Toll样受体3配体poly(I:C)干预对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的探讨Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)配体poly(I:C)干预对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜病变的影响。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立SD大鼠DM模型,4周后处死大鼠,收集视网膜,Real-time PCR法检测早期DM大鼠视网膜中TLR3和炎性因子(IL-6、IL-1α、TNF-α)mRNA的转录水平,Western blot检测大鼠视网膜中TLR3蛋白的表达水平。分别经正常和4周病程的DM大鼠玻璃体腔注射poly(I:C),48 h后处死大鼠,Real-time PCR检测大鼠视网膜中TLR3和IL-6、IL-1α、TNF-α基因mRNA的转录水平,Western blot检测TLR3蛋白的表达水平,HE染色观察大鼠视网膜结构的变化。结果早期DM组大鼠视网膜中TLR3基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均显著高于NC组(P均0.01),IL-6、IL-1α、TNF-α基因mRNA的转录水平均显著高于NC组(P均0.01);经玻璃体腔注射poly(I:C),能显著上调大鼠视网膜中TLR3基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平(P0.05或P0.01)以及IL-6和TNF-α基因mRNA的转录水平(P0.05);病程4周时,DM组大鼠视网膜结构与正常大鼠比较,无明显异常,而DM干预组较正常干预组视网膜水肿显著加重,结构出现紊乱。结论 DM大鼠早期视网膜中TLR3的表达显著增加;经玻璃体腔注射poly(I:C)可加重正常和DM大鼠视网膜损伤,可能是通过激活TLR3信号通路,上调信号通路下游产物IL-6、IL-1α、TNF-α的表达水平实现的。     

脂多糖对奶牛乳腺成纤维细胞增殖速率、胞内Toll样受体及其信号通路相关基因mRNA表达水平的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺成纤维细胞(bovine mammary fibroblast,BMFB)增殖速率、胞内Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)及其信号通路相关基因m RNA表达水平的影响。方法原代培养BMFB,用LPS(终浓度10μg/mL)刺激BMFB不同时间后,经CCK-8法检测BMFB的增殖速率,实时荧光定量PCR法检测BMFB胞内TLR及其信号通路相关分子m RNA的表达水平。结果 LPS刺激BMFB 0、1、3 h后,BMFB增殖速率差异无统计学意义(P0.05),LPS刺激BMFB 6 h开始,试验组BMFB的增殖速率明显快于对照组(P0.05)。与对照组比较,LPS刺激BMFB 12 h后,TLR2、TLR4、信号转导通路激活核转录因子κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha-α,TNF-α)和白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor associated kinase 1,IRAK1)基因m RNA表达水平显著升高(P0.05),髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)基因m RNA的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 BMFB可能通过TLR2和TLR4识别LPS,并与NF-κB信号通路级联诱导炎性细胞因子和趋化因子的释放,参与奶牛乳腺先天性免疫应答。     

肠道病毒71型灭活疫苗的小鼠细胞免疫效果

目的评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠的细胞免疫效果。方法分别以不同剂量(1、2.5、5、10μg/ml,均含铝佐剂1 mg/ml)、不同剂型(含铝佐剂1 mg/ml或不含铝佐剂)、不同免疫剂次(单次免疫或加强免疫)EV71灭活疫苗经腹腔免疫小鼠,0.5 ml/只,均设铝佐剂对照组(仅注射铝佐剂1 mg/ml)。采用经典小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)培养方法制备正常小鼠DC,瑞氏染色法检测细胞形态,流式细胞术分析其表型及纯度;免疫磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞,流式细胞术检测细胞纯度。ELISPOT法检测各组免疫小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ的水平;细胞因子试剂盒检测小鼠淋巴细胞培养上清及小鼠血清中细胞因子的水平。结果 DC形态不规则,表面树枝状突起形态不同,细胞核较大且不规则;DC纯度为(81.39±9.24)%,可高水平表达MHⅡ(I-A/I-E)类分子,中度表达CD86和CD40。CD4+、CD8+T细胞纯度分别为95.27%和94.08%。随着疫苗免疫剂量的增加,CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC显著增加,5μg/ml疫苗组达最大值,且明显高于其他组(P均0.05);5μg/ml疫苗组淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-5、TNF-α含量明显高于其他组(P0.05);1、2.5、5μg/ml疫苗组血清中IL-10含量明显高于铝佐剂对照组(P0.05),1μg/ml疫苗组明显低于2.5及5μg/ml疫苗组(P0.05)。含铝佐剂疫苗组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平及血清中IL-10含量均明显高于无铝佐剂疫苗组(P均0.05)。加强免疫组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平、血清中IL-10含量均明显高于单次免疫组(P均0.05)。结论 EV71灭活疫苗可诱导小鼠产生特异性细胞免疫反应,本实验为其进一步人体临床试验研究奠定了基础。     

卡介苗与结核分枝杆菌早期分泌靶抗原刺激人γδT细胞分泌细胞因子能力的比较

目的比较卡介苗(bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)与结核分枝杆菌早期分泌靶抗原(early secreted antigenic target-6,ESAT-6)刺激人外周血γδT细胞分泌细胞因子的能力。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),加入Anti-human gamma-delta TCR-FITC抗体标记γδT细胞,上流式细胞仪进行分离纯化;分别用BCG和ESAT-6刺激γδT细胞,同时,以不加任何刺激因子的γδT细胞作为空白对照,分别于刺激培养后第1、3、6、9和12天取上清,采用ELISA试剂盒检测IL-17、TNF-α及IFNγ的分泌水平;上流式细胞仪检测γδT细胞的增殖水平。结果γδT细胞占PBMC的4.83%,其纯度为88.90%;与空白对照组比较,BCG和ESAT-6刺激的γδT细胞分泌的IL-17、TNF-α及IFNγ水平均明显升高,且ESAT-6组明显高于BCG组(P均<0.05);与空白对照组相比,BCG组和ESAT-6组γδT细胞数量明显增加,且ESAT-6组较BCG组增加明显(P均<0.05)。结论 BCG和ESAT-6均可刺激γδT细胞增殖,并大量分泌IL-17、TNF-α及IFNγ,且ESTA-6的刺激作用强于BCG。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷对小鼠肺炎感染模型天然免疫应答的影响

目的探讨肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)dnaJ基因缺陷对肺炎感染模型小鼠天然免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、D39感染组和△dnaJ感染组,分别经鼻腔滴注30μl无菌PBS、30μl含2×107cfu的S.pn D39和△dnaJ(dnaJ基因缺陷株)菌液,复制小鼠肺炎感染模型。于感染后6、12、24、36和48 h处死小鼠,取肺组织,匀浆后分离上清,ELISA检测促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IFNγ的表达水平,HE染色观察感染12 h的小鼠肺组织炎症反应变化;将小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外感染S.pn D39和△dnaJ,细菌与细胞的比例为100∶1,感染1、2、3 h后分离细胞培养上清液,ELISA检测TNF-α和IL-6的表达水平。实时定量PCR和Western blot分别检测感染12 h的小鼠肺组织中模式识别受体TLRs基因mRNA的转录水平和炎症相关信号p38MAPK的磷酸化水平。结果与D39感染组相比,△dnaJ感染组小鼠肺组织炎症反应强度下降,TNF-α、IL-6和IL-1β等促炎因子水平达峰时间延迟,且峰值降低,RAW264.7细胞感染3 h分泌TNF-α和IL-6显著减少(P<0.01或P<0.05);小鼠肺组织Tlr2和Tlr13基因mRNA转录水平显著降低(P<0.05),p38MAPK的磷酸化水平也明显下降。结论肺炎链球菌dnaJ基因缺陷可下调肺炎感染模型小鼠的炎症反应、促炎因子分泌及胞内信号分子的激活,也可影响小鼠感染后肺组织中Trl2和Tlr13基因mRNA的表达,为进一步研究机体对肺炎链球菌DnaJ蛋白的天然免疫应答分子机制奠定了基础。     

抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因在CHO细胞中的表达

目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达。方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量。结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml。结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达。     

黄芪多糖在变应性哮喘大鼠模型中对树突状细胞的免疫干预作用

目的探讨黄芪多糖(Astragalus polysacchaside,APS)对变应性哮喘(allergic asthma,AS)大鼠模型树突状细胞(dendritic cells,DCs)的免疫干预作用。方法选用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)对30只大鼠进行连续雾化致敏,建立AS模型,其中10只为模型组,20只经腹腔注射APS,给药量分为100和200μg/kg(各10只),同时以10只未建模的大鼠为对照组。给药4 h后观察大鼠的症状,并按预设评估标准评价治疗效果;给药24 h后检测各组大鼠肺功能,并处死大鼠,取肺黏膜相关淋巴组织,用免疫组织化学技术检测CD80、CD86、IL-4、IL-10、IL-12的表达情况。结果根据预设的评估情况,100μg/kg APS干预组9只显效,1只缓解,200μg/kg APS干预组10只显效。与对照组比较,模型组的第1秒肺活量(forced expiratory volume in one second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)比值、最大呼气流速(peak expiratory flow rate,PEF)及IL-10、IL-12表达水平均明显下降(P<0.05),CD80、CD86、IL-4的表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,100及200μg/kg APS干预组FEV1/FVC比值、PEF及IL-10、IL-12表达水平显著升高(P<0.05),CD86、CD80及IL-4的表达水平明显降低(P<0.05);100与200μg/kg APS干预组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 APS在AS大鼠模型中可通过调整DCs的表型表达缓解AS病情。     

阿奇霉素对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1的调节作用

目的 探讨阿奇霉素在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1(Triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的调节作用及TREM-1调控对炎症反应的意义。方法将THP-1细胞分为LPS组(加入1μg/ml LPS)、LPS+TREM-1/FC融合蛋白组(加入1μg/ml LPS和1μg/ml TREM-1/FC融合蛋白)和LPS+阿奇霉素组(加入1μg/ml LPS和10μg/ml阿奇霉素)。分别于培养4、8、12、24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中TREM-1基因mRNA及蛋白的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中可溶性TREM-1(Soluble TREM-1,sTREM-1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平。结果 TREM-1/FC融合蛋白和阿奇霉素可抑制在LPS刺激下THP-1细胞TREM-1蛋白的表达,但对其基因表达无抑制作用;二者还可明显抑制炎性细胞因子的分泌,与LPS组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且TREM-1/FC融合蛋白的抑制作用强于阿奇霉素。结论 TREM-1是调控炎症反应及感染性疾病的重要靶点;阿奇霉素对TREM-1具有调节作用,为其进一步的临床研究提供了实验依据。     

紫草对SAP大鼠肝组织保护的实验研究

探讨紫草对SAP大鼠肝组织HSP70表达与血清ALT、AST、TNF-α和IL-6之间关系。选用Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、紫草3 g/kg和1 g/kg剂量组(C组和D组),检测术后24 h和72 h肝组织HSP70的表达,血清ALT、AST、TNF-α和IL-6水平。HSP70表达:A组较少,B组最多,C组和D组明显下调,与B组比较(P0.05)。紫草降低血清ALT、AST、TNF-α和IL-6水平:C组、D组与B组比较(P0.05)。     

绿豆肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的探讨绿豆肽对RAW264. 7巨噬细胞的免疫调节作用。方法在体外培养的RAW264. 7巨噬细胞中,分别加入10、100、200和400μg/mL的绿豆肽,检测RAW264. 7巨噬细胞的增殖能力、吞噬能力、SOD酶活力、NO含量和细胞因子分泌量,同时检测绿豆肽对经脂多糖(lipo-polysaccharide,LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞中细胞因子分泌和LC3、p62蛋白表达水平的影响。结果与空白对照组比较,不同浓度绿豆肽组RAW264. 7巨噬细胞的增殖率及吞噬率显著提高(P 0. 05),400和200μg/mL组的SOD酶活力、NO含量及分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P 0. 05)。各浓度绿豆肽均可显著抑制LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6分泌量(P 0. 05),浓度为400μg/mL时,上述细胞因子的分泌量与空白对照组差异无统计学意义(P 0. 05)。不同浓度绿豆肽均可降低LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞胞内LC3的含量,上调p62蛋白的表达量。结论绿豆肽可激活巨噬细胞、增加自身代谢酶活力、释放细胞因子,通过抗炎作用及抑制细胞自噬,从而提高宿主细胞的免疫功能。     

乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭的影响及其机制

目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,ULI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)随机分为4组:对照组...     

姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及对细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 研究姜黄素对脓毒症小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的保护作用及对细胞间黏附分子-1(Intercel-lular adhesion molecule-1,ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法将SD小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和姜黄素组(Cur组)。采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation andpuncture,CLP)复制脓毒症相关性ALI模型,造模24 h后,Cur组给予200 mg/(kg.d)姜黄素,Sham和Sep组给予等量生理盐水,DMSO组给予等量DMSO,均经腹腔注射给药。HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化;ELISA法检测小鼠血浆中ICAM-1和TNF-α含量的变化;Western blot分析小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达。结果 Cur组小鼠在给药后12 h肺组织病理变化与Sep组相比有所减轻,48 h姜黄素作用达最强,且各种病理改变明显减轻,部分肺组织已恢复到正常形态;Cur组小鼠血浆中lCAM-1的含量在给药后6、12、24和48 h均明显低于Sep组(P<0.05),Cur组小鼠血浆中TNF-α的含量在给药后24 h明显低于Sep组(P<0.05);给药后24 h,Cur组小鼠肺组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达水平与Sep组相比明显降低(P<0.05);DMSO组与Sep组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素能够有效减轻脓毒症所致ALI,这一作用与抑制ICAM-1和TNF-α的过度表达有关。     

穿心莲内酯对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中NF-κB信号通路的影响

目的探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+LPS组。AP+LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3 d,第3天注射后2 h,LPS组和AP+LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10%甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化;免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达;Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB(Phospho-inhibitor ofκB,p-IκBα)和p-NF-κB(P65)蛋白的表达。结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应;AP+LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少。与LPS组相比,AP+LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制;p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化。     

低剂量电离辐射对糖尿病小鼠血清中炎症因子表达的影响

目的探讨低剂量电离辐射(LDR)对链尿佐菌素(STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病(DM)小鼠血清中炎症因子表达的影响。方法取健康C57BL/6J小鼠,经腹腔注射STZ复制小鼠糖尿病模型,并设空白对照组。将糖尿病模型小鼠分为DM和DM/LDR组,空白对照组分为LDR组及对照组。DM/LDR组和LDR组给予25mGyLDR,隔日照射1次,共照射4周;DM组和对照组不经LDR照射。分别于照射后2、4、8、12及16周,采用ELISA法检测小鼠血清中不同炎症因子的表达水平。结果LDR照射前,4组小鼠血清中ICAM-1和IL-18的表达水平较为接近,而糖尿病小鼠血清中TNFα和MCP-1的表达水平显著高于非糖尿病小鼠;给予LDR照射后,在不同时间点DM/LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平与DM组相比,均显著降低,LDR组小鼠血清中IL-18、MCP-1及TNFα的表达水平较对照组明显增加。ICAM-1表达的变化与其他因子不同,LDR照射4周时,糖尿病小鼠显著高于非糖尿病小鼠,但在任何时间点,DM/LDR与DM组、LDR与对照组之间差异均无统计学意义。结论在糖尿病状态下,LDR能有效降低血清中IL-18、TNFα和MCP-1的表达水平,缓解糖尿病肾脏中的炎症反应强度;但在正常机体中表现为提高免疫力,促进免疫相关因子的释放。表明LDR针对机体所处的不同状态发挥着不同的生物调节功能。     

人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨人参皂苷单体Rh2(S亚型)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期的KG1α细胞,分为两组:空白对照组(常规培养)和人参皂苷单体Rh2(S)组,采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态及数量,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期的分布,Real-time PCR检测细胞中β-catenin基因mRNA水平,免疫细胞化学法检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的定位及表达,Western blot检测细胞中β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平。结果人参皂苷单体Rh2(S)对KG1α细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Rh2(S)作用48 h后,可见KG1α细胞分散生长,数量明显减少;可见数量不等,程度不同的凋亡细胞;G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05),G2+M和S期细胞比例明显下降(P<0.05);细胞中β-catenin基因mRNA水平明显降低(P<0.01)。β-catenin、TCF4、CyclinD1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷单体Rh2(S亚型)对KG1α细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能抑制Wnt/β-catenin/TCF4/CyclinD1信号通路,使细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

猪瘟病毒感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化

目的分析猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)感染猪细胞因子和趋化因子的动态变化。方法将健康猪随机分成2组:感染组和对照组,感染组经颈部肌肉注射CSFV石门株1×103TCID50/头,对照组注射等体积的生理盐水。感染后每日观察实验猪的临床症状。分别于感染前和感染后4、6、8d采血,分离外周血白细胞和血清,应用实时荧光定量RT-PCR检测外周血白细胞IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFNγ、TNF-α和干扰素诱导蛋白10(Interferon inducible protein10,IP-10)mRNA的转录水平及全血中的病毒载量;应用ELISA法检测血清中各细胞因子的含量。结果 CSFV感染后,猪的临床症状分值逐渐升高,体温在第3天达最高,然后下降;白细胞总体呈明显下降趋势;细胞因子IL-1、IL-4、IL-6、TNF-α和IP-10的mRNA转录水平上调,IL-10的mRNA转录水平下调,IFNγ的mRNA转录水平基本未发生变化;CSFV感染猪在感染初期和症状明显期(4d和6d)的外周血的病毒载量呈明显上升趋势,而在濒死期(8d)病毒载量有所下降;CSFV感染后猪血清中的TNF-α含量上升,IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和IFNγ的含量下降。结论猪瘟病毒感染猪TNF-α和IL-10 mRNA的转录水平与血清中的细胞因子含量变化趋势一致,而其他细胞因子mRNA的转录水平与血清中含量变化并不一致。     

可溶性白细胞介素-5与白细胞介素-13受体联合应用对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响

目的观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptorα,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。末次激发24 h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavagefluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平。结果与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻。与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01)。结论 sIL-5Rα与sIL-13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症。     

阿昔莫司对RAW 264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达及其调控的影响

目的研究阿昔莫司对巨噬细胞RAW264.7三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporterA1,ABCA1)及其上游调控因子肝脏X受体α(Liver X receptor,LXRα)的影响,探讨其促进胆固醇逆转运(Reversecholesterol transport,RCT)、抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的可能机制。方法体外培养RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组(不含阿昔莫司)和不同浓度的阿昔莫司干预组(分别含5、10、25μg/ml阿昔莫司),作用24 h后,采用RT-PCR法检测各组细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中ABCA1和LXRα蛋白的表达;闪烁计数法检测各组细胞内胆固醇的流出。结果阿昔莫司呈浓度依赖性地增加RAW264.7细胞中ABCA1和LXRα基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01)及细胞内胆固醇的流出率(P<0.01)。结论阿昔莫司可通过LXRα途径上调巨噬细胞ABCA1的表达,促使细胞内胆固醇流出,从而延缓AS的发生发展。     

柳氮磺吡啶与维生素K3联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的观察柳氮磺吡啶(SAS)与维生素K3(VK3)联合应用对神经胶质瘤C6细胞增殖的影响,并探讨二者的作用机制。方法取对数生长期的大鼠神经胶质瘤C6细胞,分别加入不同浓度的SAS、VK3,MTT法检测各组细胞增殖水平,RT-PCR及Western blot法分别检测细胞IKBα基因mRNA的转录水平及P65蛋白的表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡。结果SAS单独作用于C6细胞,呈剂量依赖性地抑制细胞增殖;SAS与VK3联合作用,抑制细胞增殖效果更明显。SAS与VK3联合作用4、8、12h,C6细胞IKBα基因mRNA的转录水平逐渐下降,4h时,C6细胞P65蛋白的表达水平增加,而8、12h时降低。SAS与VK3联合作用,TUNEL阳性细胞率明显高于空白对照组及SAS、VK3单独作用组。结论SAS与VK3联合应用,可通过影响NF-κB/IKBα基因的表达,抑制C6细胞增殖,二者联合应用可减少单独药物用量,减轻对正常细胞的毒性作用。