2017年兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻分子流行病学分析

目的分析2017年兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻病原体及其流行特点,为病毒性腹泻的防控提供科学依据。方法收集2017年就诊于兰州大学第一医院儿科的5岁以下急性腹泻患儿粪便样本219份,采用双抗体夹心ELISA法检测A组轮状病毒(rotavirus A,RVA),阳性样本采用RT-PCR法进行G/P分型;同时采用RT-PCR法鉴定人杯状病毒(human calicivirus,HuCV)、人星状病毒(human astrovirus,HAstV),PCR法鉴定腺病毒(adenovirus,AdV),阳性样本进行测序。结果 219份样本中,病毒总检出率80. 37%,其中居于首位的是RVA(51. 60%),其次为Hu CV(20. 09%)、AdV(4. 11%)及HAstV(4. 57%)。RVAG基因型中以G9(90. 27%)为主,P基因型以P[8](91. 15%)为主,其次为P[4](7. 96%),二者组合主要为G9P[8](88. 50%)。HuCV全部为诺如病毒(noruvirus,NoV),未检出札如病毒,NoV以GⅡ-4型(52. 27%)为主,其次为GⅡ-3型(36. 36%),仅1例GⅠ-3型。AdV以F组的41型(55. 56%)为主,HAstV全部为1型。病毒性腹泻的高发季节特点以RVA最为明显,在第4季度,高危人群年龄在0～17月龄。结论兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻病原多样,RVA为最主要病原,主要流行株为G9P[8],其次为NoV,主要流行株为GⅡ-4型,与近年全国流行的优势基因型相同。     

快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用

目的建立检测呼吸道合胞病毒(RSV)的快速细胞培养法,并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断。方法采用自制的抗RSV的单克隆抗体,经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV,并与病毒分离培养比较,再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较,探讨其临床实用性。结果57份咽拭标本中,1份快速细胞培养法及直接涂片法检测均为阳性,阳性率1.8%,未分离到病毒。108份鼻咽分泌物中,快速细胞培养法检出21份阳性,阳性率19.4%。直接涂片法检测出14份阳性,阳性率13%,病毒分离培养法检出阳性12份,阳性率11%。快速细胞培养法与其他两种方法相比,阳性检出率差异有显著意义。自制试剂盒与进口试剂盒检出40份鼻咽分泌物标本,阳性率均为35%。结论将直接涂片法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是对RSV感染进行早期诊断的实用方法。     

湘潭县和融水县2岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻病流行病学调查

目的通过对监控区域内腹泻病例的监测,获取轮状病毒(rotavirus,RV)腹泻发生率。方法在广西壮族自治区融水县、湖南省湘潭县两个地区的村卫生室及乡镇卫生院中开展腹泻监测,收集腹泻病例和流行病学信息,采集病例粪便样本。应用ELISA法检测RV,RT-PCR法对其进行基因分型。结果湘潭县和融水县RV腹泻高峰主要集中在2月份,分别占总数的45. 9%和53. 9%;两地腹泻发病率为285. 1/(1 000人·年),RV检出率为18. 0%,RV腹泻发病率为51. 2/(1 000人·年);湘潭县和融水县的轮状病毒血清型均以G9型(分别占58. 7%和73. 7%)和P8型为主(分别占67%和81. 6%)。结论 RV是导致2岁以下婴幼儿腹泻的常见病原体,湘潭和融水县的RV流行株均为G9型和P8型,流行高峰为2月。     

人巨细胞病毒基因克隆及分子探针的临床应用

以 PuC18为载体克隆了人巨细胞病毒(HCMV)AD169株 ECoRI 部分基因组片段。以α~(-32)P 标记的 ECoRI-Z 片段为探针,对尿、脐带血和宫颈分泌物等标本进行了 HCMV DNA 的临床诊断分析。该探针可以检测出12pg 水平的 HCMV DNA,但与人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVI)和人单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)、λ噬菌体、Puc18载体 DNA 等不杂交。以斑点杂交法检测了正常新生儿尿标本50份和临床诊断为新生儿黄疸的尿标本109份,其阳性率分别为8%和36%;此外还检测了172份随机收集的新生儿脐带血白细胞 DNA,其阳性率为15%,说明了我国新生儿 HCMV 感染的严重性。检测结果亦证实患宫颈炎和宫颈癌的患者,HCMV DNA 检出率明显高于正常妇女,说明分子杂交法可用于各种临床标本 HCMV DNA 的检测。     

狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价

目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85%,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1。结论成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础。     

乙型肝炎病毒血清前S1抗原检测及其临床分析

目的探讨乙型肝炎病毒与前S1抗原的相关性。方法500例乙型肝炎病毒阳性血清采用酶联免疫法(ELISA)检测前S1抗原。结果280例HBeAg阳性标本中前S1抗原阳性率75.4%;120例HBeAg阴性而抗HBe阳性标本中前S1抗原阳性率53.3%;89例HBsAg和抗HBc阳性标本中前S1抗原阳性率67.4%。结论乙型肝炎病毒前S1抗原与HBeAg阳性呈高度相关性,前S1抗原能够敏感地反映乙型肝炎病毒复制情况,特别是在HBeAg阴性患者中是否有病毒复制。     

重庆地区儿童中人冠状病毒流行情况分析

目的了解重庆地区住院患儿所患急性呼吸道感染与人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43和HCoV-229E的相关性,并分析这4种HCoV的流行特征。方法采集2007年4月～2009年3月于重庆医科大学附属儿童医院因急性呼吸道感染住院的996份患儿的鼻咽部分泌物,经RT-PCR检测排除呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)和人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)阳性标本460份,采用RT-PCR法对536份RSV和hMPV阴性标本进行HCoV检测。结果 536份标本中共检出HCoV阳性10份,阳性率为1.86%,其中HCoV-HKU1 3份(0.56%),HCoV-NL63 4份(0.74%),HCoV-OC43 3份(0.56%),HCoV-229E 0份;10例患儿中男性9例,女性1例,年龄分布为0～5个月6例(60%),6～11个月2例(20%),12～23个月1例(10%),2～3岁1例(10%);3岁以上的未发现。HCoV感染呈全年散发,其中HCoV-HKU1感染集中在冬春季,HCoV-NL63和HCoV-OC43感染集中在夏秋季。HCoV感染的临床症状表现为发热、咳嗽、痰、喘息、呕吐和腹泻;临床诊断为支气管肺炎4例,间质性肺炎3例,迁延性肺炎1例,毛细支气管炎1例、急性喉气管支气管炎1例,其中有6例合并症状性腹泻。结论重庆地区因急性呼吸道感染住院的患儿中HCoV感染率较低,HCoV可引起下呼吸道感染和消化道感染。     

PCR荧光探针法在检测分泌物沙眼衣原体、淋球菌及解脲支原体中的应用

目的评价PCR荧光探针法用于检测分泌物沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的适用性。方法热裂解法提取CT、NG、UU分泌物样本中病原微生物DNA,以其作为模板,采用PCR荧光探针法检测样本中CT、NG、UU的阳性率。同时采用乳胶法检测相应样本中CT的阳性率,培养法检测相应样本中NG及UU的阳性率,并将检测结果分别与PCR荧光探针法进行比较。结果 1 209份CT标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(9.76%)显著高于乳胶法(2.64%),1 491份NG标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(6.64%)显著高于培养法(4.16%),差异均有统计学意义(P0.05);1 260份UU标本中,PCR荧光探针法阳性检出率(37.6%)略高于培养法法(36.8%),但差异无统计学意义(P0.05)。结论与培养法和乳胶法比较,荧光探针PCR法对CT和NG的阳性检出率更高,而对UU的阳性检出率与培养法相近,适用于分泌物中CT、NG及UU的检测。     

人巨细胞病毒pp65 IgG-AI快速诊断试剂的临床应用

目的评价人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)pp65 IgG-亲和力指数(Avidity index,AI)快速诊断试剂的临床应用价值。方法以自制的截短pp65重组蛋白作为诊断试剂,对本室血清库中保存的标本,采用ELISA间接法检测其特异性IgG抗体,分析该试剂的灵敏度、特异性和准确度。检测临床收集的89份患者血清标本(其中5例被明确诊断为HCMV活动性感染)的pp65 IgG抗体,并与意大利DIESSE公司IgG检测试剂盒结果进行比较。同时,对pp65 IgG阳性标本,运用尿素变性ELISA间接法检测其AI值,与意大利DIESSE公司IgM检测试剂盒结果进行比较,评价AI检测在HCMV感染诊断中的价值。结果用pp65快速诊断试剂检测阳性、阴性血清特异性IgG抗体,均与原确认结果相同,灵敏度、准确度和特异性均达100%。两种诊断试剂IgG抗体检测结果,差异无显著意义。pp65诊断试剂对pp65 IgG阳性标本的AI值进行检测,AI<60%标本共41份,阳性率为46.07%,较参比试剂IgM检测阳性率(23.59%)高;5份明确诊断HCMV活动性感染的患者血清标本中,pp65诊断试剂与参比试剂检测IgG抗体,各有4份阳性,一致率为100%,pp65诊断试剂检测AI值为阳性的标本有3份,其中,参比试剂检测IgM为阳性的仅有1份。临床明确诊断为HCMV肺炎的患者血清标本,诊断试剂检测AI值为可疑阳性,但参比试剂检测HCMV IgM抗体为阴性。结论pp65 IgG-AI快速诊断试剂可初步诊断HCMV感染,简单快速,重复性好,具有良好的临床应用前景。     

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)血清抗体的效果。方法以FAMA法为"金标准",同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本(水痘疫苗免前92份、免后92份)的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度(GMT)为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率(灵敏度)为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高(z=-6.03,P0.001)。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义(P0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P0.05)。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8~1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。     

脊髓灰质炎灭活疫苗在中国婴儿中的免疫持久性

目的评价脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)在中国婴儿中的免疫持久性。方法选择广西壮族自治区平乐县11个乡(镇)的372名健康婴儿,随机分为2组:176名婴儿分别于2、3、4月龄接种1剂IPV疫苗,196名婴儿分别于2、3、4月龄口服1粒脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(Oral poliovirus vaccine,OPV)。两组均于基础免疫后1个月及18月龄时采集静脉血,采用微量中和试验检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体(Neutralizing antibody,NA)滴度。结果两组婴儿接种疫苗后18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均明显低于基础免疫后1个月。18月龄时IPV组血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA阳性率明显低于基础免疫后1个月,且差异均有统计学意义(P均<0.001);OPV组差异无统计学意义(P=0.111)。IPV组部分婴儿在18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA滴度小于1︰8,比例分别为11.4%、17.1%和18.2%。结论 IPV基础免疫后至18月龄时,婴儿抗脊灰病毒抗体保护水平下降,需进行加强免疫。     

DNA水平电泳检测重庆地区汉族人MDR1C3435T基因多态性

目的应用DNA水平聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测重庆地区汉族人MDR1C3435T基因的多态性。方法PCR扩增重庆地区正常汉族人外周血MDR1C3435T基因,以MboⅠ进行限制性酶切,用DNA水平PAGE作图谱分析。结果200名重庆地区汉族人MDR1C3435T基因中,表型T/T的频率为0.15,T/C为0.49,C/C为0.36。MDR1C3435T基因T频率为0.395,基因C为0.605。结论重庆地区汉族人MDR1C3435T基因的分布与我国其他地区人群基本接近,地区差异不明显。DNA水平PAGE为一种简单可靠的基因多态性分析方法,值得在基层单位推广。     

口服轮状病毒减毒活疫苗Rotarix的现状及研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内导致婴幼儿重症腹泻的重要病原。由于当前尚无治疗RV感染的特效药物,因此,开发安全、有效的疫苗具有重要意义。G1型RV流行范围较广,本文主要对目前国内外上市的3种RV疫苗中的G1P[8]型Rotarix疫苗的情况作一综述。     

吡咯并[2,3-c]氮杂卓-4,8-二酮衍生物的合成

将N-(2-吡咯甲酰基)-β-丙氨酸甲酯(Ⅲ)与卤代烃经烷基化反应得到的产物水解,得到N-(1-烷基-2-吡咯甲酰基)-β-丙氨酸(Ⅱa～Ⅱc),收率84.7%～91.2%;以化合物Ⅱ为原料,在多聚磷酸-P2O5作用下,经分子内环化反应合成了标题化合物1-烷基-6,7-二氢-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮杂-4,8-二酮(Ⅰa～Ⅰc),收率69.1%～77.2%。3步反应总收率为61.8%～69.1%。测定了3个标题化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。     

1-甲基-3-正丙基-4-氨基-5-吡唑羧酰胺的制备

1 甲基 3 正丙基 5 吡唑羧酸经硝酸 -浓硫酸硝化制得 1 甲基 3 正丙基 4 硝基 5 吡唑羧酸 ,收率 85 %;用氯化亚砜将其酰氯化制得 1 甲基 3 正丙基 4 硝基 5 吡唑羧酰氯 ,该吡唑羧酰氯与浓氨水反应制得 1 甲基 3 正丙基 4 硝基 5 吡唑羧酰胺 ,收率 90 %;硝基吡唑羧酰胺在乙醇中用氯化亚锡还原制得 1 甲基 3 正丙基 4 氨基 5 吡唑羧酰胺 ,收率 84%。研究了反应的较佳合成工艺条件 ,产品经TLC、IR及MS谱进行了结构表征。     

轮状病毒检测技术的研究进展

轮状病毒是引起婴幼儿病毒性腹泻最常见的病原体,对轮状病毒进行快速、准确的检测,对轮状病毒感染的病原学、流行病学研究以及疫苗的研制和治疗效果评价均有重要意义。本文就轮状病毒检测技术的最新研究进展作一综述。     

红霉素A9(O-叔丁基二甲基硅)肟的合成

以红霉素A与盐酸羟胺反应得到红霉素A肟(EMAO,Ⅰ),再以叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSC l)与Ⅰ进行硅醚化反应制备红霉素A9(O-叔丁基二甲基硅)肟(TBDS-EMAO,Ⅱ)。研究了硅醚化反应的溶剂化作用,有机碱催化作用,Z、E异构体的活性。实验结果表明,含孤电子对的极性非质子溶剂及相应的有机碱催化剂有助于在含有多个羟基的Ⅰ中进行肟羟基的选择性硅醚化反应。硅醚化反应以THF为溶剂,室温,反应物浓度c(Ⅰ)=0.27~0.53 mol/L,硅醚化试剂用量n(TBDMSC l)∶n(Ⅰ)=1.4∶1,有机碱用量n(Et3N)∶n(Ⅰ)=2.2∶1时,收率可达97%。用HPLC分析了产品及相应的异构体,Z-Ⅱ反应活性较E-Ⅱ高。用IR1、HNMR1、3CNMR、EI-MS以及元素分析确证了相关物质的结构。     

国产冻干麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗的接种反应和免疫原性观察

目的观察冻干麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗的接种反应和免疫原性。方法分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期进行,分别选择7～15岁和8～18月龄儿童接种国产MMR疫苗,同时设进口MMR疫苗、单价麻疹、腮腺炎、风疹疫苗对照,进行接种反应和免疫原性观察。结果Ⅰ期7～15岁接种国产MMR疫苗的11人中,仅3人发生局部弱反应,反应率为27.3%;8～11月龄接种国产MMR疫苗的26人中,发热率和皮疹反应率分别为11.5%、15.4%,其中高热率为3.8%。Ⅱ、Ⅲ期观察的1188名8～18月龄儿童中,接种国产MMR疫苗发热率为10.69%,皮疹反应率为3.64%,局部反应率为0.44%,其他反应率为0.22%。与对照疫苗比较,仅发热率高于腮腺炎疫苗及风疹疫苗,且差异有统计学意义,其他反应差异均无统计学意义。接种国产MMR疫苗后,麻疹、腮腺炎、风疹HI抗体阳转率和抗体GMT分别为99.5%、85.9%、100%和1∶57、1∶4.2、1∶890。与对照疫苗比较,麻疹抗体GMT国产MMR疫苗高于进口MMR疫苗和麻疹疫苗,抗体阳转率国产MMR疫苗高于进口MMR疫苗,且差异有统计学意义;腮腺炎抗体GMT国产MMR疫苗低于进口MMR疫苗,且差异有统计学意义,其他各疫苗组差异均无统计学意义。结论国产MMR疫苗具有良好的安全性和免疫原性。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因多态性与山东济宁地区汉族女性原发性高血压的相关性

目的研究血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因A1675G多态性与山东济宁地区汉族女性原发性高血压(EH)的相关性。方法随机选取山东省济宁地区汉族女性EH患者127例(EH组)和体检正常的女性119例(正常对照组),提取外周血基因组DNA,PCR扩增A1675G基因,高分辨率熔解(HRM)法测定A1675G基因的多态性。结果EH组AA、AG和GG基因型频率(分别为26.8%、53.5%和19.7%)与正常对照组(分别为27.7%、42.0%和30.3%)比较,差异均无统计学意义;等位基因频率(A:53.5%;G:46.5%)与正常对照组(A:48.7%;G:51.3%)比较,差异也无统计学意义。结论A1675G基因多态性可能与山东省济宁地区汉族女性原发性高血压无明显相关性。