群体感应淬灭酶AiiO的克隆表达及其发酵工艺优化

群体感应淬灭酶AiiO具有降解信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)的活性,从而抑制病原菌的致病性。为提高AiiO表达量,构建了重组工程菌Escherichia coli BL21(DE3)-pET-28a(+)-aiiO,对其发酵生产AiiO过程中诱导温度、氮源质量浓度、诱导时机和乳糖添加量进行了优化。结果表明,在诱导温度25℃、蛋白胨20 g/L和酵母粉10 g/L、发酵初始时添加乳糖、乳糖添加量为5 g/L的优化条件下,胞内可溶性AiiO的表达量达到374.26 mg/L。     

醛糖还原酶cDNA的克隆和表达

醛糖还原酶能促使葡萄糖转化成山梨醇,是多元醇代谢通路的限速酶,与糖尿病并发症的发生和发展有密切关系.用RT-PCR扩增醛糖还原酶基因,将扩增产物克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b(+)-AR.经PCR、双酶切和序列测定鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定后,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得重组蛋白AR-(His)6.紫外分光光度法对AR-(His)6进行酶活检测,其比活力为0.45 U/mg,为下一步筛选具有抑制醛糖还原酶活性的化合物及开发有临床应用价值的醛糖还原酶抑制剂提供参考.     

骨形态发生蛋白-2基因工程菌的构建及可溶性研究

骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白-2诱导成骨活性最强,在骨组织工程研究中最具研究意义.为获得能高效表达溶解性高的人骨形成蛋白-2(BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法扩增得到BMP-2的基因序列,直接将PCR产物连接到胞内融合表达型T载体质粒pMT-L上,构建包括麦芽糖结合蛋白(MBP)、连接肽、6个His、EKsite(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)和BMP-2的表达载体,转化E.coli DH5α,经抗性筛选和菌落PCR鉴定,抽提阳性克隆质粒转化表达宿主E.coli BL21(DE3),成功构建可在大肠杆菌细胞质内表达MBP-BMP-2融合蛋白的基因工程菌.工程菌经0.1mmol/L IPTG诱导后,可获得表观分子量约为55kD的以可溶形式表达的BMP-2融合蛋白.     

透明颤菌vgb基因整合型大肠杆菌的培养特性

透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白，其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控。大肠杆菌E.coli BV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coli BL21中构建得到的。研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长特性及VHb合成的影响，研究表明，0．2mmol/L的二价铁离子具有促进VHb表达从而刺激菌体细胞生长的作用。在0．1L／h低通气量条件下，E．coli BV分别进行间歇培养和流加培养，低溶氧刺激VHb在短时间内迅速大量合成，改善了细胞内氧的传递性能，使生长期分别延长到25h和45h，生物量(DCW)分别达到9．6g/L和26g/L。     

重组人白细胞介素-6补料分批发酵工艺研究

在传统分批发酵工艺的基础上。对E.Coli表达IL-6的补料分批发酵工艺进行研究，结果表明：在发酵诱导前补料可在表达纯度相差无几的情况下提高菌体的产量，最终提高了生产效率，降低了成本。通过几次发酵比较，结果如下：分批补料工艺菌体生物量平均为10．8g/L，SDS—PAGE电泳法测IL-6表达量平均为40％，比分批发酵8．3g／L的菌体生物量及3．5％的纯度提高30．1％和3．9％。     

胰岛素原基因的高效分泌表达系统——甲醇酵母Pichia pastoris

为了提高重组人胰岛素的表达效率，使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia
pastoris.　Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源，而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子，可用来调控
异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单，可进行高水平的胞内或胞外表达，及对表达产物进行翻译后
修饰与加工等显著优点.将含有小C肽或不含有C肽的人胰岛素原类似物基因整合到酵母基因组上来发酵生
产人胰岛素原，在表达量上，每升发酵液中可以得到胰岛素原250～300 mg，分泌水平约占总蛋白量的20%
，重组人胰岛素具有与猪胰岛素相同的受体结合能力和生物活性.     

提高碱性磷酸酶在E.coli胞内表达的可溶性及活性

以E.coli DH5a基因组为模板PCR扩增得到无信号肽的碱性磷酸酶基因片段,与胞内融合表达型T栽体连接得到重组质粒,转化表达宿主E.coli BL21(DE3)和E.coli origami(DE3),经0.1 mM IPTG诱导表达,超声破碎细胞后,SDS-PAGE分析可溶性,融合蛋白在E.coli origami(DE3)中的可溶蛋白含量比E.coli BL21(DE3)中高.融合蛋白的可溶部分经Ni2+螯合亲和纯化,纯化后E.coli origami(DE3)中蛋白活性比E.coli BL21(DE3)中明显提高,达到1 614.3U/mg蛋白.     

重组大肠杆菌生产人表皮生长因子的发酵条件

通过质粒转化实验,获得了较好的产hEGF重组菌,对重组菌发酵进行优化,获得最佳初始糖质量浓度为5g/L、蛋白胨20g/L、酵母抽提物10g/L、（NH4）2HPO43．5g／L、Amp100mg/L;最佳接种时间为种子液生长到5－6h,即菌体OD值在1．0－2．0;诱导剂最佳添加时间为8h,即菌体OD值在8．0左右,通过流加发酵进行高密度培养,可使重组菌的hEGF的产率达102mg/L,比优化前提高了近30％。     

重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的摇瓶发酵条件

研究了重组大肠杆菌E.coli II-1摇瓶发酵生产谷胱甘肽合成酶系的工艺条件,确定了E.coli II-1的最适产酶条件,最佳发酵培养基组成（ g/L)为：葡萄糖10,蛋白胨5,酵母膏2．5,K2HPO4．3H2O 4．0,KH2PO4 1．0,FeCl3 0.2 ,MnCl2.01,CoCl2.01,CaCl20.1,ZnCl2 0.02,H3BO3 0.01,NaMoO4 0.01,NaCl1.0,Na2SeO3 0.02,发酵起始PH7．2,灭菌后加入无菌氨苄青霉素至100ug/mL,每个三角瓶装液量为100毫升,培养前期的温度控制在37度,后期将温度降为35度,拥护档转速200r/min,发酵周期16h,在此条件下,重组大肠杆菌E.coliII-1的谷胱甘肽合成酶系的活性为862．3U／L。     

胰岛素折叠模型肽的构建及表达

类胰岛素生长因子-1能同时折叠形成两种热力学稳定的高级结构,胰岛素却只折叠形成一种热力学稳定的高级结构.为研究二者的不同折叠行为,该实验成功构建了3个模型肽:(desB1F)[B10E]PIP、[B5T,B10E]PIP和(desB1F)[B5T,B10E]PIP;发酵表达各模型肽,质谱鉴定证明表达正确.通过对比3个模型肽的表达量,推测它们折叠形成两种结构的倾向性依次为:(desB1F)[B5T,B10E]PIP>[B5T,B10E]PIP>(desB1F)[B10E]PIP.     

Banach代数中的行列式理论

探讨了 Banach 代数中的行列式理论.给出了具有单位元的迹 Banach 代数具有行列式的充要条件.     

非织造布滤料性能及过滤过程的研究进展

对近年来非织造布滤料的研究进展做了简要综述,介绍了内部结构的研究及表征、过滤性能及其影响因素、过滤过程的计算机模拟,指出进一步发展所需要解决的问题。     

Towards Excellence in Science Chinese Academy of Sciences

<正>May 26,2014,BeijingScience is a human enterprise in the pursuit of knowledge.The scientific revolution that occurred in the 17th Century initiated the advances of modern science.The scientific knowledge system created by human beings,the tremendous productivity brought about by science,and the spirit,methodologies and norms formulated in scientific practice since the 17~(th)Century have long become essential elements of     

SCIENCE CHINA Technological Sciences SUBJECT INDEX TO VOLUME 57(2014)

<正>~~     

单面约束系统的微分变分原理与运动方程

研究单面约束力学系统的微分变分原理和运动方程。方法利用Ｄ＇Ａｌｅｍｂｅｒｔ原理建立Ｄ＇Ａｌｅｍｂｅｒｔ－Ｌａｇｒａｎｇｅ原理．Ｊｏｕｒｄａｉｎ原理和Ｇａｕｓｓ原理,结果与结论得到系统的微分变分原理和带乘子的Ｅｕｌｅｒ－Ｌａｇｒａｎｇｅ形式,Ｎｉｅｌｓｅｎ形式和Ａｐｐｅｌｌ形式的运动方程。     

q-树的重构性

q 是一个正整数,所谓 q-树的图是递归定义的:最小的 q-树是完全图 K_q,一个 n+1阶的 q-树是通过在 n 阶 q-树上加上一个新点并连接这点与 n 阶 q-树中任意 q 个互相邻接的点而获得,其中 n≥q.1-树我们通常称为树.在本文中,证明了对任意正整数 q,q-树是可重构的.     

β-环糊精-毛细管区带电泳分离扑尔敏对映体

采用毛细管区带电泳模式,以β-环糊精为手性选择剂分离了药物扑尔敏的光学对映体.考察了在不同背景电解质 pH 值尤其是较低 pH 值下环糊精浓度对对映体表观淌度差的影响,并研究了有机改性剂尿素在分离中的作用.     

层状球形夹杂复合材料的弹性模量

利用层状球形夹杂在无限大基体中的局部化关系及平均应力场理论,给出了一种方法来分析含 n 种层状球形夹杂所构成复合材料的弹性模量.对于文献给出的空心玻璃球和高分子基构成的复合材料,该理论的预测与实验吻合很好.当表层稍失时,该理论退化为传统的 Mori-Tanaka平均应力场理论.     

高师物理专业人才培养与基础教育衔接问题的研究

分析了当前高师物理专业人才培养与基础教育人才需求存在的问题,结合调查情况,提出了高师物理专业在培养目标、课程设置、教学内容、教学方法及实践教学环节方面的改革措施。     

JOURNAL OF BEIJING INSTITUTE OF TECHNOLOGY TOTAL CONTENTS(Vol.23)

正~~