3种改进液相色谱法测定植物油中黄曲霉毒素的比较研究

对柱后光化学衍生HPLC法、柱后碘衍生HPLC法及无衍生UPLC法测定植物油中4种黄曲霉毒素(AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2)含量的样品前处理条件和色谱条件进行改进并进行方法的比较研究。结果发现:样品前处理过程不采用氮吹、用50%甲醇溶液进样,用改进的色谱条件检测,油样中4种黄曲霉毒素均能被较好分离、定量,并简化了前处理过程;柱后光化学衍生HPLC法、柱后碘衍生HPLC法及无衍生UPLC法AFB_1的检出限分别为0. 035、0. 018、0. 045μg/kg,AFB_2的检出限分别为0. 016、0. 014、0. 017μg/kg,AFG1的检出限分别为0. 067、0. 024、0. 080μg/kg,AFG_2的检出限分别为0. 029、0. 026、0. 029μg/kg; 3种分析方法线性关系良好(r~2 0. 99),回收率为90. 7%～116. 1%,相对标准偏差低于12%; 3种分析方法测得花生油样品中4种黄曲霉毒素含量基本一致。3种分析方法均能够满足粮油检测工作的需要,具有实际应用价值。     

光化学衍生-高效液相色谱法测定 粮谷类样品中黄曲霉毒素

目的建立光化学衍生-高效液相色谱荧光法测定粮谷类样品中的黄曲霉毒素(AFT)含量。方法样品经Romer Labs免疫亲和柱净化,经SW-3光化学柱后衍生,经高效液相色谱分离和荧光检测器测定,分析其中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的含量。同时对免疫亲和柱洗脱条件、流动相的洗脱程序进行了优化。结果在0.5~10 ng/mL(AFT B_1,G_1)和0.15~3.0 ng/mL(AFT B_2,G_2)线性范围内,所得回归方程的相关系数均大于0.999。黄曲霉毒素B_1、G_1方法检出限为0.15 ng/g,黄曲霉毒素B_2、G_2方法检出限为0.05 ng/g,加标回收率为89.5%~107%,精密度为1.4%~7.2%。采集粮谷类样品222件,其中有5件样品检出AFT,但均未超过国家限值标准。结论该方法灵敏度和准确度较高,可适用于粮谷类食品中黄曲霉毒素的检测。     

部分地区荞麦食品中黄曲霉毒素AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2的污染评价

目的:了解6个地区6个类型荞麦食品中黄曲霉毒素AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2的污染状况。方法:采用柱前衍生高效液相色谱法对2016年沿海地区、西南地区、华中地区、华北地区、东北地区、西北地区6个地区的荞麦种子、米、粉、茶、面、饭6个类型的荞麦食品中黄曲霉毒素AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2含量进行测定,通过统计分析后进行评价。结果:6个地区荞麦食品中总的黄曲霉毒素的检出率为34.92%,最高为26.8μg/kg,其中主要是AFB_1和AFG_1的污染严重,AFB_1的阳性率为14.29%,AFG_1的阳性率为17.46%,根据美国食品药品监督管理局对黄曲霉毒素在食品中的残留限量规定,总的黄曲霉毒素超标率为3.17%。方差分析:不同类型的荞麦食品对AFB_1含量有极显著影响,并且荞麦面比其他类型的荞麦食品AFB_1更容易超标。收成月平均温度对AFB_1含量有极显著影响(p0.01),收成月平均温度越高,AFB_1含量越高。AFB_1与AFG_1呈极显著正相关(p0.01)。结论:荞麦食品受到黄曲霉毒素污染,但污染程度较轻,并且黄曲霉毒素AFB_1污染受到收成月温度影响,AFB_1污染的增加同时也常常伴随着AFG_1污染的增加。     

多功能净化柱-高效液相色谱法同时检测食用油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A

目的:研究并建立高效液相色谱法同时检测20批食用油中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2和赭曲霉毒素A的定量方法。方法:样品经涡旋、离心提取后,采用多功能净化柱对目标毒素净化富集,采用SHIMADZU Inertsil ODS-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),FLD检测器,以甲醇-0.5%乙酸水为流动相进行梯度洗脱,进样量为10μL,流速为0.8 m L/min,柱温为35℃,改变波长荧光检测并对方法学进行考察。结果:AFB_1在0.25~40.6 ng/m L(r=0.9999),AFG1在0.5~40.4 ng/m L(r=0.9997),AFB_2在0.06~10.06 ng/m L(r=0.9999),AFG_2在0.06~10.08 ng/m L(r=0.9999),OTA在1.01~50.5 ng/m L(r=1.00)范围内呈良好线性关系,5种毒素的加标平均回收率为91.40%~109.36%。样品检测结果表明,20批食用油样品中有4批样品检测结果呈阳性,均受到黄曲霉毒素G_1、G_2的污染。结论:该方法准确、快速,能够广泛用于食用油中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2和赭曲霉毒素A的定量检测。     

超声辅助-分散液液微萃取/快速液相色谱-串联质谱法测定食用植物油中黄曲霉毒素

建立了超声辅助-分散液液微萃取(UA-DLLME)/快速液相色谱-串联质谱法(RRLC-MS/MS)测定食用植物油中黄曲霉毒素(AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2)的方法。先以分散剂溶解样品,再以萃取剂萃取,离心后底层溶液经脱脂上机,在电喷雾离子源正离子模式(ESI~+)下采用多反应监测模式(MRM)监测。对样品前处理方法进行了优化。结果表明,最优样品前处理条件为:1 g样品,2 mL石油醚为分散剂,1 000μL乙腈-水(体积比8∶2)为萃取剂,超声辅助萃取时间2 min,离心时间5 min,离心转速4 000 r/min。该方法的线性范围为0.625～30.0 ng/mL,相关系数均大于0.998,加标回收率为88.2%～101.5%,相对标准偏差均小于3.3%。该方法简便、快速、经济、准确度和精密度高且环境友好,适合食用植物油中黄曲霉毒素的定性和定量测定。     

免疫亲和柱-液相色谱法测定麦麸中黄曲霉毒素含量

为测定麦麸中黄曲霉毒素含量,试验建立了免疫亲和柱-高效液相色谱法。通过对10批样品检测结果的分析,初步考察了麦麸在黄曲霉毒素污染方面的安全性问题。样品经提取后,用免疫亲和柱净化,采用Syncronis C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-水(体积比30︰13︰57)为流动相,采用柱后碘衍生化法,用荧光检测器检测,激发波长为360 nm,发射波长为450 nm。黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1分别在0.004～0.019μg·kg~(-1)(r=0.999 9),0.011～0.053μg·kg~(-1)(r=0.999 9),0.004～0.022μg·kg~(-1)(r=0.999 9)和0.010～0.051μg·kg~(-1)(r=0.999 9)范围内线性关系良好,AFB~4_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2最低检出限分别为5.6×10~-,2.3×10~(-4),1.08×10~(-3)和4.3×10~(-4)μg·kg~(-1)。高中低不同浓度的黄曲霉毒素的加样回收率平均值分别为95.23,94.24和93.23μg·kg~(-1)。RSD(n=6)在0.54%～1.41%之间。10批样品中均检出黄曲霉毒素G_2,含量低于0.1μg·kg~(-1),有2批样品检出黄曲霉毒素G_2、B_2、B_1,黄曲霉毒素总量低于0.16μg·kg~(-1)。该方法经方法学验证,可用于麦麸中黄曲霉毒素检测。     

玉米制品中黄曲霉毒素的柱前和柱后衍生方法对比

玉米制品中黄曲霉毒素测定的2种衍生化方法(柱前衍生和柱后衍生)进行比较。样品经过Mycrosep ~(TM)226多功能净化柱净化,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5.0μm)色谱柱进行分离,荧光检测器检测。柱前衍生法:样品提取液经净化后,采用三氟乙酸进行衍生后测定。柱后碘衍生法:样品提取液经净化后,经高效液相色谱分离、柱后碘衍生,荧光检测器检测。结果表明:柱前衍生法,黄曲霉毒素G_1、B_1检出限为0.05μg/kg,黄曲霉毒素G_2、B_2检出限为0.015μg/kg,r0.999 1,回收率在75.4%~84.2%之间;柱后碘衍生法,黄曲霉毒素G_1、B_1检出限为0.08μg/kg,黄曲霉毒素G_2、B_2检出限为0.015μg/kg,r0.999 2,回收率在75.2%~85.7%之间。2种衍生方法在线性范围、精密度、回收率等方面较相似,表明柱前衍生法和柱后碘衍生法均适用于玉米制品中的黄曲霉毒素检测。     

富含色素类中药材中黄曲霉毒素的高效液相色谱-荧光检测方法研究

目的采用免疫亲和净化手段和高效液相色谱(HPLC)检测技术,建立富含色素类中药材中黄曲霉毒素(AFT)的测定方法,为中药材中AFT的检测和污染调查提供技术支撑。方法中药材样品经过高速粉碎均匀后,粉末状样品经80%甲醇水高速均质提取,提取液以磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后,用免疫亲和柱(IAC)净化,以含吐温-20的PBS淋洗柱子后,用甲醇洗脱AFT,洗脱液经三氟乙酸衍生后用HPLC分析,C18反相色谱柱分离,用荧光检测器(FLD)测定,外标法定量。结果黄曲霉毒素G1、B1、G2和B2的最低检出限(LOD,S/N=3)分别为0.1、0.02、0.05和0.05μg/kg;以不含AFT、色素含量较高的枳实、绞股蓝、枇杷叶、鱼腥草和乌梅为基质,进行加标回收试验,加标水平为6.0~24μg/kg(以AFT总量计),AFT的平均回收率在62.3%~115%之间,RSD在0.92%~15.9%之间(n=3)。结论 IAC净化技术和HPLC-FLD相结合,用于4种AFT的检测可取得较为满意的结果,方法的准确度高、精密度好,各项指标均满足欧盟对食品中AFT检测的要求,方法可满足色素含量较高的中药材中4种黄曲霉毒素(AFT)的测定。     

免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱法检测粮油中黄曲霉毒素

介绍了同时采用免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱方法检测粮油中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。样品经过甲醇-水(体积比为70∶30)提取,通过免疫亲和柱富集和净化,采用Cloversil C18色谱柱(4.6 mm i.d.×150 mm,粒度5μm),以甲醇∶水(50∶50)溶液为流动相,柱后光化学衍生、利用荧光检测器检测,黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2检出限分别为0.5,0.2,0.7和0.2μg/kg,标准曲线的线性范围分别为:0.51～10.19 ng/mL,0.15～2.92 ng/mL,0.54～10.71 ng/mL,0.16～3.3 ng/mL,在稻谷、食用油样品中,平均加标回收率为70.3%～109.8%,相对标准偏差为1.4%～9.1%,说明回收率、精密度均可以满足实际工作的要求。     

2种超高效液相色谱-柱后衍生法对植物油中黄曲霉毒素的测定与分析

目的建立超高效液相色谱-柱后衍生法测定植物油中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1的含量,并通过柱后光化学衍生法及柱后碘衍生法进行比对确认。方法样品采用70%的甲醇水提取,经多功能净化柱净化,利用在线超高效液相色谱-荧光检测器-柱后光化学衍生及柱后碘衍生进行测定分析。结果黄曲霉毒素通过柱后光化学衍生后,在0.014～0.241 ng/mL范围内线性关系良好,通过柱后碘衍生在0.02～0.804 ng/m L范围内线性关系良好,相关系数均在0.999以上。参与2016年花生油中黄曲霉毒素的能力验证,经过2种方法的检测,各黄曲霉毒素检测值均在能力验证的参考值允许范围内,考核结果为满意结果,质控样的检测值均在参考值允许范围内,表明2种方法均准确稳定。结论 2种衍生方法的测定结果比较接近,均有较好的重复性和准确性,通过2种衍生方法的比较,光化学衍生法较之有灵敏度高、操作简便、绿色环保、性价比较高的优点,适用于实验室对植物油中黄曲霉毒素的检测。     

食用植物油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的污染状况及特征分析北大核心CSCD

针对市场在售的调和油、玉米油、大豆油、花生油和菜籽油等食用植物油,随机购买20种共290份食用植物油样品。采用液相色谱法测定AFB_(1)、AFB_(2)、AFG_(1)、AFG_(2)以及OTA、OTB真菌毒素的含量,对食用植物油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的污染水平和分布特征进行分析。结果表明:20种290份食用植物油样品中,有16种共67份样品存在不同程度的真菌毒素污染,总污染率达到23.1%,不同种类食用植物油污染呈现“多种类、共分布”的特点,其中AFG_(1)污染率(14.8%)最高,其次为OTA(13.4%)。绝大多数阳性样本受1~4种真菌毒素污染,仅有少数阳性样本受真菌毒素污染数量达到5种。总体上食用植物油样品受到多种真菌毒素的混合污染情况比较严重,应引起一定的重视。     

时间分辨荧光免疫法检测食品中黄曲霉毒素B1的含量

目的建立高灵敏度的时间分辨免疫法检测黄曲霉毒素B_1的含量。方法通过双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合稀土元素Eu~(3+)标记抗AFB_1的单克隆抗体,以AFB_1-OVA为固相抗原,优化反应条件,建立直接竞争时间分辨免疫检测方法。结果优化条件后,方法灵敏度为0.02μg/L,IC_(50)为0.73μg/L,线性检测范围为0.01~30μg/L,大米、花生、黄豆和干果样品回收率在91%~104%之间,检测结果准确;与结构类似物AFB_2、AFG_1、AFG_2、AFM_1的交叉反应率分别为17.3%、4.49%、2.37%和0.73%。结论本方法灵敏度高、特异性强、检测快速,可以满足实际样品的检测需求。     

原位光化学衍生快速检测黄曲霉毒素荧光强度

通过优化有机溶剂种类和光化学衍生时间,建立采用光化学衍生进行前处理,并利用黄曲霉毒素原位衍生荧光检测仪快速检测黄曲霉毒素荧光强度的方法。结果表明,在光化学衍生时间为4 min时,70%甲醇溶剂中黄曲霉毒素B1和G1的光化学衍生荧光增强效果最显著,优于甲醇和乙腈;黄曲霉毒素B2和G2荧光强度最大且稳定,光化学衍生后无明显增强。该方法在0.1 ng/mL~20.0 ng/mL线性关系良好,R2>0.9984,方法检测限在0.15 ng/mL~0.37 ng/mL之间,检测时间短,操作简单方便,满足食品和中药材中黄曲霉毒素的快速检测要求。     

免疫亲和层析净化-高效液相色谱法同时测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2

建立牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的免疫亲和层析净化和柱后衍生高效液相色谱测定方法。样品经溶解、离心、过滤后,通过免疫亲和柱,黄曲霉毒素特异性抗体选择性地与存在的黄曲霉毒素抗原键合,形成抗体-抗原复合体。甲醇-乙腈混合溶液(4:5,v:v)洗脱,带荧光检测器的高效液相色谱仪经柱后衍生测定,外标法定量。标准曲线线性良好,添加回收率在57.0%～88.7%,相对标准偏差在3.37%～16.9%,牛奶中各黄曲霉毒素检出限:B1为2ng/kg,B2为1ng/kg,G1、G2为3ng/kg,M1、M2为5ng/kg;奶粉中B1为20ng/kg,B2为10ng/kg,G1、G2为30ng/kg,M1、M2为50ng/kg,检测低限能够满足各国对牛奶和奶粉中黄曲霉毒素的限量要求。该方法准确、快速、灵敏度高,适用于牛奶和奶粉中黄曲霉毒素的测定。     

全自动在线免疫亲和固相萃取-高效液相色谱法快速测定食品中的黄曲霉毒素

目的建立一种全自动在线免疫亲和柱固相萃取-高效液相色谱(online immunoaffinity solid phase extraction-high performance liquid chromatography,online-IA-SPE-HPLC)快速测定食品中黄曲霉毒素(aflatoxins,AFT)。方法样品经乙腈-水提取后,经可重复使用的在线免疫亲和小柱进行富集与净化,经C_(18)色谱柱(150mm×4.6 mm,5μm)进行分离,用特定流动相进行洗脱,用电化学衍生KOBRA~?Cell荧光检测器进行检测,激发波长为362 nm,发射波长为455 nm,同时进行线性范围、精密度、准确度和加标回收率等方法学验证。结果对于大米、食醋、酱油和花生油等基质,该方法对AFT B_1的检出限均为0.035μg/kg,低于我国现行食品安全标准对AFT B_1的限量要求;AFT B_1及AFT G1在25~500 ng/L范围内具有良好的线性,AFT B_2及AFT G_2在6.25~125 ng/L范围内具有良好的线性,相关系数均为0.9999;在低、中和高3水平加标下大米、食醋、酱油和花生油中的4种黄曲霉毒素回收率在91.16%~109.99%之间,精密度为0.52%~4.39%。结论该方法的前处理快速、简易,方法重现性好、灵敏度高,适用于食品中AFT的高通量检测。     

高效液相色谱法同时检测粮食中常见8 种真菌毒素的含量

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时测定粮食中黄曲霉毒素B1（aflatoxins,AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）、玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）、呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）和T-2毒素的检测方法。样品经乙腈-水提取后,用免疫亲和柱净化,Agilent Elipse Plus C18（100 mm×4 mm,3.5 μm）色谱柱分离,以甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相,流速1 mL/min,柱温35 ℃,进样量20 μL,检测系统为可变波长检测器串联光化学衍生器串联荧光检测器。根据信噪比为3的峰响应值,确定各真菌毒素的检出限为：AFB1 0.446 ng/mL、AFB2 0.152 ng/mL、AFG1 0.523 ng/mL、AFG2 0.334 ng/mL、ZEN 7 ng/mL、OTA 0.7 ng/mL、DON 200 ng/mL、T-2毒素100 ng/mL。样品中各真菌毒素的平均加标回收率,玉米为80.0%～104.5%,小麦为83.2%～102.8%,方法精密度为2.6%～10.2%。从样品前处理到分析整个过程耗时约2 h。本方法简便、快速、灵敏度高,适用于粮食中多种真菌毒素的快速测定。     

免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱法测定广式莲蓉月饼中黄曲霉毒素

目的建立广式莲蓉月饼中的4种黄曲霉毒素(黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2)定性和定量的液相色谱-串联质谱检测方法。方法样品经甲醇-水(7:3,v:v)提取后,用免疫亲和柱净化,经甲醇洗脱,在C_(18)色谱柱上梯度洗脱分离,采用电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式测定。结果标准曲线在0.1~20.0 ng/mL范围内线性良好;用本法测定4种黄曲霉毒素的回收率在78.4%~107.8%之间,相对标准偏差在2.5%~9.8%之间。采用该方法对市售5种广式莲蓉月饼中黄曲霉毒素进行分析,其中1份月饼样品能够检测到含有少量的黄曲霉毒素B_1(1.2μg/kg)和B_2(0.21μg/kg)。结论该方法具有简单快速,准确可靠等特点,适用于广式莲蓉月饼中4种黄曲霉毒素的同时测定。     

无需衍生化样品处理快速测定食品中黄曲霉毒素B_1

目的建立无需衍生化法.超高效液相色谱直接测定食品中的黄曲霉毒素B_1的快速检测方法。方法样品经甲醇.水(7:3,v:v)提取,免疫亲和柱净化,C_(18)色谱柱分离后,采用大体积流通池荧光检测器检测。结果黄曲霉毒素B_1在0.10~5.00 ng/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,R~20.999,在饼干、粉丝、点心、沙琪玛、蛋糕、辣椒酱6种基质中,黄曲霉毒素B_1在0.50~2.00μg/kg范围内加标,平均回收率在71.7%~111.2%之间,相对标准偏差(RSDs)为3.8%~11.5%,检出限(LOD)为0.05 gg/kg。结论本方法灵敏、快速、无衍生、结果准确,能够满足食品中黄曲霉毒素B_1残留的检测需求。     

有机溶剂萃取-高效液相色谱法检测玉米浆中黄曲霉毒素B_1

以玉米浆(干、湿样)作为样品,用有机萃取法精简样品处理方式,比较了4种有机溶剂萃取黄曲霉毒素B_1的回收率,用高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)紫外检测器检测AFB_1,以期建立一种检测玉米浆中黄曲霉毒素B_1(Aflatioxin,AFB_1)的高效液相色谱检测方法。结果表明,二氯甲烷为样品检测的最适萃取剂,该方法的加标回收率为96.2%～99.3%,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为0.68%～1.97%。该方法简便、廉价、准确,适用于玉米浆中AFB_1的检测。     

免疫亲和柱层析-超高效液相色谱法测定动物性食品中6种黄曲霉毒素

目的建立一种快速、灵敏的超高效液相色谱法,同时测定动物性食品中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2。方法甲醇-水(80∶20,V/V)提取粉碎或匀浆动物性食品中的黄曲霉毒素,取部分样液经过免疫亲和柱层析净化,经C_(18)色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.7μm)分离,荧光检测器检测。保留时间定性,峰面积定量。结果5 min内完成分离,黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2检出限分别为0.038、0.010、0.062、0.010、0.110、0.016μg/kg。标准曲线线性范围分别为AFB_1:1.28~20.4μg/L;AFB_2:0.32~5.08μg/L;AFG_1:1.26~20.2μg/L;AFG2:0.31~5.00μg/L;AFM_1:1.25~20.0μg/L;AFM_2:1.25~20.0μg/L,相关性在0.999 7~0.999 9之间。不同浓度水平6种黄曲霉毒素平均加标回收率在73.2%~94.1%之间,精密度在0.2%~3.8%之间。结论该方法可同时、快速、高效、准确测定动物性食品中6种黄曲霉毒素的含量。