豆酱中产细菌素屎肠球菌的筛选及特性分析

从农家传统发酵豆酱中分离出164株疑似乳酸菌,其中有84株球菌。试验筛选到1株产细菌素的屎肠球菌R1并对其理化性质进行研究。该细菌素对金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌等具有较好的抑制作用,对酸和热稳定。经鉴定该细菌素种类为肠球菌素P。菌株R1在p H3.0模拟胃液中3 h存活率达86.35%,在模拟肠液中6 h存活率达87.72%,对人工消化液耐受性良好。药敏试验结果表明,菌株R1对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、氯霉素和庆大霉素敏感,对诺氟沙星和红霉素不敏感,未检测出毒力因子,具有潜在安全性。     

屎肠球菌HY07产细菌素发酵条件的优化

对屎肠球菌HY07产细菌素的培养基组成和发酵条件进行了研究.通过单因素水平试验和正交试验,确定产细菌素的最佳培养条件为37℃培养24h,培养基初始pH为6.最佳培养基组成为:葡萄糖1％,鱼粉蛋白胨1.5％,牛肉膏1.5％,磷酸氢二钾0.2％,柠檬酸二铵0.2％,乙酸钠0.5％、硫酸锰0.025％,吐温-800.4％.在此条件下培养屎肠球菌HY07,所产细菌素抑菌圈可达12.60mm.     

产细菌素屎肠球菌TRS5特性分析及其编码基因的扩增

屎肠球菌TRS5在37℃、p H 6.5的MRS培养基中经过24 h的培养后,其细菌素生成量达到最大。培养基中添加胰蛋白胨或葡萄糖有利于促进TRS5细菌素的生成,而添加麦芽糖、乳糖或甘露糖(20 g/L)后细菌素活性减少50%。外源添加5 g/L的甘油和吐温-80会抑制TRS5细菌素的产生,而添加K_2HPO_4或VB_1、VB_2、VB_6、VC则对细菌素的生成没有影响。药敏实验证实屎肠球菌TRS5对红霉素、氯霉素、万古霉素、替考拉宁、四环素、青霉素敏感。聚合酶链式反应及测序结果证实屎肠球菌TRS5含有肠球菌素enterocin P和类L50的结构基因。     

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定

从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。     

屎肠球菌发酵特性及其功能性研究

探讨了分离自新疆酸奶疙瘩的一株屎肠球菌在乳制品应用中具有的潜在益生价值。通过测定滴定酸度、丁二酮、乙醛、游离氨基酸等指标,研究了屎肠球菌在脱脂乳中的发酵特性以及发酵乳上清液具有的抗氧化与抑菌功能。结果表明,屎肠球菌产酸、产香和降解酪蛋白能力强,37℃发酵24h,滴定酸度为123.55°T,丁二酮含量为12.31μg/mL,乙醛含量高达90.12μg/mL,游离氨基酸含量为331.92μg/mL,活菌数最高可达1.10×1010cfu/mL。发酵乳上清液对常见病原微生物有抑制作用,且抑菌物质具有热稳定性、较宽的pH范围、对蛋白酶敏感的特点,对羟自由基清除率为96.84%,超氧阴离子自由基清除率为31.33%,具有抗氧化能力。     

产细菌素屎肠球菌E6的特性分析及发酵条件优化

研究了屎肠球菌E6抑菌活性的生物学特性,并通过响应面法优化其发酵条件.结果表明,屎肠球菌E6产蛋白质类细菌素,能够抑制单增李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌生长,在pH3.0～7.0条件下有明显抑菌活性,60～121℃热处理20min后仍具有抑菌活性.通过Box-Behnken实验设计优化屎肠球菌E6发酵条件为培养时间36.0h,培养温度31.0℃,培养基pH5.1.在此条件下,发酵上清液抑菌圈直径可达20.17mm,较优化前提高了27.2％.     

产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用琼脂平板扩散实验,从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌(Listeria monocytogene54002)具有明显抑制作用的乳酸菌,排除酸和过氧化氢的干扰后,仍具有抑菌活性,而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质,即细菌素。三株菌所产细菌素具有一定热稳定性,在pH5~10之间仍具有一定的抑菌活性。通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列,将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比,并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上,这与生理生化实验初步鉴定结果一致。      

产细菌素屎肠球菌E6的特性分析及发酵条件优化

研究了屎肠球菌E6抑菌活性的生物学特性,并通过响应面法优化其发酵条件。结果表明,屎肠球菌E6产蛋白质类细菌素,能够抑制单增李斯特氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌生长,在pH3.0～7.0条件下有明显抑菌活性,60～121℃热处理20min后仍具有抑菌活性。通过Box-Behnken实验设计优化屎肠球菌E6发酵条件为培养时间36.0h,培养温度31.0℃,培养基pH5.1。在此条件下,发酵上清液抑菌圈直径可达20.17mm,较优化前提高了27.2%。      

应用Plackett-Burman设计法对屎肠球菌BC-3产类细菌素发酵主要影响因素的筛选

通过单因素实验选出屎肠球菌（Enterococcus faecium）BC-3产类细菌素发酵培养基最佳碳源为蔗糖,氮源为牛肉膏+蛋白胨+酵母膏,刺激因子为吐温80;采用Plackett-Burman设计法对选取的10个相关影响因素进行了评价,筛选出了3个主要影响因素分别为牛肉膏、蛋白胨、柠檬酸二铵,且3个因素在PB设计的水平范围内,对响应值的影响均为正效应。      

应用Plackett-Burman设计法对屎肠球菌BC-3产类细菌素发酵主要影响因素的筛选

通过单因素实验选出屎肠球菌(Enterococcus faecium)BC-3产类细菌素发酵培养基最佳碳源为蔗糖,氮源为牛肉膏+蛋白胨+酵母膏,刺激因子为吐温80;采用Plackett-Burman设计法对选取的10个相关影响因素进行了评价,筛选出了3个主要影响因素分别为牛肉膏、蛋白胨、柠檬酸二铵,且3个因素在PB设计的水平范围内,对响应值的影响均为正效应.     

饲用屎肠球菌的筛选、鉴定及其生物学特性

分别采用肠球菌选择性培养基(EC)从健康婴儿的粪便、健康仔猪的肠道及粪便中分离筛选了4株屎肠球菌,分别命名为E fB、E f1-2、E f3-4、E f4-1,利用B iolog自动微生物分析系统鉴定结果表明,它们都是屎肠球菌,而且经16S rRNA基因序列测序比较分析,表明这4株菌与数据库中已发表的屎肠球菌16S rRNA序列(AccessionNo.AY675247)同源性均为99%,两者鉴定结果一致。试验表明,所筛得菌株生长速度较快,且对致病型大肠杆菌K88,K99,金黄色葡萄球菌,巴氏杆菌及沙门氏菌都有较强的抑制作用,其中对大肠杆菌K99的抑菌效果最好。屎肠球菌新菌种的鉴定与筛选为开发新型微生态类饲料添加剂提供了帮助。     

产细菌素苏云金芽孢杆菌的鉴定及其所产抗菌物质性质

从腌制蔬菜表面分离到一株产细菌素的菌株K2,其中和后的无细胞发酵液主要抑制革兰氏阳性细菌,特别是对芽孢杆菌有强烈的抑制作用。发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后,仍然有很强的抗菌活性,并对多种蛋白酶敏感,表明抗菌活性物质为蛋白类物质。通过形态培养特征、生理生化特征、16S rDNA 序列比对及系统发育分析,鉴定菌株K2 是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。菌株K2 产生的抗菌物质在pH6～9 条件下80℃处理30min 仍保持稳定的抗菌活性,其对敏感菌的作用主要是杀菌,而且对芽孢萌发有很好的抑制作用。该抗菌物质在菌体生长对数中期产生,在稳定期中期抗菌活性达到最大。     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。     

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)产生物胺交互作用研究

粪肠球菌和屎肠球菌是发酵香肠中常检出的2种主要的产酪胺和苯乙胺微生物。将粪肠球菌和屎肠球菌按照不同比例进行混合接种培养,发现在48h连续培养过程中,当粪肠球菌和屎肠球菌以1∶9比例混和接种培养时,体系pH值、细菌数量和酪胺生成量均显著低于其他各处理组;粪肠球菌有很强的产苯乙胺能力而屎肠球菌产苯乙胺能力较弱,当两者混合接种培养时,各混合体系的产苯乙胺水平相当,屎肠球菌产苯乙胺能力不受影响,而粪肠球菌产苯乙胺能力显著降低。     

Enterococcus faecium AS8及其胞外多糖对发酵乳流变学特性的影响

通过红外光谱、气相色谱-质谱联用和流变仪的检测,探究产自屎肠球菌（Enterococcus faecium）AS8的胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）（AS8-EPS）的结构组成和流变性能。采用3 种发酵乳作为样品,分别为Streptococcus thermophilus＋Lactobacillus bulgaricus、EPS＋S. thermophilus＋L. bulgaricus和E. faecium AS8。结果表明,在贮藏期间,不同发酵乳样品具有不同的流变学性质。同时,补充添加EPS和原位EPS对发酵乳流变性能具有不同的影响。通过Sephadex G-100和Sephadex G-50的分离纯化,获得2 种多糖,分别为AS8-1-EPS和AS8-2-EPS。AS8-1-EPS主要单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖（分别占59.1%、26.8%、7.9%）,还有含量很少的其他单糖;AS8-2-EPS主要单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和鼠李糖（分别占65.4%、21.3%、8.9%、4.4%）。红外光谱检测结果表明AS8-1-EPS和AS8-2-EPS均为杂多糖。     

屎肠球菌冷冻干燥保护剂筛选及稳定性比较研究

屎肠球菌在微生态产品中的应用效果受产品活菌量、贮存稳定性影响明显,为寻找适于屎肠球菌规模化生产的冻干保护剂,本研究通过正交试验设计,及屎肠球菌冷冻干燥保护剂4℃、37℃贮存稳定性比较,优化适合屎肠球菌的冻干保护剂配方为:脱脂乳5g/100mL、蔗糖1g/100mL、麦芽糊精5g/100mL。采用此保护剂配方制备的屎肠球菌冻干样品,在铝箔袋密封包装、温度37℃、相对湿度75%条件下存放4周,菌存活率为97.90%。     

产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌PCR检测方法的建立

目的：建立快速简便地检测产酪胺粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)的PCR方法。方法：将粪肠球菌和屎肠球菌的酪氨酸脱羧酶基因与GenBank数据库中已公布的细菌的酪氨酸脱羧酶基因进行比对,根据它们的非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,建立检测产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的PCR方法。结果：根据非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,用27株细菌对这两对引物分别进行反复验证,结果显示,所设计的两对引物都只对其目的菌株产生特异性扩增,对其他菌株没有扩增,方法的检测限可达到1.0×102CFU/mL。结论：本方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性,可用作食品中产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的检测。     

豆汁源屎肠球菌DZ的发酵特性及其安全性评估

本文以豆汁源屎肠球菌DZ为研究对象,从生长曲线、产酸能力、产粘能力及模拟人体胃肠道耐受性等方面探究其特性;通过吲哚实验,溶血实验,硝酸还原酶检测等实验探究其安全性,并进一步探究其发酵产品的安全性。结果表明,屎肠球菌DZ在1h-4 h时菌落生长较快;在p H 3.0的人工胃液中可存活,之后进入肠道可增殖;豆汁接菌发酵16 h时,酸度值达43.69°T,接菌发酵的豆汁酸度值差异极显著(p0.01);发酵时间为16 h时,粘度值达5.50 mPa·s且差异极显著(p0.01);在安全性探究实验中,硝酸还原酶检测及吲哚实验均为阴性,溶血性实验表明屎肠球菌DZ为γ-溶血;其发酵产品均未检出黄曲霉毒素、呕吐毒素等有害物质。结论说明,屎肠球菌DZ具备在极低p H值情况下存活的能力,产酸能力良好,且具备一定的产粘能力;该菌不分解色氨酸,不溶血,其代谢产物中不含硝酸还原酶,具有一定安全性。