二重LAMP检测鸡蛋污染致病菌

为快速检测污染鸡蛋的致病菌,实验从鸡蛋蛋体表面得到2株菌X1、X2,结合16S r RNA克隆及质粒测序分子方法对2株菌分类分析,发现2株菌X1和X2分别为:蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus NC7401(AP007209)、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus(AP003088)。针对两种菌的nhe、nuc基因具有较强的保守性,设计2套环介导等温扩增(LAMP)引物。先进行反应体系优化,得到25μL LAMP反应体系最适温度为60℃、最适Mg SO4添加量为1.5μL,引物最适量为2.0μL。再进行二重LAMP鉴定2株污染鸡蛋的致病菌,发现目的菌X1和X2的特异性扩增结果为阳性,其他9株非目的菌扩增结果为阴性,其灵敏度检测限达10 fg/μL。此二重LAMP检测法有快速、特异、灵敏的特点,可快速检测食源性致病菌。      

改良LAMP快速检测酸土脂环酸芽胞杆菌的 研究

建立改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测酸土脂环酸芽胞杆菌的方法。以酸土脂环酸芽胞杆菌的16S r RNA基因保守区域设计4条特异性引物,优化反应体系,通过荧光曲线、琼脂糖凝胶电泳和白色沉淀判定扩增结果。同时,对LAMP引物特异性、灵敏度、检出限进行研究。LAMP法在61℃,60 min内完成酸土脂环酸芽胞杆菌的检测。2株酸土脂环酸芽胞杆菌呈阳性结果,17株非酸土脂环酸芽胞杆菌呈阴性结果,表明该种检测方法具有高特异性。检测纯菌灵敏度为7.2 CFU/m L,对人工污染苹果汁样品中酸土脂环酸芽胞杆菌的检出限是18 CFU/m L。LAMP法检测酸土脂环酸芽胞杆有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点,应用前景广阔。     

环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是继PCR技术之后又一新型核酸扩增技术,恒温(60~65℃)条件下可在1h内将目的基因扩增到109,具有效率高、特异性强、操作简单等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的快速检测。对LAMP的原理、特点、应用及展望进行综述,为后续研究提供理论依据。     

环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种新型核酸扩增技术, 该技术在60?65 ℃恒温条件1 h内, 把特异性靶序列扩增到109水平, 具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点, 已广泛应用于流行性细菌、病毒的定性定量检测等领域。本研究对LAMP的原理、特性及其应用做一综述, 从而为其在食源性致病菌检测应用中提供理论依据。     

等温扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

分子检测技术是致病菌检测的一种重要手段,具有精准度高、检测速度快的特点。近年来,随着分子生物学技术的不断发展,越来越多的等温扩增技术应运而生。目前常用于食源性致病菌检测的等温扩增技术包括环介导扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、依赖核酸序列的扩增技术(Nuclear acid sequence-based amplification,NASBA)、链置换扩增技术(strand displacement amplification,SDA)、缺口依赖酶链置换扩增技术(nickase-dependent amplification NDA)、网状分支扩增技术(ramification amplification method,RAM)、依赖解旋酶扩增技术(Helicase-dependent isothermal amplification,HDA)以及重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)等。本文将对上述几种等温扩增技术的原理、应用现状、优劣势等进行综述。     

等温扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

食源性致病菌污染是影响食品质量安全的重要因素之一,加强食源性致病菌的检测力度对于保证食品安全以及预防食源性疾病至关重要.基于核酸的分子检测技术较传统的培养方法相比,更加快速、灵敏、高效.等温扩增技术以反应条件简单等优点逐渐替代变温扩增技术.该文简述了环介导等温扩增、链替代等温扩增、单引物等温扩增、滚环等温扩增以及跨越式...     

滚环等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食源性致病菌是影响人类食品安全的重要因素。人类食源性致病菌致病率的逐年上升,引起世界广泛关注。滚环等温扩增(rolling circle amplification, RCA)技术因具有高特异性、高灵敏度、稳定、操作简单等优点,在食源性致病菌检测中具有广泛的应用前景。近年来以滚环等温扩增技术为基础,针对食源性致病菌的检测新技术不断得到发展。本文概述了滚环等温扩增技术的基本原理、技术特点、在食品微生物快速检测方面的应用、存在的不足和解决措施,指明研究发展新方向,旨在为食源性致病菌在快速、高通量检测需求上增加新方法,对食品安全监管具有重要意义。     

基于环介导等温扩增的离心式微流控芯片检测3种致病菌

采用微流控技术可以将食源性致病菌样品的制备、分离、检测等基本单元集成到仅有几平方厘米的芯片上,与分子检测技术相结合,能够满足对食源性致病菌快速现场检测的需要.基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计制作出一种用于食源性致病菌快速检测的离心式微...     

实时荧光等温扩增法检测4种常见食源性致病菌

目的建立实时荧光等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌4种常见食源性致病菌的分析方法。方法根据4种致病菌特异性基因合成LAMP引物,在反应前加入荧光染料,在63℃条件下反应45 min;反应结果可以根据扩增曲线变化直接判断。并通过在实际样品中添加标准菌株菌液,测定了其在增菌0、6、24 h的检测灵敏度。结果金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等基因组DNA的LAMP检测灵敏度为1 pg,副溶血性弧菌的检测灵敏度为10 pg;在样品加标实验中,其灵敏度在6 h分别可达到101、100、100、102 CFU/mL。结论该方法用于食源性致病菌的快速检测,具有可实时监控反应过程、反应快速,灵敏度和特异性高等优点,适合于基层食品安全监管领域现场快速检测。     

食源性致病菌核酸检测技术研究进展

近年来,食源性疾病的发病率逐年升高,已成为全球范围内的重大公共卫生问题。致病菌广泛存在于各种食品中,快速检测食源性致病菌,对提供安全的食物和预防食源性疾病具有重要的现实意义。由于传统食源性致病菌检测方法耗时耗力,因此建立食源性致病菌的快速检测技术尤为重要。食源性致病菌的核酸检测技术具有简便、耗时短、特异性强、灵敏度高等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的检测。着重介绍近年来用于食源性致病菌检测的核酸检测技术,包括常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、多重聚合酶链式反应(multiplex-PCR,mPCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qPCR)、环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA),并对其优缺点,以及适用范围进行总结,旨在为开发出简单、快速、有效、准确的检测方法提供一定的理论依据。     

LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中的研究进展

阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一类食源性致病菌,可引起新生儿脑膜炎、败血症等疾病.环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术是一类新型的恒温核酸扩增技术,具有灵敏度高、耗时短、特异性强、对设备需求低等特点,可与多种检测方法...     

等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

等温扩增技术是近年来发展迅速的一种新型核酸扩增技术, 其反应过程始终维持在恒定的温度下, 降低了对精密仪器和检测场地的要求, 并大幅度缩短了检测时间, 更能满足准确、快速、灵敏、便携的日常检测需求。目前, 食源性致病菌仍是影响食品安全的主要因素之一, 等温核酸扩增技术已成功应用于部分食源性致病菌的检测中, 具有广阔的应用前景, 有望成为食源性致病菌快速检测的新方法。本文综述了环介导核酸等温扩增、滚环扩增、跨越式滚环扩增、重组酶聚合酶扩增、等温多自配引发扩增、单引物等温扩增、依赖解旋酶的等温扩增、链置换扩增、交叉引物扩增9种等温核酸扩增技术的扩增原理和优缺点, 及其在食源性致病菌检测中的应用研究进展, 提出了样品前处理、引物设计、结果判读、检测灵敏度、检测通量方面存在的共性问题, 并给出相应解决措施, 以期为等温核酸扩增技术在食源性致病菌快速检测中的实际应用和相关标准的制定提供研究思路。     

环介导等温扩增技术在肠杆菌科致病菌检测中的研究进展

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是近年来新发展起来的一种恒温核酸扩增技术,该技术具有设备简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强以及扩增效率高等优点,已被广泛地应用于食源性致病菌的检测研究。本文重点阐述近年来国内外学者应用LAMP技术在肠杆菌科中常见致病菌的检测研究进展。     

花椰菜花叶病毒CaMV 35S启动子LAMP检测方法的建立

针对花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子的保守序列设计特异性引物,并进行条件优化,建立CaMV35S启动子的LAMP检测方法。该方法具有良好的特异性,检测灵敏度可达0.002%。对80份各类植物及其加工品进行检测,检测结果与实时荧光PCR法完全相符。CaMV35S启动子的LAMP检测方法,在检验检疫行业和食品加工业具有广阔的应用前景,对于加强转基因产品检测监管,促进进出口贸易具有重要意义。     

等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用进展

等温扩增技术是近年来迅速发展的一类核酸扩增技术。相比于PCR,该技术具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及低成本的特点。目前,核酸等温扩增技术在感染性疾病的诊断、基因多态性分析、疫情防治等方面已经有广泛应用,也有文献报道了其在细菌、病毒等病原体检测方面的应用。食源性致病菌和环境中的病原体检测等领域中,等温扩增技术展现了广阔的应用潜力,有望发展成为食源性致病菌检测的重要方法。本文综合国内外文献报道,对环介导等温扩增、依赖解旋酶等温扩增、依赖核酸序列等温扩增、切刻内切酶核酸恒温扩增、交叉引物等温扩增、链置换等温扩增、SmartAmp技术等一系列等温扩增技术的原理、特性及其在食源性致病菌检测中的应用情况做一综述,从而为该技术在食源性致病菌检测的实际应用中提供参考和依据。     

重组酶聚合酶等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食品安全是人类面对的重大问题,对食源性致病菌的检测也一直是各种研究关注的重点.基于聚合酶链式扩增(PCR)核酸检测方法虽然已克服传统微生物培养耗时长、准确度不高等缺点,成为目前应用最广的致病菌检测方法,但由于需要精确温度控制大大限制了其在现场检测中的应用.重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA),作为一种新兴等温扩增技术,在...     

环介导等温扩增技术检测不同乳制品常见食源性致病菌

目的 验证环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)试剂和仪器在不同乳制品常见食源性致病菌检测中的应用效果.方法 针对不同乳制品中常见食源性致病菌,运用LAMP建立便捷、快速、高效地检测方法,并以实验室储备菌株及人工污染乳制品样品评价LAMP检测引物试剂...     

LAMP在乳品厂耐热菌检测中的应用

好热黄无氧芽孢菌和凝结芽孢杆菌是乳品中常见的污染菌。为了检测该两种菌,以spo0A基因片段为靶基因,通过序列比对,设计出环介导等温扩增技术(LAMP)引物,对spo0A基因部分序列进行了扩增,并对反应温度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度及Mg2+浓度等扩增条件进行优化。结果表明:在温度63℃,甜菜碱浓度0.6 mol/L,dNTPs浓度1.0mmol/L、Mg2+浓度6.0mmol/L时,反应体系孵育30～60min,扩增效果最佳,检测灵敏度能够达到51CFU/mL。     

食源性致病菌快速检测方法研究进展

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,随着生物技术发展及人们对食品安全要求的提高,食源性致病菌的检测方法也不断更新和升级。微流控技术将样品预处理、分离、检测等过程集成在微小的芯片上完成多种功能,而液滴微流控作为其中一个重要的分支,可利用两液体互不相溶特性形成的分散微液滴进行高通量的测试。本文针对核酸扩增方式的不同,比较总结了液滴微流控-数字化聚合酶链式反应、液滴微流控-数字化环介导等温扩增、液滴微流控-数字化重组酶聚合酶扩增检测方法的特点,介绍了其在食源性致病菌检测中的应用,并对该技术的未来发展前景进行了展望。液滴微流控技术结合数字化核酸扩增,可实现对食源性致病菌的智能化、连续化、精准化和微型化的快速检测,本文为其在食源性致病菌快速检测领域的发展提供了参考资料。     

应用LAMP实时浊度法检测转基因大豆

DNA环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法是一种新型的核酸扩增检测方法,该方法操作简便、所需时间短、灵敏度高、特异性强.实时浊度法可以实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对LAMP整个反应过程的实时监控.本研究以抗草甘膦转基因大豆为研究对象...