球孢虫草(Cordyceps bassiana)活性成分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较。结果表明,球孢虫草胞外多糖（EPS）由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖（IPS）由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0。球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草。通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据。      

球孢虫草(CCordycepa bassiana)活性威分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较.结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0.球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草.通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据.     

黄芪渣中国拟青霉固体培养及发酵产物分析

以黄芪渣培养冬虫夏草菌——中国拟青霉,研究固体发酵条件及发酵产物成分含量变化。结果表明:固体发酵的温度为20℃,培养基含水量60%,pH自然,氧气充足,无需光照条件下适宜生长,发酵时间为45 d。虫草黄芪粉粗多糖含量为10.32%,比黄芪废弃物中粗多糖含量增加47%;甘露醇含量为2.38%,比黄芪废弃物中甘露醇含量提高11.5倍;水溶蛋白含量为1.72%,比黄芪废弃物高2.80倍。     

响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇

以兰坪虫草无性型（兰坪被毛孢）固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。      

响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇

以兰坪虫草无性型(兰坪被毛孢)固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。     

戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化

以大米为原料进行戴氏虫草真菌发酵，通过优化发酵条件提高戴氏虫草多糖含量。采用单因素实验和多因素实验优化戴氏虫草产多糖的固体发酵条件。Plackett-Burman试验结果表明，影响戴氏虫草多糖含量的主要因素是发酵温度、接种量和料水比。最陡爬坡试验和Box-Behnken试验得出产戴氏虫草多糖的最适条件为：发酵温度25℃，接种量8%，料水比（g/mL）=1:1.5，基质重量10 g，发酵时间5 d，得到的戴氏虫草多糖含量为5.31%±0.11%，与理论值的误差为0.93%±1.8%。本文旨在为戴氏虫草多糖的工业化生产提供理论依据，同时为其它虫草真菌固体发酵生产虫草多糖提供理论参考。     

巴西虫草胞内多糖培养参数的优化研究

为了提高巴西虫草深层液体发酵胞内多糖的产量,本研究采用二次正交旋转组合设计方法,研究了接种量、培养时间、装液量和种子培养时间这四个因素对巴西虫草胞内多糖发酵的影响;建立了二次回归模型,并使用DPS软件进行了条件寻优,确定了巴西虫草胞内多糖发酵的最优工艺参数。结果表明,所得回归方程达到极显著水平,无失拟因素存在。最优发酵工艺为接种量14%、培养时间84h、装液量45m L、种子培养时间60h,在此条件下虫草多糖的产量为7.50mg/m L,较优化前提高了12.4%。在优化条件下,进行三次验证实验,实验值与模型预测值基本符合,说明了二次正交旋转组合设计预测结果的准确性,证实了该方法可用于巴西虫草胞内多糖深层液体发酵的工艺参数优化,为其工业化生产奠定了基础。     

杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的优化提取及测定

目的:探讨杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的最优提取条件,并比较了不同光照时长对虫草素含量的影响,为其工艺条件的优化和综合利用提供依据。方法:采用单因素结合响应曲面法优化虫草素的水浴提取条件,高效液相色谱法测定虫草素含量。结果:最优水浴提取条件为:浸提时间6.59 h、浸提温度81.9℃、料液比1∶90,此条件下虫草素含量为6.0143 mg/g;不同光照时长条件下虫草素含量为3.8988~11.9629 mg/g,不同光照时长间差异具有统计学意义(p=0.000)。结论:实验确定了虫草素水浴提取的最优条件,并得出不同光照时长对虫草素含量有显著影响,为进一步优化杂粮蛹虫草菌丝共生体的培养条件提供参考依据。      

细脚虫草多糖液体发酵及分离纯化工艺研究

用Box-Behnken中心组合试验设计和单因素试验对虫草多糖发酵工艺、水提醇沉工艺及脱蛋白工艺进行优化。结果表明:细脚虫草最佳发酵工艺条件为葡萄糖33.3 g/L、蛋白胨29.2 g/L、接种量3.9%。胞外多糖最佳提取工艺条件为浓缩,加3倍乙醇,pH为6.0,沉淀24 h;胞内多糖最佳提取工艺条件为浸提比(m_菌丝∶V_水)1∶40 (g/mL),提取时间90 min,浸提次数2次,浸提温度80 ℃。多糖纯化中Sevage法脱蛋白的最佳工艺为氯仿与正丁醇配比(V_氯仿∶V_正丁醇)4∶1、Sevage试剂与发酵液配比(Vsevge_试剂∶V_发酵液)1∶2、振摇时间15 min、脱蛋白次数3次。优化后胞外多糖产量提高了37.89%,胞内多糖产量提高了24.59%,纯化后蛋白脱除率在75%以上。     

冬虫夏草液态发酵菌丝体中化学成分分析

对冬虫夏草(Cordyceps sinensis)液态发酵菌丝体的主要化学成分进行了分析.冬虫夏草液体发酵菌丝体中粗蛋白和粗脂肪的含量分别为24.53%和6.69%;腺苷含量为0.3755mg/g,D-甘露醇含量为88.80mg/g,胞内多糖含量为133.9mg/g,麦角甾醇含量为1.80mg/g.冬虫夏草液态发酵菌丝体主要成分含量与天然虫草相似.     

虫草液体发酵的非营养条件优化与免疫功能研究

采用中心组合设计,以菌丝体生物量为考察指标对虫草液体发酵的非营养条件进行优化,同时对菌丝体提取物的免疫功能进行了探讨。研究结果表明:当培养温度为22.64℃、pH为6.18、培养时间为7.36d时,菌丝体产量达到21.73g/L;并发现其水提取物在50～200μg/mL的剂量范围内,能够提高巨噬细胞吞噬能力和促进小鼠脾细胞的增殖,具有一定的免疫调节作用,是一种潜在的具有免疫调节功能的食品资源。     

虫草菌丝体多糖的提取方法

对虫草属真菌的干燥和新鲜菌丝体中多糖提取方法进行了研究,比较了不同的溶液离子组成和浓度下多糖的溶出情况,并与传统的热水提取方法进行了比较。在菌丝体被烘干,细胞结构被破坏的情况下,离子状态对于多糖溶出的影响相对较小,10%NaCl可以增加10%左右的多糖提取率,10%NaOH作用效果最好,可以提高提取率67.5%。而新鲜菌丝体由于细胞结构的完整性,离子组成和浓度对于多糖提取率的影响十分显著,5%NaOH的多糖提取率最高,虫草菌丝体中碱溶性多糖的含量明显高于酸溶性多糖。     

野生蝉花与发酵菌丝体挥发性化合物分析

为研究不同提取方法对野生蝉花与发酵菌丝体挥发性化合物种类及含量的影响,首先通过ITS基因序列分析、菌落及产孢结构的形态特征对菌株GZU1205241进行鉴定。然后通过顶空固相微萃取（HS-SPME）和水蒸气蒸馏对野生蝉花和发酵菌丝体的挥发性化合物进行提取,并利用气相色谱-质谱（GC-MS）对两者挥发性化合物进行了测定。结果表明,菌株GZU1205241为蝉棒束孢菌。野生蝉花和发酵菌丝体分别含有56和58种挥发性物质,其中25种为共有物质。野生蝉花主要以酸类（90.08%）物质为主,其中油酸的相对含量达到了45.09%,棕榈酸的含量为21.18%,亚油酸的含量为9.44%。发酵菌丝体中主要也以酸类物质（86.57%）物质为主,其中棕榈酸的相对含量达到了38.44%,亚油酸的相对含量达到了18.58%,油酸的相对含量为12.83%。两种方法获得的野生蝉花及发酵菌丝体的挥发性成分种类及相对含量上有明显差别,水蒸气蒸馏法鉴定出的挥发性成分较多,而顶空固相微萃取鉴定出的挥发性成分比较少。但不论是蒸气蒸馏法还是顶空固相微萃取,野生蝉花及发酵菌丝体的挥发性成分都是以脂肪酸为主。      

冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体液体培养基筛选

以冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体生物量为主要指标,采用正交设计方法对其菌丝体液体培养基进行筛选,比较3种培养方法对菌丝体的影响.结果表明其最适培养基配方为葡萄糖5.00g/L,蔗糖5.00g/L,酵母粉0.25g/L、黄豆粉5.00g/L(浸提液),KH2PO41.50g/L,MgSO4·7H2O 0.50g/L,VB1 4g/L,pH自然.25℃培养,周期156h,其菌丝体干重生物量可达3.51g/L.持续摇动培养法获得菌丝体生物量最多,利于菌体的规模发酵生产;动静相间法次之;静止法获得量较少.动静相间法所培养的菌丝体更有利于原生质体的制备和诱变育种.     

液体发酵时间对2种虫草固体栽培的影响

探索蛹虫草和高雄山虫草固体培养时种子液的最佳接种时间,以期为其的工业化生产提供科学依据.采用常规方法接种和计数,以液体发酵的菌丝干重、菌丝段和固体培养基上的菌丝覆盖率为指标,结果表明,2种虫草在液体发酵条件下,第3d～6d为菌株快速生长期,活力旺盛,适合转接,尤其是发酵4d的种子液接种到固体培养基上其生长速度最快,生长状况最好,长满固体培养基的时间最短.     

泰山虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分的TLCS分析

以腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、虫草素及次黄嘌呤为指标,测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中相应成分的含量,探索泰山虫草代替天然冬虫夏草开发药物或保健食品的可能性。采用80%乙醇超声提取,在GF254硅胶板上点样后,以薄层色谱扫描法(TLCS)测定上述各种成分的含量。首次证明泰山虫草菌丝体核苷类及次黄嘌呤等有效成分含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤含量分别是冬虫夏草的8.25倍、3.76倍、11.8倍和1.55倍。2种虫草中有效成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤>虫草素。说明泰山虫草可以作为冬虫夏草代用品进行综合开发利用。TLCS法简捷快速,重现性、稳定性良好,能有效地对虫草中的有效成分进行定性定量分析。     

蓝光对蛹虫草多糖含量的影响

蛹虫草菌种在两种不同的液体培养基(其中一种添加奶粉)中经摇发酵培养后,再在静置培养过程中以蓝光照射蛹虫草菌丝体,研究蓝光照射对其产生胞内和胞外多糖含量的影响。结果表明,在不含有奶粉的液体培养基表面生长蛹虫草菌丝体,其胞外多糖和胞内多糖含量受蓝光照射的影响而降低;而在培养基中加入奶粉以后,蓝光照射时也可降低胞内多糖的相对含量,但使蛹虫草胞外多糖含量稍有增加。     

冬虫夏草原生质体制备与再生条件的研究

采用正交分析方法,对影响冬虫夏草菌株原生质体制备与再生的主要因素进行研究。结果表明,最佳条件组合为培养3d 的菌丝体,在2.0% 溶壁酶+1.0% 蜗牛酶的酶液中,0.6mol/L 的KCl 作为原生质体制备的渗稳剂,0.6mol/L 的甘露醇作为再生培养基的渗稳剂,32℃酶解2h。在此条件下,原生质体得率可达到2.98 × 108/ml,再生率可达到42.09 × 10-2。     

细脚拟青霉甘露醇含量的测定

采用比色法在波长412nm处测定细脚拟青霉菌丝体及固体培养物中甘露醇含量。考察提取溶剂、提取温度、提取时间对甘露醇提取率的影响,得到甘露醇最佳提取条件,以蒸馏水为提取溶剂,菌丝体在60℃时提取60min,固体培养物在100℃时提取60min;对测定方法进行回收率、精密度、稳定性实验,菌丝体中甘露醇回收率为99.94%,相对标准偏差为0.74%,精密度实验相对标准偏差为0.80%,60min内光密度值稳定,固体培养物中甘露醇回收率99.79%,相对标准偏差为1.17%,精密度实验相对标准偏差为1.00%,60min内光密度值稳定。     

虫草与富硒虫草多糖的体外抗氧化活性

采用Fenton法和邻苯三酚自氧化法测定虫草和富硒虫草多糖对.OH、O2-.和H2O2的清除率。结果表明:虫草多糖对O-2.和H2O2的清除能力依次为富硒虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞外多糖>虫草胞内多糖,而对.OH的清除能力依次为:富硒虫草胞外多糖>虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞内多糖;当100mg/L多糖溶液添加量分别高于80、40、90μL时,各组多糖对.OH、O2-.和H2O2 3种自由基的抑制率均可高于50%。