溶瘤腺病毒ZD55-Mn-SOD联合TPL对骨髓瘤细胞的生长抑制效应

研究利用携带Mn-SOD的溶瘤腺病毒Ad-E1A-△E1B55Kd-Mn-SOD(ZD55-Mn-SOD)联合小分子化合物雷公藤内酯醇(Tnptolide,TPL)对骨髓瘤细胞株RPMI8226、U266生长的体外抑制效应,希望找到解决化疗药物在临床使用中所出现的疗效低及毒副作用大的方法.采用CCK-8比色分析方法表明100 MOI ZD55-Mn-SOD与TPL(2 ng/mL、4 ng/mL)联合处理后,RPMI 8226及U266的细胞存活率均显著低于单用ZD55-Mn-SOD或TPL(P＜0.05);用结晶紫染色法定性分析了ZD55-Mn-SOD联合TPL对两种骨髓瘤细胞的杀伤作用;最后Hoechst33342染色法观察细胞凋亡也显示联合应用ZD65-Mn-SOD与TPL处理组的细胞凋亡现象比二者单独使用均要显著.本研究初步证实ZD55-Mn-SOD与TPL联合具有协同作用,能有效地在体外抑制骨髓瘤细胞RPMI 8226和U 266的生长.     

增殖性溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合丝裂霉素对肝癌细胞的杀伤

增殖性溶瘤腺病毒ZD55-IL-24是靶向p53缺失且携带肿瘤特异性的白细胞介素-24基因(IL-24);丝裂霉素(mitomycin C,MMC)是一种目前临床上癌症治疗常用化疗药物之一.研究联合应用ZD55-IL-24和MMC与单独使用对肝癌细胞株的杀伤效应及机制.结果表明,ZD55-IL-24比携带对照基因EGFP的腺病毒ZD55-EGFP对肝癌细胞具有更强的杀伤效果,而联合使用ZD55-IL-24与MMC比单独使用对肝癌细胞具更好的治疗作用,而对正常细胞的损伤仅来源于化疗药物MMC.此外,Hoechst33258染色和Western blot实验证明ZD55-IL-24与MMC联合处理诱导活化了肿瘤细胞的凋亡途径.以上结果显示肿瘤的传统疗法与新兴生物疗法相结合取得了更佳效果,本研究为临床肿瘤治疗提供理论和实验依据.     

携带Kallistatin的溶瘤腺病毒载体构建及其对肝癌细胞的体外杀伤效应

采用靶向基因-病毒治疗策略,通过同源重组的方式构建了携带Kallistatin（KAL）的重组溶瘤腺病毒ZD55-KAL,并研究其对肝癌细胞的杀伤作用。通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的杀伤能力和对正常细胞的安全性;结晶紫染色观察细胞凋亡现象。结果显示：经目的病毒ZD55-KAL感染后肝癌细胞出现明显的病变和生长抑制,而正常细胞未出现病变现象,表明目的病毒具有较高的安全性和对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。此外ZD55-KAL感染肝癌细胞后引起凋亡,所携带的治疗基因KAL能通过促进肿瘤的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。     

腺病毒介导miR-122联合化疗药物ADM对肝癌细胞杀伤作用的研究

采用CCK-8比色分析等方法开展腺病毒介导mi R-122联合化疗药物阿霉素(ADM)针对不同人肝癌细胞的杀伤情况的研究。希望通过对比研究,寻找解决化疗药物在临床使用中所出现的疗效低且毒副作用大等难题的方法。研究显示:低浓度的ADM对肝癌细胞的细胞毒作用比较小,但疗效也较差;当ADM浓度增高至80 ng/mL以上,尤其是80 ng/mL的ADM联合20 MOI Ad-mi R122杀伤各种肝肿瘤细胞的能力明显优于单独使用ADM或Ad-mi R122。     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL-IETD-Smac）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。     

二氯乙酸钠对溶瘤腺病毒ZD55-Smac抑制肝癌细胞生长的影响

研究了溶瘤腺病毒ZD55-Smac联合小分子药物二氯乙酸钠(DCA)对人肝癌细胞株的体外抑制效果.首先通过PCR及Western blot鉴定病毒构建正确与否及有无野毒污染,再用MTT 法分别检测DCA、ZD55、ZD55-Smac以及DCA与病毒联合对肝癌细胞株Huh-7、PLC、SMMC-7721及肝正常细胞QSG-7701生长的抑制作用;通过倒置显微镜观察了DCA、ZD55-Smac以及DCA和ZD55-Smac联合使用对肝癌细胞株PLC及肝正常细胞QSG-7701的细胞形态变化的影响;利用Hoechst33342染色观察了所处理细胞的凋亡形态学变化.结果表明DCA联合ZD55对肝癌细胞株Huh-7、PLC和SMMC-7721的抑制效果相比较单药物治疗或单病毒治疗有显著增加,而DCA联合ZD55-Smac对肝癌细胞的抑制效果比单病毒治疗有所减弱.该研究为进一步探究ZD55-Smac联合药物治疗打下基础.     

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化.结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用.说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤.     

增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24体外杀伤肝癌细胞的研究

研究溶瘤腺病毒SG511携带由热激蛋白70(hsp70)启动子调控IL-24构成的增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24对人肝癌细胞株的体外杀伤效果.实验采用ELISA法检测不同MOI值感染肝癌细胞SMMC-7721和Hep3B细胞3 d后IL-24的表达;MTT法检测SG511、Ad11-IL24以及SG511-pHSP70-IL24对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B以及人正常成纤维细胞株MRC-5及BJ增殖的抑制作用;并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况.ELISA检测到SG511-pHSP70-IL24感染SMMC-7721和Hep3B细胞后,IL-24有明显表达;MTT实验结果表明SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.同时结晶紫实验也证明了SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24相比腺病毒Ad11-IL24以及SG511,对肝癌细胞有较明显的生长抑制和凋亡诱导作用.     

新型CDK抑制剂联合ZD55-MnSOD溶瘤腺病毒体外抑制人结肠癌细胞增殖的研究

探究携带MnSOD的溶瘤腺病毒Ad-E1B55Kd-MnSOD(ZD55-MnSOD)联合小分子药物新型CDK抑制剂SNS-032对人结肠癌细胞株SW620、HCT116、HT-29生长的体外抑制效果,通过溶瘤病毒与药物联合,以期寻求较好的抗癌作用。实验采用MTT法检测5 MOI的ZD55-MnSOD与不同剂量的SNS-032(0、20、40、80、160ng/mL)联合处理人结肠癌细胞株,发现病毒与药物联合处理有促进肿瘤细胞凋亡的作用。ZD55-MnSOD(5 MOI)与SNS-032(80ng/mL)联合处理SW620、HT-29细胞,发现联合作用具有很大程度上的时间依赖性,Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡也显示ZD55-MnSOD与SNS-032联合处理组的细胞凋亡现象比二者单独使用均具有显著差异。该研究初步证实了ZD55-MnSOD与SNS-032联合具有互补作用,能有效地在体外抑制人结肠癌细胞的增殖。