槲皮素促进电离辐射引起的衰老细胞发生凋亡

研究槲皮素对10 Gy的X射线及碳离子束辐照后衰老的人眼基底脉络膜黑色素瘤细胞系92-1凋亡发生及相关蛋白表达水平的影响。采用流式细胞术及衰老相关半乳糖苷酶检测试剂盒检测92-1细胞经10 Gy的X射线及碳离子束辐照后细胞凋亡及衰老情况。通过Cell counting kit-8(CCK8)法检测槲皮素对92-1细胞增殖活力的影响并结合细胞凋亡检测筛选槲皮素作用浓度。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同处理后92-1细胞的凋亡比例。采用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的表达水平。结果表明,92-1细胞经10 Gy的X射线或碳离子束辐照后3 d,细胞出现明显的衰老表型,凋亡发生率较低。CCK8法结合细胞凋亡筛选出50μmol/L作为后续处理浓度。辐照后立即或3 d后给予槲皮素处理能诱导细胞发生明显的凋亡,且Cleaved caspase-3表达水平显著上调。因此,槲皮素可促使辐照(10 Gy)后衰老的92-1细胞发生凋亡。     

电离辐射对HelaS3细胞凋亡与细胞周期的影响

研究了电离辐射对HelaS3细胞凋亡和细胞周期的影响,进一步探讨细胞凋亡与细胞周期的关系,为肿瘤放化疗方案的制定提供基础资料。采用PI、Hoechst33342双梁和PI单梁,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明,给予0.5-4.0Gy X射线照射后8h细胞凋亡开始增加,12h达最大值,12－24h有下降趋势,但24h开始又逐渐增加,到72h时又接近12h水平。S期和G2／M期细胞均明显增加,并呈剂理依赖性,Go/G1期细胞则呈剂量依赖性减少,且这种变化在受照射后24h最明显。说明一定剂量电离辐射可以诱导明显的G2/M阻滞和S期阻滞,并可诱导HelaS3细胞凋亡的产生,两者之间有一定的关系。     

电离辐射诱发HL-60细胞凋亡及Bcl-2基因对细胞凋亡的影响

本实验采用＾６０Ｃｏγ射线（剂量分别为０、２、４、６、８、１０Ｇｙ）照射人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞,研究了辐射诱发的细胞凋亡,并对ＨＬ－６０细胞和转染的反义Ｂｃｌ－２基因的ＨＬ－６０细胞（ＨＬ－６０ａｓＢｃｌ－２）的凋亡情况进行了比较。结果表明,＾６０Ｃｏγ射线照射可抑制两种细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡,细胞凋亡率与受照剂量呈正相关,随照后时间的延长细胞凋亡率也逐渐增加;比较照后不同时间的凋亡率     

电离辐射对小鼠派伊氏板细胞凋亡的影响

采用原位末端标记(TUNEL)法研究不同剂量X射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡的时间效应及剂量效应关系.结果表明:2Gy全身照射后派伊氏板TUNEL阳性细胞数增加;0.05Gy、0.075Gy全身照射后派伊氏板TUNEL阳性细胞数减少.提示2Gy全身照射促进细胞凋亡,而低剂量电离辐射抑制细胞凋亡.     

电离辐射诱导HeLaS_3细胞凋亡时程变化的影响

采用PI和Hoechst33342双染、流式细胞术 (FCM)和图像分析术 (ICM)检测了不同剂量电离辐射对HeLaS3 细胞凋亡的影响。结果表明 ,HeLaS3 细胞在分别受到 0 .5 - 4 .0GyX射线照射后 8h ,其细胞凋亡呈增高趋势 ,但无统计学意义。照射后 12h ,细胞凋亡显著增加 (p <0 .0 1) ,并达峰值。随后 ,细胞凋亡率迅速下降 ,4 8h ,又有所回升。且流式细胞术与图像分析术所得结果数据相近 ,趋势一致。     

电离辐射诱导HeLaS3细胞凋亡时程变化的影响

采用PI和Hoechst33342双染、流式细胞术(FCM)和图像分析术(ICM)检测了不同剂量电离辐射对HeLaS3细胞凋亡的影响.结果表明,HeLaS3细胞在分别受到0.5-4.0GyX射线照射后8h,其细胞凋亡呈增高趋势,但无统计学意义.照射后12h,细胞凋亡显著增加(p<0.01),并达峰值.随后,细胞凋亡率迅速下降,48h,又有所回升.且流式细胞术与图像分析术所得结果数据相近,趋势一致.     

电离辐射对小鼠派伊氏板细菌凋亡的影响

采用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法研究不同剂理Ｘ射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡的时间效应及剂量效应关系。结果表明：２Ｇｙ全身照射后派伊氏板ＴＵＮＥＬ阳性细胞数增加;０．０５Ｇｙ、０．０７５Ｇｙ全身照射后派伊氏板ＴＵＮＥＬ阳性细胞数减少。提示２Ｇｙ全身照射促进细胞凋亡,而低剂量电离辐射抑制细胞凋亡。     

Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

应用密度梯度离心法分离小鼠睾丸组织不同类型生精细胞，流式细胞术检测其细胞凋亡，免疫组织化学方法观察生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。结果表明，0．025～0．2GyX射线全身照射后，小鼠睾丸组织生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性。在较低剂量(0．025和0．05y)时，以精原细胞凋亡为主，随剂量增加(0．075—0．2Gy)逐渐累及精母细胞，并且前者凋亡率明显高于后者，很少累及精子细胞和精子。Bax蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞，前者阳性率高于后者，并且随照射剂量增加，阳性率逐渐升高，而精子细胞和精子阳性率较低；Bcl-2蛋白表达主要见于精子细胞和精子，而精原细胞和精母细胞阳性率较低。提示，Bcl-2和Bax基因表达的相互调节是低剂量电离辐射选择性诱导生精细胞凋亡的重要原因之一，这也为深入探讨低剂量电离辐射诱导生精细胞适应性反应的凋亡机制，提供了更深层次实验证据。     

氚水诱发中国仓鼠肺细胞恶性转化研究

本实验使用低浓度氚水(9.25×10~(?)-3.7×10~6Bq/mL)诱发中国仓鼠肺(CHL-1)细胞恶性转化,实验中作了不同时间的照射(24、48、72、96h),累积吸收剂量为0.055—0.88Gy。实验结果表明,氚水在此剂量范围引起该细胞的恶性转化率为3.28%—13.0%。实验中平行使用~(137)Csγ射线照射诱发该细胞恶性转化,剂量率为0.359Gy/d,照射时间与氚水组相同,累积吸收剂量为0.359—1.44Gy。γ射线在此剂量范围引起该细胞的恶性转化率为2.59%—13.4%。上述结果说明,两者的转化率与剂量相关。根据上述两种射线诱发 CHL-1细胞恶性转化率,求出氚水相对于γ射线的相对生物效应(RBE)为1.6。实验中同时作了形态学观察和细胞移植于动物的实验,实验结果都证明了转化了的细胞具有恶性细胞的形态和行为。     

自吞噬促进电离辐射之后细胞的存活

为探讨p53调控的自吞噬在电离辐射诱导的DNA损伤中的作用,采用慢病毒法构建p53敲低及对照细胞系,用血清饥饿诱导自吞噬,3-MA抑制自吞噬,再用γ射线照射细胞。结果发现,p53抑制自吞噬效应蛋白p62/SQSTM1的转录激活,且激活自吞噬可以促进电离辐射之后细胞的存活,说明自吞噬在电离辐射之后的细胞命运决定中起着关键作用。进一步的研究发现,抑制自吞噬可以抑制电离辐射诱导的细胞周期阻滞,从而揭示了DNA损伤诱导G2/M周期阻滞及自吞噬诱导细胞存活之间的联系,为研究基于自吞噬通路的新型辐射增敏及抗辐射药物提供了新思路。     

Kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的相关性研究

为探讨kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的关系,先采用X射线照射BALB/c小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,取胸腺淋巴瘤和正常胸腺,分别提取总RNA、合成cDNA和提取总蛋白,采用实时定量PCR(Quantitative realtime PCR,QRT-PCR)和Western blot法对kras基因mRNA和蛋白表达分别进行检测。结果表明,胸腺淋巴瘤kras基因mRNA表达水平(2.66±1.51)比正常胸腺组织(0.93±0.30)明显增高,两组比较有统计学意义(p0.05),胸腺淋巴瘤kras基因蛋白表达水平也高于正常胸腺组织。结果提示,kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤密切相关,可能是辐射致癌的一种易感基因。     

4GyX射线照射对EL-4细胞cyclin B1及cdc2 mRNA水平的影响

采用流式细胞术和半定量 RT-PCR 的方法分别检测 4Gy X 射线照射后 EL-4 细胞不同细胞周期时相和EL-4 细胞内 cyclin B1 及 cdc2 mRNA 水平的时程变化,以探讨 X 射线照射诱导 EL-4 细胞 G2 期阻滞的分子调控机制。 结果表明,4Gy X 射线照射 EL-4 细胞后 2h,G2期细胞开始明显增多,4—8h 达峰值(p<0.001)。EL-4 细胞内 cyclin B1 mRNA 水平于照射后 1h 开始下降,24h 降至最低值,为假照组的 57.7 %,72h 恢复至正常水平。EL-4 细胞中 cdc2 mRNA 水平于照射后 12h 开始降低,24—48h 降至最低水平,分别为假照组的59.2% 和 58.9%,72h 恢复至假照组水平。结果提示, 4Gy X 射线照射可诱导 EL-4 细胞 cyclin B1 及 cdc2 mRNA水平明显下降,直接导致 MPF 活性减少是引发 G2 期阻滞的关键。     

极低频磁场联合或不联合X射线对CHO细胞动粒阳性和阴性微核生成的影响

Extremely low frequency magnetic field (ELFMF) produced by power lines and household electric appliances has been associated with increased incidence of cancers, as was suggested by several epidemiological studies. To test the genotoxic effects of ELFMF, the induction of micronuclei by exposure to ELFMF and/or X-rays was investigated by cytokinesis-block method in cultured Chinese Hamster Ovary (CHO) cells.     

Studies on apoptosis in bone tumor cells induced by 153Sm

The apoptosis in human bone tumor cells induced by internal irradiation with ^153Sm was studied. The morphological changes in bone tumor cells were observed by electronic and fluorescent microscopy, as well as DNA agarose gel eletrophoresis. DNA chain fragmentation, microautoradiographic tracing and the inhibition rate of proliferation in bone tumor cells exposed to ^153Srn with different duration time were examined. It was demonstrated that the bone tumor cells exposed to ^153Sm displayed nuclear fragmentation, pyknosis, margination of condensed chromatin, and formation of membrane bounded apoptotic bodies, whereas the percentage of DNA chain fragmentation of bone tumor cells increases in direct proportion to the duration of irradiation with ^153Sm, as well as DNA ladder formation in apoptotic cells. Also a marked inhibition effect of proliferation in bone tumor cells after exposure with ^153Sm was observed.     

电离辐射诱导BALB/c小鼠骨髓细胞基因表达谱的研究

利用基因芯片技术研究了辐射后小鼠骨髓细胞基因表达谱的变化。结果发现在芯片上8079个基因中，有660个基因的表达有明显差异，其中354个基因的表达量增高，306个基因的表达量下降。在差异基因中功能或部分功能已知基因有222个，对其中差异2．5倍以上基因进行分析，发现表达差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、信号转导、免疫与应激、核酸合成、转运蛋白与通道蛋白等多个方面，其中以信号转导和免疫应激相关基因所占比例较多，反映出辐射对细胞损伤的多靶点、多层次及多通路的特点，深入研究这些辐射相关基因在造血辐射损伤中的作用，可为放射病治疗、肿瘤放疗提供新的靶点和方法。     

白介素-6对受全身分次照射荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

以受分次全身照射的三种荷瘤小鼠为研究对象,探讨白介素-6(IL-6)对不同肿瘤细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因p53、bcl-2表达的影响。本实验采用流式细胞术检测IL-6对S180肉瘤、H22肝癌、Lewis肺癌三种荷瘤小鼠经6MVX线分次全身照射后肿瘤细胞凋亡及增殖指数的影响,以免疫组织抗生蛋白链霉素?过氧化物酶?生物素(SP)法检测以上三种荷瘤小鼠肿瘤组织中p53、bcl-2的表达水平,及IL-6对经照射的三种荷瘤小鼠肿瘤组织p53、bcl-2表达水平的影响。结果表明:在接受全身分次照射的三种荷瘤小鼠中,Lewis肺癌IL-6组SPF值及PI值均较对照组低,AI值较对照组高(P<0.05),S180肉瘤荷瘤鼠结果相反(P<0.01),而在H22肝癌两组肿瘤细胞凋亡及增殖指数未见明显差异(P>0.05)。其机理可能与IL-6改变了肿瘤细胞所处的周期时相的比例有关。IL-6对凋亡相关基因p53、bcl-2的表达在不同肿瘤组织中具有不同影响,Lewis肺癌荷瘤鼠IL-6组肿瘤细胞p53表达水平较对照组低,S180肉瘤荷瘤鼠IL-6组肿瘤细胞bcl-2、p53表达水平较对照组高,而H22肝癌荷瘤鼠两组肿瘤细胞bcl-2、p53表达水平无明显差异。其作用可能与IL-6对不同肿瘤组织中凋亡相关基因p53、bcl-2的表达产生不同影响有关。     

3Gy γ射线对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响

本实验旨在研究电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响，为肿瘤的放射治疗提供科学依据。以3Gyγ射线照射指数生长期的肿瘤细胞，用流式细胞术测定细胞DNA含量并确定细胞周期各时相的细胞百分比。实验结果显示，γ射线照射后，SMMC-7721，hepG2和HO-8910细胞的G2／M期发生明显阻滞，且都在辐射后12h累积达到最大值，但S期只发生短暂的延迟，即辐射后6h明显累积，之后下降至接近对照水平或低于对照；Hela细胞的G2／M期和S期均发生显著阻滞。实验结果说明，电离辐射后，不同肿瘤细胞的G2／M期和S期检查点的激活和维持是有差异的。     

Fluorescence microscopic morphology and inhibition rate studies on apoptosis of osteosarcoma cells induced by 153Sm

The apoptosis of osteosarcoma cells treated with irradiation by ^153Sm－EDTMPwas studied,The morphological changes in osteosarcoma cells were observed by fluorescence microscopy,It was found that osteosarcoma cells exposed with ^153Sm－EDTMP displayed significant nuclear fragmentation and marked pyknosis ,With the prolongation of observing period,the membrane bound apoptotic bodies formation was observed,It should be noted,that with the lenghening of irradiation time by ^153Sm－EDTMP,the inhibiton rate of proliferation of osteosarcoma cells increased progressively.     

线粒体DNA减少在氡及其子体致人支气管上皮细胞凋亡中的作用

使用溴化乙锭(Ethidium bromide,EtBr)诱导方法构建线粒体数目减少支气管上皮细胞(Human bronchia epithelia with mitochondrial DNA knock-down,ρ?HBE)模型并进行长期氡照射,用克隆形成法测定氡照射后HBE细胞的增殖能力,用流式细胞仪进行细胞凋亡和线粒体膜电位的检测。结果发现,氡照射后,与线粒体DNA数量正常的HBE细胞(ρ+HBE)相比较,ρ?HBE细胞存活分数明显增高,虽然早期凋亡率明显低于正常细胞,但是总凋亡率增加,同时线粒体膜电位也显著降低。结果提示,氡照射后引起的线粒体减少HBE细胞增殖能力提高与总凋亡率的减少有关,并且与线粒体膜电位的变化相关。