HPLC-ICP-MS法测定富硒小麦中硒的形态

建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)检测富硒小麦中4种硒形态分析方法。使用微波辅助酶萃取富硒小麦中亚硒酸盐(SeIV)、硒酸盐(SeVI)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代胱氨酸(SeCys2),采用Hamilton PRP X-100色谱柱,以6 mmol/L柠檬酸为流动相,pH=5.0,在9 min内可完全分离4种硒形态。SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的检出限分别为0.23、0.15、0.30、0.16μg/L,线性相关系数(r2)均大于0.999。以富硒小麦为基体进行加标回收试验,SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的回收率在93.7%～105.2%之间,相对标准偏差为2.2%～6.6%(n=6)。方法简单快速,具有良好的精密度和准确度,适用于富硒小麦中硒形态分析。     

富硒农产品中硒代氨基酸形态及其在不同蛋白组分中的分布

目的：探究富硒西兰花、富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗不同溶解性蛋白组分中硒代氨基酸形态及分布情况。方法：利用高效液相色谱—氢化物发生—原子荧光光谱联用技术测定4种富硒禾谷类和十字花科农产品中硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)含量,并分析各硒代氨基酸在清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等不同溶解性蛋白组分中的分布特点。结果：4种富硒植物的硒代氨基酸在不同蛋白组分中的含量及分布存在显著差异(P＜0.05)。富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗的有机硒以SeMet形式存在,在4类蛋白组分中分布较一致且相对含量均高于66%,不存在SeEt;富硒西兰花的有机硒主要以SeCys2和SeMet为主、MeSeCys次之,前二者在清蛋白和谷蛋白组分中的分布较一致且约占有机硒含量的36%,但在球蛋白和醇溶蛋白组分中均以SeMet存在,相对含量最高达60%,其次为SeCys2约占有机硒含量的34%。富硒西兰花中存在极少量的SeEt约占有机硒含量的5%。结论：3种禾谷类农产品(富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗)的不同溶解性蛋白中均以SeMet为主;而富硒西兰花的不同溶解性蛋白则以SeMet和SeCys2为主,并且其清蛋白和谷蛋白还富含较多的MeSeCys。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体串联质谱法测定富硒大蒜中硒形态

目的 建立大蒜中硒形态的高效液相色谱-电感耦合等离子体串联质谱测定方法。方法 采用ZORBAX SB-Aq反相离子对色谱柱作为分析柱,10.00 mmol/L柠檬酸(铵)+5.00 mmol/L己烷磺酸钠+2.00%甲醇为流动相,梯度洗脱,可在10.00 min内完成对硒酸根(SeO2-₄)、亚硒酸根(SeO2-₃)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代乙硫氨酸(SeEt)的分离分析。采用恒温振摇辅助酶提取法对大蒜进行提取。结果 SeO2-₄、SeO2-₃、SeCys2、MeSeCys、SeMet和SeEt的方法检出限分别为0.40、0.40、0.44、0.47、0.35和0.45 μg/kg,0.00～100.00 μg/L范围内线性相关系数(r)均>0.999,线性关系良好。除SeCys2,加标回收率为79.00%～104.00%,相对标准偏差为2.20%～5.00%(n=7)。结论 该方法稳定性好,灵敏度和准确度高,适用于大蒜中5种硒形态分析。     

耐硒驯化灵芝菌种的液态发酵中硒的富集特征

对灵芝(Ganoderma lucidum)菌株在平板上做耐硒驯化,然后对驯化前后灵芝菌种液态发酵过程中富硒性能进行了比较,最后对驯化灵芝液态发酵中硒富集特征进行了研究。实验结果表明,灵芝菌种经耐硒驯化后,其生物量、菌丝体硒含量、总硒含量最高分别达到16.1 g/L,13 264μg/L和91.5 mg/L,明显优于未驯化组。对驯化灵芝液态培养过程中硒富集特征研究表明,富硒灵芝中存在硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、硒甲基硒代半胱氨酸(SeMeCys)和无机硒(Se(IV))等4种硒形态,其中SeMet、SeCys2占主要部分,分别可达硒代氨基酸总量的60%～90%、10%～40%;在培养过程中单一增加Na2SeO3添加浓度,并不能显著增加灵芝中硒代氨基酸含量,而更多以Se(IV)形式存在。     

富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。     

应用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术分析研究畜肉中硒形态

目的 应用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术（HPLC-ICP/MS）分析研究畜肉中Se（Ⅵ）、Se（Ⅳ）、SeCys、MeSeCys和SeMet 5种硒形态。方法 采用超声辅助蛋白酶ⅩⅣ和胰脂肪酶酶解提取畜肉中硒形态,以C18反相色谱柱为分析柱,10 mmol/L柠檬酸和5 mmol/L己烷磺酸钠（pH=4.0,含1%甲醇）为流动相,等度洗脱,HPLC-ICP/MS分析。结果 5种硒形态可在7 min内有效分离,在线性范围内相关系数均>0.999,线性良好;Se（Ⅵ）、SeCys、MeSeCys和SeMet 4种硒形态检出限为0.000 3~0.002 mg/kg,不同浓度水平的加标回收率为80.0%~103.3%,相对标准偏差均小于6.8%,有证标准物质ERM^? BC210a测定值在标准值范围内。结论 该方法适用畜肉中Se（Ⅵ）、SeCys、MeSeCys和SeMet的分析测定。畜肉中的硒形态主要为SeMet,同时含有少量的MeSeCys和SeCys。     

食品中硒元素形态分析的研究进展

硒是人体必需的微量元素,具有丰富的化学形态,分为无机硒和有机硒,不同硒形态对人体的生物活性不同。无机硒主要包括硒酸Se(Ⅵ)、亚硒酸Se(Ⅳ),有机硒主要包括硒蛋白、硒核酸和硒多糖等大分子硒,及硒代胱氨酸(selenocystine,SeCys2)、硒代蛋氨酸(selenomethinonine,SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(methyl selenocysteine,MeSeCys)、硒代乙硫氨酸(selenoethionine,SeEt)等小分子硒化物。无机硒不易吸收,可能对人体造成危害,有机硒易吸收,适当摄取对人体有多方面益处。准确测定食品中不同硒形态及具体含量,对人体按需摄入硒元素具有重要指导意义。本文总结了近年来食品行业中硒形态检测研究涉及的领域,包括果蔬、水产、药食同源的中药、茶叶、谷物等方面的研究,常用的提取、分离、分析技术,重点介绍了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术和液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用技术在不同食品中检测硒形态的应用情况,并展望了未来硒形态分析的前景。     

液相色谱-电感耦合等离子质谱联用法测定大豆中的5种硒形态

目的建立液相色谱-电感耦合等离子质谱法(liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry,LC-ICP-MS)测定谷物类大豆样品中5种硒形态[硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代L-半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeⅣ)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒酸根(SeVI)]的分析方法。方法样品采用超声水解,加入链酶蛋白酶E提取,经C_(18)反向色谱柱(4.6mm×150mm,5μm,100?)分离,以30mmol/L磷酸氢二铵、0.5mmol/L四丁基溴化铵、2%甲醇为流动相,流动相的pH用甲酸调节至5.8～6.0,通过ICP-MS测定5种硒形态。结果经方法优化后, LC-ICP-MS方法可以在8 min内将5种硒形态完全分离,且各个硒形态标准曲线的线性关系良好(r~2≥0.995),方法检出限为0.5～1.0μg/L,定量限为1.5～3.0μg/L,加标回收率为97.34%～100.33%,相对标准偏差为0.46%～1.2%。结论本方法具有前处理简单、快捷,灵敏度高,分析速度快等优点,适用于大豆食品中硒的形态分析。     

亚硒酸钠和硒代蛋氨酸对人结肠腺癌细胞的毒性作用

探讨两种硒化物对人结肠腺癌Caco-2细胞的毒性作用。将Caco-2细胞暴露在不同浓度的亚硒酸钠(SeIV)和硒代蛋氨酸(SeMet)中培养24 h,用Annexin V-FITC/PI双染色法检测在同样浓度的SeIV和SeMet培养下细胞的凋亡率,并设置不做硒处理的空白对照。用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞内的超氧化物歧化酶SOD活力和谷胱甘肽GSH的含量。相同浓度时(0.8μg Se/mL),与对照相比,SeIV诱导细胞凋亡显著率上升(p0.05),SeMet变化不显著。一定浓度的SeIV(≥0.4μg Se/mL)和SeMet(≥40μg Se/mL)与对照组相比均显著降低细胞的存活率(p0.05);随着Se含量的升高细胞的存活率呈下降趋势,SeIV、SeMet的IC_(50)分别为2.56、215.55μg Se/mL。当SeIV浓度为≥0.8μg Se/mL,SeMet浓度为≥40μg Se/mL时,细胞的LDH释放率均显著高于对照组(14.80%)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet≥4μg Se/mL时,细胞的SOD活性均显著低于对照组(56.76 U/mg prot)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet浓度为160μg Se/mL时,细胞的GSH含量均显著低于对照组(61.67μg/mg prot)(p0.05)。一定浓度的SeIV和SeMet会使Caco-2细胞产生氧化应激而导致细胞毒性,诱导细胞凋亡。     

高效液相色谱-电感耦合等离子质谱法分析富硒茶叶中硒的形态

建立富硒茶叶中硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基-硒代半胱氨酸（SeMC）、亚硒酸根（Se（IV））、硒代蛋氨酸（SeMet）、硒酸根（Se（VI））5?种硒化合物的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱的分离检测方法。方法利用Hamilton?PRP-X100色谱柱对富硒茶叶中5?种硒化合物进行分离,利用电感耦合等离子体质谱对硒元素进行检测,外标法定量测定5?种硒化合物的含量。研究采用蛋白酶K溶液为提取剂,超声提取60?min,以柠檬酸溶液为流动相,梯度洗脱,5?种硒化合物在15?min内得到了有效分离。5?种硒化合物标准曲线的线性相关系数不小于0.999?8,检出限为0.13～1.09?μg/L。该前处理方法样品加标回收率在91.8%～109.4%之间。方法操作简便、分离效果好、检出限低,适用于富硒茶叶中硒的形态分析。     

生物强化硒和锌的豆芽制备、分布及形态研究

为锌和硒缺乏人群通过日常膳食补充此2种元素,以大豆作为生物强化的载体,采用浸泡的方式添加不同浓度的锌溶液和硒溶液,通过大豆发芽过程实现对锌、硒微量元素的富集和转化,制备出富含锌和硒的豆芽.结果 显示,当ZnS04浓度为2.40 mmol/L、Na2SeO3浓度为0.30 mmol/L、浸泡时间为10h、发芽时间为96 ...     

Determination of 5 natural selenium species in selenium-enriched bamboo shoots using LC-ICP-MS

A method for simultaneous determination of the selenium species methylselenocysteine (MeSeCys), selenocysteine (SeCys₂), selenite (SeIV), selenomethionine (SeMet), and selenates (SeVI) in natural selenium-enriched bamboo shoots was developed. Samples were extracted using sonication with a solution of pepsin. Different selenium species were separated using an anion exchange column with isocratic elution and a citric acid mobile phase at pH 4.7. Separated selenium species were detected as ⁸⁰Se using inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS) in dynamic reaction cell (DRC) gas mode. The method achieved acceptable quantitative recoveries of 73.9 to 113.4% with relative standard deviations of <5%. The limits of detection were 1, 2, 2, 3, and 3 μg/kg (fresh weight) for SeCys₂, Se, MeSeCys, SeMet, and Se, respectively. The method was simple, rapid, accurate, and useful for determination of selenium species in natural selenium enriched bamboo shoots.     

硒对常见蔬菜种子萌发的影响及在植株中的分布

分析不同质量浓度的Na2SeO3对蔬菜种子萌发的影响及硒在蔬菜不同器官中的分布,采用种子萌发实验和盆栽实验,应用氢化物发生-原子荧光法测定总硒,透析法分析有机硒。结果表明：随着Na2SeO3质量浓度的升高,蔬菜种子的发芽势、发芽率、简易活力指数、发芽指数均呈先上升后下降的趋势,但个体之间存在一定差异。绿豆在2.5 mg/L的处理液条件下各项活力指标达到最好,但随着Na2SeO3质量浓度升高,其各项指标开始下降。蔬菜植株中总硒含量随着浇灌液中Na2SeO3质量浓度的增加呈明显的上升趋势,在10.0 mg/L的高硒环境下对硒的富集能力为：上海青＞快菜＞茄子＞辣椒＞西红柿。茄子、辣椒、西红柿3 种蔬菜不同部位中硒含量分布存在显著差异,其中m（有机硒）≥1/2m（总硒）。实验结果可为筛选最适宜水培液中Na2SeO3质量浓度和选择适宜培育的富硒蔬菜种类,以及选择硒含量高的部位进食提供理论依据。     

Chemical characterisation and speciation of organic selenium in cultivated selenium-enriched Agaricus bisporus

The selenium concentration in Agaricus bisporus cultivated in growth compost irrigated with sodium selenite solution increased by 28- and 43-fold compared to the control mushroom irrigated solely with water. Selenium contents of mushroom proteins increased from 13.8 to 60.1 and 14.1 to 137 μg Se/g in caps and stalks from control and selenised mushrooms, respectively. Selenocystine (SeCys; detected as [SeCys]₂ dimer), selenomethionine (SeMet), and methyl-selenocysteine (MeSeCys) were separated, identified and quantified by liquid chromatography–electrospray ionisation-mass spectrometry from water solubilised and acetone precipitated proteins, and significant increases were observed for the selenised mushrooms. The maximum selenoamino acids concentration in caps and stalks of control/selenised mushrooms was 4.16/9.65 μg/g dried weight (DW) for SeCys, 0.08/0.58 μg/g DW for SeMet, and 0.031/0.10 μg/g DW for MeSeCys, respectively. The most notable result was the much higher levels of SeCys accumulated by A. bisporus compared to SeMet and MeSeCys, for both control and selenised A. bisporus.     

海芦笋食品的富硒规律及其优化

选取海水蔬菜海芦笋作为研究对象,在海芦笋生长后期采用不同浓度、不同喷洒次数以及不同pH 值的亚硒酸钠溶液对其进行叶面喷洒处理,得出了喷洒浓度、喷洒次数以及亚硒酸钠溶液pH 值对硒吸收以及有机硒转化率的影响。采用响应面(RSM)优化试验方法,得出了海芦笋的最佳富硒方案：200mg/L,2 次,pH7.3。在此条件下,有机硒含量可达到1.29 μg/g,总硒含量为2.58 μg/g,有机硒转化率可以达到50%。     

富硒双孢蘑菇硒形态分布及其营养品质和抗氧化特性

为了研究硒对双孢蘑菇子实体硒形态分布、营养品质和抗氧化酶活性的影响,通过在栽培实验中添加不同用量Na_2SeO_3的方式培养双孢蘑菇。采用原子荧光光谱法测定富硒双孢蘑菇子实体中的硒含量,分析硒在子实体中的分布情况,并以普通双孢蘑菇为对照,对富硒双孢蘑菇的主要营养成分及抗氧化酶活性进行测定。结果表明,双孢蘑菇子实体中的硒含量与培养料中硒用量呈正相关,蛋白硒含量占有机硒含量的比例约为77%~87%,蛋白质是双孢蘑菇的主要硒载体。硒用量为40 mg/kg时,可溶性蛋白和总糖含量较对照组显著增加;硒用量较高时,可溶性蛋白和总糖含量较对照组显著降低。随着硒用量的增加,总氨基酸含量和丙二醛含量增加,超氧化物歧化酶活性增强,而过氧化氢酶活性较低。本实验研究表明,适宜的硒用量可以提高双孢蘑菇子实体中硒含量,有助于改善其营养品质和生理特性。     

极大螺旋藻的硒富集化培养研究

为得到大量含有机硒的极大螺旋藻(Spirulina maxima),以生物量和藻体内硒富集量作为指标,研究不同硒添加量和硒添加方式对极大螺旋藻生长及富硒效果的影响。结果表明,分8d等量(100μL)多次添加100μg/mL Na2SeO3溶液,是最佳添加量和添加方式,可得到生物量为0.903g/L,单位干藻粉有机硒含量为1413.168μg/g的富硒极大螺旋藻。     

大蒜的生物富硒作用及其硒的形态分析

通过大蒜叶面喷施硒肥的田间试验,分析大蒜头和大蒜茎叶中硒含量,采用水提、酸提和酶提3种方法提取大蒜中的硒的形态,利用高效液相色谱联用电感耦合等离子体质谱仪(HPLC-ICP/MS)方法测定普通大蒜和富硒大蒜中的硒形态。结果表明：通过叶面喷施硒肥,大蒜蒜头硒含量从0.047μg/g显著提高到0.200～0.834μg/g (P＜0.05),大蒜茎叶硒含量从0.043μg/g显著提高到0.291～0.962μg/g(P＜0.05)。通过比较的3种硒形态提取方法,证明酶法提取率最高,为较优方法。普通大蒜和富硒大蒜中的主要硒形态为MeSeCys、SeCys2和SeⅣ。与普通大蒜相比,通过叶面喷施硒肥后,大蒜头中主要转化的有机硒形态为MeSeCys,占总提取硒的81.2%,并进一步通过电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定MeSeCys的结构,但酸提液中仍存在未知硒峰,需进一步鉴定。