新型中国被毛孢胞内多糖HSIPS2链构象及抗氧化活性研究

以发酵得到的中国被毛孢菌丝体为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱蛋白、脱色素以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephacryl S-100凝胶柱色谱得到均一性多糖组分（HSIPS2）,并对该组分进行链构象及抗氧化活性分析。结果表明:HSIPS2的单糖组成及摩尔比例为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖∶核糖=48.52∶6.58∶5.17∶1.0,其绝对分子量为1.46×10⁴ g/mol,纯度为99.82%;该多糖在0.1 mol/L的Na NO3溶液中呈柔顺链构象,流体力学半径R_h=2.3 nm,M_L=334.05 nm^-1,q=0.70 nm,d=0.69 nm;同时,HSIPS2清除羟自由基的IC₅₀为0.749 mg/m L,氧自由基吸收能力（ORAC值）为872.80μmol TE/g,说明HSIPS2具有较高的抗氧化能力。      

中国被毛孢研究现状及发展趋势

对中国被毛孢的生活史以及名称由来进行了描述,同时对中国被毛孢的生产工艺和市场规模进行了综述,指出了制约中国被毛孢规模化生产的主要因素是其较低的发酵得率.     

中国被毛孢发酵虫草菌丝体多糖的提取、纯化及其理化性质

利用中国被毛孢虫草菌液体深层发酵培养得到的菌丝体,通过正交试验优化得到了虫草多糖的提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间120 min,料液比1∶15,提取次数4次。粗多糖经Sevag法脱蛋白、透析袋透析、DEAE-cellulose离子交换和Sephadex G-100柱层析纯化后,得到3种多糖(命名为HSP-1、HSP-2和HSP-3)。经紫外扫描、Sephacryl S-300 HR柱层析检测确定HSP-1和HSP-2为均一组分,HSP-3为非均一组分。苯酚-硫酸法测得HSP-1和HSP-2的含糖量分别为89.42%和85.63%。Sephacryl S-300 HR柱层析测得HSP-1和HSP-2的相对分子质量分别为1.7×104Da和9.8×103Da。GC-MS测得HSP-1的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖=4.522∶1∶1.378,HSP-2的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖∶D-阿拉伯糖=2.687∶4.591∶1∶0.212。红外光谱测定结果显示HSP-1和HSP-2都含有α型糖苷键。     

中国被毛孢菌丝体核苷化合物的HPLC分析

用HPLC法测定中国被毛孢菌丝体中的5种核苷的含量。采用Hypersil GOLD AQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇:0.01 mol/L:KH2PO4=5∶95(体积比)为流动相,流速1 mL/min,检测波长260 nm。结果发现,液体发酵和静置培养的中国被毛孢菌丝体中胞苷含量分别为266.73μg/g和348.79μg/g,尿苷分别为1 718.23μg/g和1 558.99μg/g,肌苷分别为892.64μg/g和573.31μg/g,鸟苷分别为1 370.78μg/g和1 444.30μg/g,腺苷分别为1 296.68μg/g和1 440.83μg/g。5种核苷测定的精密度RSD值介于0.97%~3.75%间、稳定性RSD值范围为2.91%~3.86%、重现性RSD值范围为1.28%~2.91%、回收率范围为91.07%~102.21%。     

中国被毛孢降解黄曲霉毒素B1的特性研究

目的 分析中国被毛孢（Hirsutella sinensis）8#菌株降解黄曲霉毒素B1 (AFB1)的能力。方法 考察该菌株培养液、菌丝体悬液和上清液去除AFB1的能力;利用洗脱和萃取法区分生物降解和可逆吸附AFB1;研究不同初始AFB1浓度、温度、pH和金属离子对其降解能力的影响;对AFB1降解液进行高效液相色谱和薄层色谱分析。结果 H.sinensis培养液和菌体降解效果显著（P<0.05）,96 h后对初始浓度100 ng/mL的AFB1降解率分别是96.90%±4.39% 和 97.93%±2.92%。磷酸盐缓冲液洗脱液和甲醇萃取液均未检测到AFB1,证实了该菌生物降解AFB1。菌株AFB1降解效果与初始浓度密切相关。当反应温度25 ℃,pH 7.0时,培养液作用72 h后降解率为99.90%±0.18%。同时,反应液中加入Fe2+有利于降解,而Mg2+却起到了抑制作用。高效液相色谱和薄层层析对产物分析表明,该菌株可将AFB1降解为至少为1种产物。结论 中国被毛孢8#菌株对AFB1有良好的降解作用,可用于生物降解真菌毒素的潜力菌株。     

响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇

以兰坪虫草无性型(兰坪被毛孢)固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。     

响应面分析法优化超声提取兰坪被毛孢多糖和D-甘露醇

以兰坪虫草无性型（兰坪被毛孢）固体发酵产物为材料,以水为提取溶剂,在常温条件下利用响应面分析法优化虫草多糖和D-甘露醇的超声提取综合工艺。在超声常温水提的单因素实验的基础上,运用响应面法进一步考察液固比、超声时间、超声功率对虫草多糖和D-甘露醇综合提取率的影响,以优化提取工艺。实验得到较优综合提取工艺条件为:液固比43∶1m L/g,超声时间为50min,超声功率为56W。在该工艺条件下虫草多糖提取率为23.06%,D-甘露醇提取率为2.30%。      

中国被毛孢脂肪酸类成分分析、提取和鉴定

采用索氏提取法从中国被毛孢发酵菌丝体中提取粗脂肪,对粗脂肪甲酯化后,气相色谱-质谱分析脂肪酸组成。接着对脂肪酸类物质进行分离纯化,并最终确定其结构。中国被毛孢发酵菌丝体中粗脂肪的含量为5.66%。气相色谱-质谱法(GC-MS)确定其脂肪酸组分中主要包括油酸、亚油酸、棕榈酸,其中不饱和脂肪酸相对含量为90.17%。通过分离纯化得到EP-1和EP-2两种化合物,并通过现代波谱技术确定其结构,EP-1为十六烷酸即棕榈酸,EP-2为十八烯酸乙酯即油酸乙酯。     

阿魏菇子实体多糖的结构及其抗氧化活性研究

以从阿魏菇子实体中分离纯化得到的多糖-阿魏菇多糖（Pleurotus ferulae Lenzi polysaccharides,PFLPs）作为研究对象,对其化学结构、链构象以及抗氧化活性进行了研究。实验结果表明,PFLPs含有鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五种单糖,摩尔比为1∶1.26∶0.85∶12.40∶4.31,并且糖链内具有β-D-葡聚糖结构。链构象分析表明PFLPs是一种具有三股螺旋结构的多糖。体外抗氧化活性实验表明,PFLPs具有较高的DPPH自由基、ABTS⁺自由基和羟自由基清除活性,适度的超氧阴离子自由基清除活性,还原力活性的和Fe2+的螯合活性。结果表明,PFLPs是一种很有潜力的天然抗氧化剂。      

树舌胞内多糖抗氧化活性的研究

目的:探讨树舌胞内多糖（GAPS）体外抗氧化作用。方法:从清除超氧阴离子自由基、抑制羟基自由基的产生、清除DPPH自由基和还原力4个方面,研究了树舌胞内多糖的体外抗氧化效果。结果:树舌胞内多糖有较强的还原力,并在体外对超氧阴离子自由基（O₂^-·）、羟基自由基（·OH）、DPPH有机自由基有较强的清除作用。树舌胞内多糖浓度为1.0mg/mL时,其清除O₂^-·能力为36.36%;对于·OH,在浓度为2.5mg/mL时,清除率达到56.97%;对于DPPH·,在浓度为1.0mg/mL时,清除率达到45.31%;当树舌胞内多糖浓度为0.5mg/mL时的还原能力与0.03mg/mLV_C相当。结论:树舌胞内多糖具有抗氧化方面的应用开发前景。      

树舌胞内多糖抗氧化活性的研究

目的:探讨树舌胞内多糖(GAPS)体外抗氧化作用.方法:从清除超氧阴离子自由基、抑制羟基自由基的产生、清除DPPH自由基和还原力4个方面,研究了树舌胞内多糖的体外抗氧化效果.结果:树舌胞内多糖有较强的还原力,并在体外对超氧阴离子自由基(O-2·)、羟基自由基(·OH)、DPPH有机自由基有较强的清除作用.树舌胞内多糖浓度为1.0mg/mL时,其清除O-2·能力为36.36%;对于·OH,在浓度为2.5mg/mL时,清除率达到56.97%;对于DPPH·,在浓度为1.0mg/mL时,清除率达到45.31%;当树舌胞内多糖浓度为0.5mg/mL时的还原能力与0.03mg/mLVc,相当.结论:树舌胞内多糖具有抗氧化方面的应用开发前景.     

桑黄胞内多糖免疫及抗氧化活性研究

通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠动物模型,考察桑黄粗多糖(SH)、纯化多糖组分(P-47000、P-8700)对增强免疫及抗氧化水平的变化情况,明确不同纯度多糖组分生物活性间的差异。结果表明：SH、P-47000、P-8700对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠具有不同程度的免疫促进作用,其顺序为：P-8700＞SH＞P-47000;P-47000的还原能力低于SH和P-8700,SH和P-8700还原能力相差不大;P-47000几乎对超氧阴离子自由基(O2－ ·)没有清除效果,P-8700和SH的清除率比较低,且P-8700略大于SH;P-8700对羟自由基( ·OH)具有较好的清除效果,清除率达到53.421%,且P-8700的清除率高于SH和P-47000,P-47000清除率最低;不同纯度多糖对DPPH自由基的清除效果均较高,SH达到93.221%;P-8700清除效果最低,为66.435%。     

防风多糖ASPSO溶液粘度及构象研究

主要利用乌氏粘度计研究温度、pH、变性剂(脲)和金属离子(Na+、K+、Ca2+、Mg2+)对防风多糖ASPS0粘度的影响;采用圆二色谱、扫描电镜和刚果红实验等手段观察ASPS0在溶液中的形貌;研究了ASPS0在酸与碱中的粒度变化。研究表明不同浓度的金属离子的加入,对ASPS0溶液的粘度影响程度不同,其中K+、Ca2+及Mg2+对ASPS0溶液的粘度影响较大,而Na+对其影响程度很小;防风多糖ASPS0呈现无规卷曲状;不同pH条件粒度分布不同,pH为12时聚集体的有效直径最大,其次为pH为2以及pH为6.5。     

防风多糖ASPSO溶液粘度及构象研究

主要利用乌氏粘度计研究温度、pH、变性剂（脲）和金属离子（Na+、K+、Ca2+、Mg2+）对防风多糖ASPS0粘度的影响;采用圆二色谱、扫描电镜和刚果红实验等手段观察ASPS0在溶液中的形貌;研究了ASPS0在酸与碱中的粒度变化。研究表明不同浓度的金属离子的加入,对ASPS0溶液的粘度影响程度不同,其中K+、Ca2+及Mg2+对ASPS0溶液的粘度影响较大,而Na+对其影响程度很小;防风多糖ASPS0呈现无规卷曲状;不同pH条件粒度分布不同,pH为12时聚集体的有效直径最大,其次为pH为2以及pH为6.5。      

裂褶菌胞外多糖的粘度性质及其构象研究

采用高效凝胶渗透色谱(GPC)测定了裂褶菌胞外多糖(SPG)的分子量；借助乌氏粘度计和旋转粘度计研究了温度、pH、变性剂(脲)和金属离子(Na~+、K~+、Mg~(2+)、Ca~(2+))对裂褶多糖溶液粘度的影响；采用刚果红染色法分析了NaOH和盐的浓度对SPG构象的影响。研究表明，所分离的裂褶多糖的重均分子量(Mw)和数均分子量(Mn)分别为2.5×10~7u和1.2×10~7u，特性粘数为625.29mL／g。质量浓度为0.010％的SPG表现为牛顿流体，大于此浓度则表现为非牛顿流体。随着温度的升高(20～70℃)，其相对粘度逐渐降低。0.1～0.3mol／LHCl和0.1mol／LNaOH的加入使其粘度有所增加，随着酸和碱浓度的增加，SPG溶液粘度逐渐降低。但加入不同浓度的HCl，其粘度均大于对照值；而浓度大于0.5mol／L的NaOH则会使其粘度降低至对照值以下。不同浓度的金属离子的加入可使SPG溶液的粘度增加，但Mg~(2+)、Ca~(2+)比Na~+、K~+对SPG粘度的影响较大。0.1～0.7mol／L脲使其粘度有所增加。刚果红实验表明，NaOH可以使SPG的三螺旋结构解体，而不同浓度的Na~+、K~+都可以稳定其构象，其中K~+更为显著。     

一种被毛孢中天然色素的提取分离和结构鉴定

利用二氯甲烷和乙酸乙酯混合物(体积比1:1)提取出了一种被毛孢RCEF0851菌丝体中的色素,用高效液相色谱方法从提取物中分离纯化出一种橘黄色纯化合物Hh-2。该色素用显色反应、质谱、紫外和核磁共振谱等方法鉴定为醌茜素(skyrin)。虽然该化合物是一已知化合物,但是该物质在虫生真菌中发现尚属首次。     

超声提取细黄链霉菌胞外多糖工艺与抗氧化活性研究

以细黄链霉菌胞外多糖的浓度为指标,采用单因素和响应面分析法对细黄链霉菌胞外多糖浓度的提取条件进行优化,然后用邻二氮菲法和DPPH法测定了细黄链霉菌胞外多糖的抗氧化活性。结果表明,影响细黄链霉菌胞外多糖浓度的单因素试验的最佳条件为乙醇体积分数70%,乙醇沉淀时间12 h,超声功率420 W。响应面法优化得到超声波提取细黄链霉菌胞外多糖的最佳工艺为:乙醇体积分数70.32%,乙醇沉淀时间12.06 h,超声功率417.12 W,细黄链霉菌胞外多糖浓度为4.945 g/L,与预测值相差0.142%。细黄链霉菌胞外多糖对·OH和DPPH·均具有较强的抗氧化活性。     

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体发酵液口服制剂的研发

以青海地区蝙蝠蛾被毛孢菌丝体发酵液（HSFL）为研究对象,采用浓缩、澄清、调配、灭菌等工艺将HSFL配制成口服液制剂,并对其抗氧化性及稳定性进行考察。结果表明,HSFL制剂的最佳工艺条件为60 ℃浓缩,4 ℃冷沉,双层滤纸抽滤,再4 ℃冷沉,2%的复配甜味剂（蔗糖∶纽甜=20∶1（g∶g））,pH 4.8,辐照灭菌（60Co、10 kGy）。HSFL制剂对DPPH·的清除率可达96.32%,总还原力为0.76,具有一定的抗氧化活性,且通过稳定性试验确定在棕色玻璃瓶密封包装和阴凉、干燥处贮存条件下,HSFL原液和制剂的保质期为2年以上。     

提取方法对马铃薯渣果胶多糖组成及分子链构象的影响

采用酸(柠檬酸)、碱(氢氧化钠)、酶(多聚半乳糖醛酸水解酶)3种方法从马铃薯渣中提取果胶多糖,研究不同提取方法对多糖得率、单糖组成、酯化度、分子质量及分子链构象的影响。结果表明:3种提取方法得到的马铃薯渣果胶多糖均以富含半乳糖侧链的鼠李半乳糖醛酸聚糖I(RG-I)结构为主。其中,碱提果胶多糖得率最高(23.1%),其次为酸提(11.7%)和酶提(6.0%)。3种果胶多糖甲酯化度均较低(0～7.5%),而乙酰化度较高,且酸提和酶提马铃薯渣果胶多糖的乙酰化度高于碱提(分别为13.6%,10.7%,6.6%)。分子质量分析结果表明,酶提果胶多糖的分子质量最高(1 706.3 ku),且分布最窄。通过Mark-Houwink-Sakurada方程判断:酶提果胶多糖的分子链形态较为聚集,接近球状构象;酸提果胶多糖介于球状和线团状构象之间;碱提果胶多糖分子链形态最为疏松,呈无规线团状构象。     

树舌胞外多糖抗氧化活性研究

采用分光光度法研究树舌胞外多糖体外抗氧化活性。以V C为对照,测定GAEPS对超氧阴离子（O-2·）、羟自由基（·OH）、二苯代苦味酰自由基（DPPH·）、亚硝酸盐的清除能力。结果表明GAEPS具有较强的抗氧化能力,其抗氧化活性与多糖浓度在一定浓度范围内呈量效关系。当GAEPS浓度为4mg/mL时,其对O-2·、·OH、DPPH·、亚硝酸盐的清除能力分别达到83.26%、75.81%、86.16%、82.36%。