛋白质 ) ,米氏常数 Km =6 0 2× 1 0 - 3mol/L。文中同时研究了抑制与激活剂对蒜氨酸酶活性的影响     

洋葱中蒜氨酸酶的分离纯化

研究以国产红皮洋葱为原料,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-200HR柱层析、Con A-Sepharose4B亲和层析等处理,对洋葱中的蒜氨酸酶进行了分离和精提,得到纯化8.05倍、回收率49.5%的蒜氨酸酶,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,测定洋葱中蒜氨酸酶亚基分子量为50.2ku。     

大蒜植株中蒜氨酸酶的纯化方法研究

以新鲜大蒜植株为原料,采用pH7.0的Na+/K+磷酸缓冲溶液浸提蒜氨酸酶,分别研究了硫酸铵沉淀法、聚乙二醇(PEG8000)沉淀法、超滤条件和SephadexG-75色谱柱对蒜氨酸酶的纯化效果。PEG8000沉淀法得到蒜氨酸酶的纯化倍数为5.42,硫酸铵沉淀法得到蒜氨酸酶的纯化倍数为0.60。最佳沉淀条件为:先加入PEG8000至其浓度达到15%(m/v),离心,上清液中继续加入PEG8000至终浓度为25%(m/v),收集沉淀。截留分子量为30ku的超滤膜,在0.1MPa下循环超滤两次,此时蒜氨酸酶纯化倍数为超滤前的1.20倍。SephadexG-75色谱柱可有效地分离蒜氨酸酶峰和杂蛋白峰。     

蒜氨酸和蒜氨酸酶的制备及抑菌作用的研究

从大蒜(Allium Sativum L.)分离纯化了蒜氨酸酶和蒜氨酸,对它们抑菌作用的研究表明,蒜氨酸酶对一些致病的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌有较强抑制作用,尤其对白色假丝酵母菌(Candida albicaus)和克柔假丝酵母菌(Candida krusei)两种真菌有明显的抑制作用。     

金属盐离子对纤维素离子凝胶性能的影响研究

本研究利用竹纤维素构建导电凝胶的网络骨架,通过添加离子液体形成复合竹纤维素离子凝胶(CCIGel),并引入金属盐离子强化纤维素离子凝胶的性能。结果表明,ZnCl₂、CaCl2和FeCl3可激发纤维素-离子液体凝胶的成形,且CCIGel-Zn和CCIGel-Ca的机械性能均优于CCIGel-None;添加AlCl3的体系无法形成凝胶。其中质量分数15%的ZnCl₂制备的CCIGel-Zn性能最为优异,其拉伸强度、韧性和离子电导率分别高达1.344 MPa、29.85 MJ/m3和47.1 mS/cm,透光率为86.9%。     

金属离子对花生分离蛋白凝胶形成特性的影响

以花生仁为原料,用碱提酸沉法提取花生分离蛋白,讨论温度在90℃、pH9、花生分离蛋白质量浓度为14g/100mL 时,不同浓度的NaCl、MgCl2、CaCl2 和CuSO4 对花生分离蛋白形成凝胶的影响。实验表明,CaCl2是较好的凝固剂,浓度为0.06mol/L 时,形成凝胶硬度高,形成时间短,但形成的凝胶胶粒较粗。     

蒜氨酸酶的光谱特征研究

本实验采用Sephacryl S-200 凝胶柱对新鲜大蒜中的蒜氨酸酶进行了分离纯化,并对纯化后的蒜氨酸酶的紫外 - 可见光谱、荧光发射光谱和圆二色性等光谱学特性进行了研究。结果表明,蒜氨酸酶的α- 螺旋结构大约占27%～30%,几乎不存在β- 折叠结构,β- 转角结构大约占 30% 左右,无规卷曲所占比例大约占 40% 左右。     

造纸白水中金属离子对浆料Zeta电位的影响

利用原子吸收光谱法测定文化用纸纸机网下白水中金属离子含量,考察金属离子含量对浆料与填料留着率以及浆料Zeta电位的影响.研究结果表明,白水中积累的3种主要金属离子分别为Fe3+、Mn2+和Ca2+,其含量分别为0.088、0.035和87.2mg/L;白水中积累的金属离子有助于提高浆料与填料的留着率;白水中低含量的Fe3+和Mn2+对浆料Zeta电位的影响较小,而高含量的Ca2+对浆料Zeta电位的影响很大;随Ca2+含量的增加,浆料Zeta电位急剧升高;在Ca2+一定量的条件下,随阳离子聚丙烯酰胺(CPAM)用量的增加,浆料Zeta电位也会升高,从而增强了CPAM对浆料与填料的絮凝作用.     

金属离子含量对酶脱墨效果的影响

研究了脱墨浆中添加Fe3 、Ca2 、Mg2 、Cu2 、Al3 、Mn2 、NH4 等离子的无机盐对酶脱墨效果的影响。结果表明,外加金属离子对酶脱墨效果均会产生不利影响,其中Al3 、Mg2 、Cu2 等对酶的脱墨行为有抑制作用,对纸浆中残余油墨含量的影响大小次序为Al3 >Mg2 >Cu2 ;Fe3 、Mn2 、Ca2 、NH4 对酶脱墨有催化或激活作用,外加金属离子促进酶脱墨作用的大小次序是Fe3 >Mn2 >Ca2 >NH4 ,但Fe3 对纸浆白度很不利。在Mn2 用量0.6%、NH4 用量0.2%、Ca2 用量1.2%时,会使酶脱墨效果得到改善。酶脱墨浆经过螯合剂处理,其白度和残余油墨含量都有很大改善,白度比未经螯合处理的酶脱墨浆高近10个百分点,残余油墨含量低60 mm2/g左右。     

金属离子修饰糖类化合物的研究进展

糖类化合物改性能够增加糖类物质的功能和应用范围。文中对金属离子修饰糖类化合物的方法 ,修饰产物的结构性质分析及其应用进行了综述 ,指出通过金属离子修饰糖类化合物已成为糖修饰的一个重要途径。