氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期和周期蛋白表达的影响及其调控机制

目的探讨氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期及周期蛋白表达的影响及其调控机制。方法以不同浓度的氨氯地平处理对数生长期的MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21和p53的表达。结果氨氯地平呈剂量和时间依赖性抑制MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol/L;经7.220μmol/L(0.5IC5)0、14.439μmol/L(1IC5)0和28.880μmol/L(2IC50)氨氯地平处理48h,G0/G1期细胞比例较对照组明显增高;经7.220μmol/L氨氯地平处理48h,MCF-7细胞中cyclinD1蛋白表达降低,p21和p53蛋白表达升高。结论氨氯地平对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,此作用与使细胞阻滞于G1期有关,其机制与调控细胞周期相关蛋白cyclinD1、p21和p53的表达有关。     

氧化型低密度脂蛋白的内皮损伤作用及其对人脐静脉内皮细胞中OX40L表达的影响

目的观察氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)的内皮损伤作用及其对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中OX40L表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度ox-LDL(50、100和150 mg/L)对HUVEC增殖活力的影响;流式细胞术检测100 mg/L ox-LDL处理的HUVEC细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测不同浓度ox-LDL(50、100和150 mg/L)处理的HUVEC中OX40L蛋白的表达水平;免疫荧光及激光共聚焦检测100 mg/L ox-LDL处理的HUVEC中OX40L蛋白的定位,均设加入等量培养基的HUVEC作为对照组。结果与对照组相比,随着ox-LDL浓度的升高,HUVEC的增殖活力明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);ox-LDL 100 mg/L组细胞被阻滞在S期,凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,随着ox-LDL浓度的升高,HUVEC中OX40L的表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05);ox-LDL100 mg/L组HUVEC表达OX40L的荧光明显增强,差异有统计学意义(P<0.01),且OX40L蛋白定位于细胞膜及细胞质上。结论 ox-LDL对HUVEC具有明显的损伤作用,可促进HUVEC中OX40L的表达,影响OX40/OX40L炎症信号通路。     

Polo样蛋白激酶1抑制剂BI-2536对人肝癌SNU-423细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨Polo样蛋白激酶1(Polo-like protein kinase 1,PLK1)抑制剂BI-2536对人肝癌SNU-423细胞增殖及侵袭的影响。方法体外培养人肝癌SNU-423细胞,采用不同浓度梯度的BI-2536作用于SNU-423细胞,同时设对照组(未加BI-2536),MTT法检测BI-2536对人肝癌SNU-423细胞的抑制率,划痕试验检测BI-2536对人肝癌SNU-423细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 SNU-423细胞经BI-2536处理48 h后的IC50为5. 036μmol/L。SNU-423细胞的增殖抑制率随BI-2536浓度的增加明显上升(P 0. 01);经BI-2536作用的SNU-423细胞迁移率明显低于对照组(P 0. 01),随药物浓度的增高,SNU-423细胞出现凋亡现象。结论 BI-2536可抑制人肝癌SNU-423细胞的增殖及迁移能力,PLK1可作为肝癌治疗中的新靶点。     

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制

目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平。结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60μmol/L Rh2作用72 h为最适作用浓度和时间。经60μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象。与对照组比较,经60μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P0.01),S期(P0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase-3和P53蛋白表达上调(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P0.05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的。     

二磷酸氯喹对THP-1细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度二磷酸氯喹对急性单核细胞性白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法分别用10、20、40、80、100μmol/L氯喹处理THP-1细胞,分别于处理12、24、48和72 h收集细胞,MTS法检测细胞增殖情况,同时采用Hoechst33342荧光染色法及流式细胞仪检测二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡的影响。结果处理细胞12、24 h时,10、20、40、80、100μmol/L二磷酸氯喹对细胞增殖无明显影响,各组间差异无统计学意义(P0.05);处理细胞48、72 h时,各浓度二磷酸氯喹对细胞增殖均有抑制作用,细胞活力均明显下降,各组间差异有统计学意义(P0.01),并具有剂量依赖性。不同浓度二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡均具有诱导作用,且随着浓度的增加,细胞凋亡愈加明显。结论二磷酸氯喹在体外可抑制THP-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用具有剂量依赖性。     

Nutlins类似物NL32对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨新型小分子Nutlins结构类似物NL32在体外对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度NL32(100、33、11、3.7、1.2、0.4、0.14μmol/L)对A549细胞增殖的影响,并计算其半数致死浓度(IC50);流式细胞术检测NL32对A549细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot法检测NL32对A549细胞p53蛋白及其下游蛋白p21表达的影响。结果不同浓度的NL32对A549细胞的增殖均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性,其对A549细胞的IC50为15.9μmol/L;NL32可诱导A549细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2期,且呈剂量依赖性;NL32能上调A549细胞p53和p21蛋白的表达。结论 NL32能有效地以浓度依赖的方式抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞发生G2期周期阻滞,NL32上调p53和p21蛋白的表达可能是其引发A549细胞周期阻滞和凋亡的原因之一。     

熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。     

三七总皂甙对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(Pulmonary artery smoothmuscle cell,PASMC)增殖和凋亡的影响及其机制。方法将PASMC分为5组:对照组(不给药)、bFGF组(8 ku/L)、bFGF+低、中、高剂量PNS组(bFGF 8 ku/L+300、450、600μg/L PNS),给药24 h后,采用MTT法检测PASMC的增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;Westernblot检测细胞中胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达。结果 PNS干预可抑制PASMC增殖,阻遏bFGF诱导的PASMC进入S期,提高滞留在G0/G1期细胞的比例,并使PASMC凋亡率和caspase-3蛋白表达上调,PASMC凋亡率达(18.70%±0.33%)～(28.40%±0.79%),是bFGF诱导组的10～14倍。结论 PNS能显著抑制bFGF诱导的PASMC增殖,促进其凋亡,其机制可能与其调控细胞周期转换、激活caspase-3蛋白的表达有关。     

牦牛肝脏蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的检测牦牛肝蛋白BGP对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其体外抗癌活性。方法用不同浓度的BGP分别作用于人肝癌HepG2细胞,作为实验组,同时设未处理细胞对照组和空白对照组,采用MTT法检测BGP(25、50和100 mg/L)作用HepG2细胞12、24、36和48 h对细胞增殖活性的影响,并于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测BGP(25、50、75、100 mg/L)作用HepG2细胞24 h,对细胞周期及凋亡的影响。结果不同浓度的BGP均可抑制HepG2细胞增殖,与未处理细胞对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),其中100 mg/L BGP作用48 h,对HepG2细胞抑制率最高(94.99%)。各浓度BGP实验组HepG2细胞形态发生明显改变,细胞间隙加大,细胞间连接不牢固,胞内颗粒增多,呈现生长受阻状态,甚至有细胞脱落,细胞数目减少,其中100 mg/L BGP作用48 h,凋亡细胞明显增多。不同浓度BGP作用HepG2细胞24 h后,均可不同程度抑制HepG2细胞生长并诱导细胞凋亡;与未处理细胞对照组相比,S期细胞比例明显升高(除25 mg/L BGP实验组),G0/G1期和G2/M期细胞比例明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论牦牛肝蛋白BGP可抑制HepG2细胞增殖,并促进凋亡,具有明显的体外抗肝癌活性。     

氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响。方法用不同浓度的氨氯地平作用小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法检测细胞的增殖水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测细胞周期蛋白CyclinB1和肿瘤抑制基因p53在蛋白水平和基因水平的表达。结果氨氯地平(1.75×10-3、3.5×10-3、7×10-3、14×10-3、28×10-3mg/ml)作用24、36、48h,均可抑制细胞增殖,作用48h的半数抑制浓度(IC50)为13.4μmol/L;氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞细胞周期G2期具有阻滞作用且可使细胞发生凋亡;氨氯地平作用后的小鼠肝癌H22细胞周期蛋白CyclinB1的表达明显降低,p53表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氨氯地平能显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,并通过下调G2期周期蛋白CyclinB1水平和上调肿瘤抑制基因p53的表达而达到抗肿瘤效果。     

Quercetin通过TGF-β1/smad3/c-myc信号通路对LOVO细胞增殖的抑制作用

目的研究Quercetin对结肠癌LOVO细胞株TGF-β1/smad3/c-myc信号通路的影响,并探讨其抑制LOVO细胞增殖的可能机制。方法采用5、10、20、40、80、160μmol/L的Quercetin处理结肠癌LOVO细胞48 h,以未经Quercetin处理的LOVO细胞作为对照组,采用MTT法检测Quercetin对细胞增殖活力的影响。以5 ng/ml的TGF-β1刺激1周的LOVO细胞为细胞模型,设对照组(C组)、TGF-β1组(T组)、TGF-β1+Quercetin组(TQ组)、Quercetin组(Q组)。C组为正常的LOVO细胞;T组为用5 ng/ml的TGF-β1刺激1周的LOVO细胞;TQ组为以5 ng/ml的TGF-β1刺激1周后,再经20μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞;Q组为经20μmol/L Quercetin处理72 h的LOVO细胞。分别采用平板克隆试验、免疫组化SP法、RT-PCR法、Western blot法分析Quercetin和TGF-β1对LOVO细胞克隆形成能力、smad3及c-myc表达的影响。结果与对照组相比,不同浓度Quercetin组可明显抑制LOVO细胞的增殖,且呈剂量依赖性,IC50值约为40μmol/L。TGF-β1能明显促进LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P<0.05);Quercetin能明显抑制LOVO细胞的增殖及smad3、c-myc的表达(P<0.05);与Q组相比,TQ组细胞增殖能力及c-myc的表达明显降低(P<0.05)。结论 Quercetin通过抑制TGF-β1/smad3信号通路下调靶基因c-myc的表达,并具有抑制LOVO细胞增殖的作用。     

吲哚美辛对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响

目的 探讨吲哚美辛对人羊膜上皮细胞水通道蛋白(Aquaporin,AQP)8表达的影响.方法 原代培养人羊膜上皮细胞,采用免疫细胞化学法进行鉴定.将细胞分为实验组和对照组,实验组以不同浓度的吲哚美辛(10、20、50、100、200 μmol/L)作用24 h,另以200 μmol/L吲哚美辛分别作用6、12、24、3...     

醋酸甲羟孕酮诱导结肠癌SW480细胞凋亡及其差异表达蛋白的分析

目的对醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate,MPA)诱导结肠癌SW480细胞凋亡时的差异表达蛋白进行分析。方法以不同浓度(25、50、75μmol/L)的MPA作用SW480细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖水平。以上述浓度的MPA作用SW480细胞48h,流式细胞术分析细胞的凋亡率及细胞周期各时相比例的变化。以50μmol/L MPA作用SW480细胞48h,透射电镜观察细胞结构的变化;应用双向电泳技术分离细胞总蛋白,PDQUEST8.0软件分析凝胶图谱,选择差异表达蛋白,以Agilent1100HPLC-Chip/MS系统进行MS/MS分析,搜索UniProtKB/SWISS-PORT,Homo Sapiens(Human)数据库筛选目标蛋白质。结果透射电镜下观察经MPA作用的SW480细胞可见明显的凋亡形态学变化;不同浓度的MPA对SW480细胞均有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,且呈剂量依赖性,细胞凋亡率最高可达56.15%;细胞周期分析表明,MPA诱导结肠癌细胞凋亡的作用可能与细胞周期的阻滞相关,此阻滞作用具有剂量依赖性;共鉴定出泛素、只含LIM结构域蛋白质3、热休克蛋白10、有机阴离子转运蛋白4、泛素羧基末端水解酶2、核苷二磷酸激酶-A、层黏连蛋白受体1共7种SW480细胞凋亡相关蛋白。结论 MPA具有诱导SW480细胞凋亡的作用,SW480细胞凋亡相关蛋白可能作为MPA抗结肠癌的潜在生物标志物。     

人参皂苷Rg1诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的最佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期;以最佳浓度Rg1干预K562细胞最佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;透射电镜观察细胞的超微结构;Southern blot检测细胞的端粒长度;Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达。结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h;经20μmol/L Rg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P<0.05),集落形成能力明显减弱(P<0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P<0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P<0.05),P16和RB蛋白表达上调(P<0.05)。结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关。     

低氧诱导因子-1α和上皮间质转化相关蛋白在甲状腺滤泡状癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和上皮间质转化(Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)相关蛋白在甲状腺滤泡状癌(Follicular thyroid carcinoma,FTC)组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测42份FTC组织中HIF-1α、锌指转录因子(Snail)、波形蛋白(Vimentin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)的表达;MTT法检测不同浓度CoCl2对FTC WRO细胞增殖活力的影响;RT-PCR法检测不同浓度CoCl2对WRO细胞HIF-1α基因mRNA转录水平的影响;免疫荧光法观察150μmol/L CoCl2处理24 h的WRO细胞中HIF-1α蛋白的核定位;Western blot检测150μmol/LCoCl2处理不同时间对WRO细胞中HIF-1α、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达的影响;Transwell小室试验检测150μmol/LCoCl2处理24 h对WRO细胞中侵袭及迁移能力的影响。结果在42份FTC组织中,HIF-1α、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达与多项临床指标相关,且4者表达显著相关(P<0.05);CoCl2可抑制WRO细胞的增殖活力;随着CoCl2浓度的增高,WRO细胞中HIF-1α基因mRNA的转录水平先增高然后趋于平稳;150μmol/L CoCl2处理24 h的WRO细胞内HIF-1α蛋白发生核转位;CoCl2处理的WRO细胞中随着HIF-1α蛋白表达的增多,Snail和Vimentin蛋白的表达逐渐增多,E-cadherin蛋白的表达逐渐减少(P<0.05);150μmol/L CoCl2处理24 h后,侵袭、迁移细胞数目较对照组明显增加。结论 HIF-1α能够通过上调Snail与Vimentin的表达,下调E-cadherin的表达,进而促进FTC EMT的发生。     

脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活化凋亡作用

目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/mlLPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/mlLPS分别刺激细胞3d和6d,台盼蓝拒染法检测细胞增殖情况;用1.0μg/mlLPS刺激细胞6d,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果经LPS刺激后24h,RAW264.7细胞培养上清中NO含量明显增加,且具有剂量依赖性;LPS刺激3d和6d后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间依赖性;LPS刺激6d时,细胞周期被阻滞在S期,并出现明显的凋亡。结论LPS具有诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。     

姜黄素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素(Curcumin)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法将Hep-2细胞用含不同浓度姜黄素(3、6、12.5、25μmol/L)的培养基分别培养24和48h,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响;台盼蓝染色法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测其对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测其对细胞DNA的影响。结果姜黄素可明显抑制Hep-2细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性;可明显降低细胞活力,且呈剂量依赖性;可使细胞阻滞在G2/M期,并诱导细胞出现典型的凋亡峰,凋亡率呈时间-剂量依赖性;能使细胞DNA形成典型的DNA-Ladder。结论姜黄素对人喉癌Hep-2细胞增殖及细胞活力具有显著的抑制作用,并能诱导Hep-2细胞发生凋亡。