甜菜与BNYVV互作过程中PR基因的诱导表达

以抗病性不同的4个甜菜品种为材料,分别接种BNYVV,研究甜菜与BNYVV互作过程中几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性和诱导几丁质酶、β—1,3-葡聚糖酶基因表达及其与抗丛根病的关系。结果表明：BNYVV不同程度地诱导了4个甜菜品种几丁质酶、β—1,3-葡聚糖酶活性的提高,抗病品种比感病品种具有较高的几丁质酶和β—1,3-葡聚糖酶活性,并且抗病品种的酶活性高峰出现的时间早于感病品种;抗病品种的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶基因的表达均早于感病品种,表达量大于感病品种,且持续的时间较感病品种长。BNYVV不同程度地诱导甜菜病程相关蛋白基因的表达,从而有效激活了甜菜抗病防御反应系统,提高了甜菜抗病性。     

β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在热带水果保鲜中的应用

通过对β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的抑菌性质进行分析,综述了β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在果蔬方面的抗病害研究进展,对β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在热带水果采后保鲜中的作用进行了展望.     

壳聚糖对苹果梨抗菌物质及抗性酶活性的诱导

为研究壳聚糖对苹果梨黑斑病的抗病机理,采用薄层层析法,对壳聚糖处理前后苹果梨果皮抗菌物质成分进行分析,并比较不同浓度壳聚糖处理果实不同部分,其几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性的变化.结果表明:以互隔交链孢(A lte rnaria alte rnata)为指示菌进行生物活性分析,经壳聚糖处理的苹果梨果皮粗提液与对照相比,有不同比移值的抑菌带出现.对其主要成分分析表明,壳聚糖可诱导出10种抗菌物质,其中不同饱和程度的脂肪酸甲酯是抗菌物的主要成分.用2％壳聚糖浸泡果实和用0.75％壳聚糖切面涂抹果实,其几丁质酶和13-1,3-葡聚糖酶活性接近.但与对照相比,几丁质酶活性提高了48.18％和47.45％,[3-1,3-葡聚糖酶活性提高了16.87％和16.65％.     

Bt-799玉米对Wistar大鼠食用安全性评价研究

目的：用Bt-799玉米饲喂Wistar大鼠14w,观察其对大鼠的亚慢性毒性作用,对Bt-799玉米的食用安全性做出初步评价。方法：100只刚断乳Wistar大鼠按性别和体重分为5组：空白对照组（BC）、Bt-799玉米低（TL）、中（TM）、高（TH）剂量组和亲本非转基因玉米＂郑58＂组（N）。空白对照组给予标准AIN-93G配方饲料,后四组饲料相应玉米添加量分别为9.41%、28.23%、84.68%、84.68%,各营养成分依据AIN-93G配方补齐。各组动物分别饲喂相应饲料14w,每天观察一般情况,每周记录体重、进食量、食物利用率,实验结束时检测血常规、血生化,计算脏器系数并进行组织病理学检查。结果：体重、进食量、血常规、血生化、脏体比等指标均有项目检测出统计学差异,但由于未出现剂量-反应关系、相关病理学检测未发现有意义的病理改变等原因,认为这些差异不具有生物学意义,与转基因操作无关。结论：Bt-799玉米对Wistar大鼠生长发育无明显不良影响,Bt-799玉米与亲本＂郑58＂玉米对Wistar大鼠具有同等的食用安全性。     

表达广谱抗真菌蛋白转基因水稻元素组成分析

应用环境扫描电子显微镜和能谱分析方法研究转广谱抗真菌基因碱性几丁质酶基因RC24、苜蓿葡聚糖酶基因β-1,3-Glu、酸性几丁质酶基因RAC22对不同生长期非转基因水稻(七丝软占)和转抗真菌水稻(双价抗真菌转基因水稻转品8、三价抗真菌转基因水稻转品1)抗病元素化学元素组成差异。分析结果表明:除C、H、O外,水稻叶、叶鞘主要含有Si、K、Na、Cl、Mg5种与抗病相关的化学元素,其中Si的相对含量为10%～15%,K、Na相对含量为0.2%～3.6%,Mg、Cl相对含量较低,大部分样品小于1%。外源基因的转入对水稻叶、叶鞘化学元素相对含量有一定影响,其中Si、K、Na的相对含量变化明显,差异最明显的分别达50.8%,115.3%,251.9%。存在时空变化,其机理尚待研究。     

转几丁质酶-葡聚糖酶双价基因水稻稻米毒理试验

通过小鼠急性毒性试验、小鼠致突变试验、大鼠90d毒性试验,对转几丁质酶-葡聚糖酶双价基因水稻稻米的毒理进行了初步的评价。转基因大米粉MTD≥37.5g/kg灌胃给予小鼠,连续观察7d,动物全部存活,表现正常,未见中毒反应。致突变灌胃给予小鼠,未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响。转基因大米粉分别以15、7.5g/kg/d,90d灌胃大鼠,其行为活动、外观体征、饮食、粪便、体重,结果均无异常,5项血液学检查和13项生化指标检测及尸体解剖观察、脏器系数、脏器病理学检查,结果均属正常,与空白对照无显著差异。转基因大米粉结果提示携带几丁质酶基因、葡聚糖酶基因、NPT-II标记基因等外源DNA的转基因大米无明显的毒性和致畸作用。     

扇贝消化腺β-1,3-葡聚糖酶的分离和性质研究

以扇贝加工废弃物消化腺为原料,经磷酸缓冲液抽提、80%饱和度硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析等步骤,获得β-1,3葡聚糖酶.经SDS-PAGE检测,扇贝消化腺β-1,3-葡聚糖酶的相对分子质量为157kDa.β-1,3-葡聚糖酶水解木耳多糖(β-1,3-葡聚糖)的最适pH为7.0,最适温度为30℃.通过Lineweaver-Burk作图,得到其米氏常数Km为13mg/mL.     

燕麦β-葡聚糖对高脂血症大鼠空腹和餐后脂代谢的影响

研究了燕麦β-葡聚糖对高脂血症大鼠空腹和餐后脂代谢的影响.58只雄性SD大鼠随机分为基础组(n=10)和模型组(n=40),分别饲喂基础饲料和高脂饲料,饲养3w后,将造模成功的高血脂症大鼠随机分为高脂对照组、添加燕麦β-葡聚糖低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只,分别饲喂含0、6、12、24g β-葡聚糖/kg的高脂饲料6w.于实验期末,分别测定大鼠空腹(禁食12h)和餐后(禁食16h后再强饲5g饲料后2h)血浆TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB的含量以及肝脏脂质变化.结果表明:不同剂最β-葡聚糖都极显著降低空腹血浆TC、LDL-C和ApoB水平,而对HDL-C、TG和ApoAI无显著影响;β-葡聚糖可以改善餐后血脂分布,降低肝脏脂质含量,不同剂量之间具有一定的差异性.     

虎杖提取物处理对采后梨果实抗性相关酶活性的诱导

研究了虎杖提取物对梨果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)、几丁质酶(CHT)与β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活性的诱导情况及对梨果实青霉病的防治效果。结果表明,梨果实用虎杖提取物处理1d后,PAL、CHT和GLU活性开始升高,并在整个实验过程中一直保持较高的水平;另外,虎杖提取物对梨青霉病具有很好的抑制效果。     

燕麦β-葡聚糖对高胆固醇血症大鼠血脂和生长的影响

研究燕麦β-葡聚糖对实验性高胆固醇血脂大鼠的血脂及生长的影响.58只雄性SD大鼠随机分为基础组(n=10)和模型组(n=40),分别饲喂基础饲料和高脂饲料,饲养3周后,将造模成功的高胆固醇血症大鼠随机分为高脂对照组、添加燕麦β-葡聚糖低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只,分别饲喂含0、6、12、24 g β-葡聚糖/kg的高脂饲料6周.在实验的2、4和6周末测定血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG,6周末测定)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);实验结束时对各组大鼠称重并计算平均采食量.结果表明:给与不同剂量β-葡聚糖能够极显著降低大鼠空腹血浆TC、LDL-C水平(P<0.01),而对HDL-C、TG无显著影响,并具有明显剂量和时间依赖性;饲料中添加β-葡聚糖后大鼠体重和采食量均有所下降,这表明燕麦β-葡聚糖能够促进脂代谢,具有降胆固醇作用.     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70%的（NH4）2SO4及DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28.7倍,酶回收率为45.2%。经SDS-PAGE分析,该酶分子量近似54.6KD。酶最适反应pH为5.0,最适温度为50℃。在pH3.0～5.0、温度30～70℃酶活相对稳定。Fe^3＋、Mg^2＋、Mn^2＋以及Cu^2＋对该酶有抑制作用,Zn^2＋、Ca^2＋和Fe^2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3-葡聚糖酶、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

采后厚朴提取物处理对桃果实抗病性的影响

以"八月脆"桃为试材,通过损伤接种研究了采后厚朴提取物处理时桃果实采后病害的控制和抗病性酶的影响.结果表明:采收后用3.13、6.25、12.50mg/mL的厚朴提取物处理桃果实,十分有效地抑制了桃果实接种的褐腐病(Monilinia.fracticola)的发生;并且明显诱导了果实中苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶等抗性相关酶活性.     

霜霉病菌对葡萄细胞壁水解酶的诱导作用与寄主抗病性的关系

葡萄霜霉病菌能诱导葡萄叶片几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的积累,但2种酶在积累的速度上和幅度上,抗病品种和感病品种有显著的差异.与感病品种乍娜、红提相比,抗病品种赤霞珠2种酶活性不仅升高的速度快、幅度大,且高活性维持的时间长.     

转Cry1Ab-ma基因玉米对大鼠的亚慢性毒性研究

目的:研究转Cry1Ab-ma基因玉米对大鼠的亚慢性毒性。方法:初断乳Wistar大鼠140只,随机分为7组:转基因玉米高中低3个剂量组(60%、30%、15%)、亲本玉米高中低3个剂量组(60%、30%、15%)以及1个常规基础饲料对照组,每组20只,雌雄各半。动物2只1笼喂养,自由进食饮水,连续观察90 d。每周称量饲料量及大鼠体重,在试验中、末期采集大鼠尿液和血液进行尿常规、血常规和血生化分析。实验末期称重脏器并计算脏器体重比,最后对大鼠脏器进行病理组织学检查。实验末期称重脏器并计算脏器体重比,最后对大鼠脏器进行病理组织学检查。结果:90 d的实验期内,各组大鼠均未发现中毒死亡情况。转基因玉米组个别评价指标虽与亲本玉米对照组或常规基础饲料对照组存在统计学差异,但指标水平在文献报道正常范围和历史对照范围内,且均未发现有生物学意义的改变。各受检脏器未见与受试物相关的病理改变。结论:现有实验结果不能证实转Cry1Ab-ma基因玉米对大鼠有亚慢性毒性作用。     

采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜防卫基因mRNA的诱导表达

本文研究了采后100 mmol/L硅酸钠浸泡处理对甜瓜果实苯丙烷代谢途径关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查尔酮合成酶(CHS)、及抗病相关酶过氧化物酶(POD)、β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-Glu)mRNA表达的影响。结果表明:硅酸钠处理可提高PAL、CHS、POD、β-1,3葡聚糖酶基因mRNA的表达。其中经硅酸钠处理后PAL、CHS、POD基因分别于6、6、2 d达到最大表达量,其表达量分别为对照组的2.69、2.48、3.77倍。由此表明,采后硅酸钠处理厚皮甜瓜果实可通过诱导苯丙烷代谢途径关键酶PAL、CHS,及抗病相关酶POD、β-1,3葡聚糖酶基因的转录增强采后抗病性。     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70％的（NH4）2S04及DEAE--琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28．7倍,酶回收率为45．2％。经SDS--PAGE分析,该酶分子量近似54．6KD。酶最适反应pH为5．0,最适温度为50℃。在pH3．0-5．0、温度30℃-70℃之间酶活相对稳定。Fe3＋、Mg2＋、Mn2＋以及Cu2＋对该酶有抑制作用,Zn2＋、Ca2和Fe2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。以上表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

皱纹盘鲍内脏β-1,3-葡聚糖酶的提取及其酶学性质研究

从鲍鱼内脏提取β-1,3-葡聚糖酶粗酶并研究其酶学性质。以昆布多糖为底物监控酶的活性。鲍鱼内脏经匀浆后,采用3倍体积0.1mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH6.0)浸提12h。浸提液经离心后收集上清液,并采用60%饱和度的硫酸铵对上清液中的蛋白进行盐析沉淀得β-1,3-葡聚糖酶粗酶。研究表明,粗酶中β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为40℃,酶活力在40℃以下稳定;酶的最适pH为6.0,酶活力在pH4.0～7.0范围内稳定。Mn2+能明显激活酶活力,而Cu2+、Fe3+、Hg+对酶活力有抑制作用,其中Fe3+的抑制作用最强;亮肽酶素和1,10-菲啰啉对酶活力有明显的抑制作用,而E-64对酶活力有一定的激活作用;此酶对海藻酸钠也有一定水解能力。     

基因突变提高毕赤酵母表达内切β-1,3-葡聚糖酶活性

为构建一株高效表达内切β-1,3-葡聚糖酶的毕赤酵母菌株,并用于水解热凝胶生产β-1,3-葡寡糖。作者首先对哈茨木霉来源内切β-1,3-葡聚糖酶基因进行随机突变,并构建BGN13.1a突变库;然后采用高通量技术及刚果红平板筛选高表达菌株;最后采用TLC薄层色谱和MALDI-TOF MS分析热凝胶水解产物,并分析了酶学性质。结果表明,本研究成功筛选得到毕赤酵母突变株K827,酶活较初始菌株提高了25%;其水解产物聚合度为2～10,且寡糖产量为1.492 g/L;其最适pH与最适温度分别为5.5和50℃;相较亲本酶,突变株K827的pH稳定性与温度稳定性都有明显提高。本研究为内切β-1,3-葡聚糖酶的工业化生产及应用提供依据。     

超声-酶-碱法提取啤酒废酵母β-1，3-葡聚糖的研究

采用超声-酶-碱法从啤酒废酵母中提取β-1,3-葡聚糖,在超声波预处理和酶解最佳条件的同时,利用响应曲面法研究分析NaOH浓度、温度、用量和时间对β-1,3-葡聚糖得率、纯度和蛋白质含量的影响.试验结果表明,超声波处理后破壁率为94.22%;酶解后蛋白质去除率为62.82%;当加入2.05%的NaOH 30.50 mL,74℃处理5.7 h,β-1,3-葡聚糖的得率为10-21%,纯度为88.14%,蛋白质含量为1.19%.超声-酶-碱法处理工艺具有β-1,3-葡聚糖得率、纯度高、蛋白质含量低及提取时间短的特点.     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的特性研究

对裂褶茵所产内切β-1,3-葡聚糖酶进行有效分离纯化并用电泳法对其纯度进行鉴定,进而研究其酶学特性.结果表明:经过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤分离纯化得到电泳纯分子量约为45 kD的内切β-1,3-葡聚糖酶,其最适pH为5.0,最适温度为45℃;Fe<'2+>、B...