中、高N/P(摩尔比)酪蛋白磷酸肽的生产工艺研究

确定了中、高N／P(摩尔比)CPP(酪蛋白磷酸肽)的生产工艺。采用纳滤工艺生产所得CPP的N／P(摩尔比)为24～32，灰分含量在6％左右；N(氮)和P(磷)的得率分别为86.43％和99．60％，Sephadex-G15凝胶层析和HPLC分析结果表明：纳滤能透过部分的氨基酸和短肽，从而改善CPP产品质量。用乙醇提取工艺生产所得CPP的N／P(摩尔比)为19-24，灰分含量为6．79％。该工艺的副产品NPP的灰分含量也很低，为4．42％。     

高N/P(摩尔比)酪蛋白磷酸肽生产工艺及初步分离纯化研究

研究高N/P(摩尔比)CPP的生产工艺并对CPP进行了初步的分离纯化。采用纳滤工艺生产所得CPP的N/P为24￣32,灰分含量在6%;N(氮)和P(磷)的得率分别为85.46%和100%。氨基酸分析、Sephadex-G15凝胶层析和HPLC分析结果表明纳滤能透过部分的氨基酸和短肽,从而改善CPP产品质量。     

离子交换法制备酪蛋白磷酸肽

分别用阴离子树脂和阳离子树脂对酪蛋白磷酸肽（CaseinPhosphopeptide,简称CPP）初级品N/P(摩尔比r为7.52)进行纯化.采用阴离子树脂纯化CPP的回收率为P98.71％;N82.78％;高纯度CPP产品的r(N/P)为5.44.对阳离子树脂纯化CPP做了初步探讨,研究了不同pH对纯化效果的影响.在pH5.0的最优条件下,回收率P为81.85％,N为53.80％,r(N/P)为4.67.与阴离子树脂纯化CPP的过程相比,用阳离子树脂纯化CPP时,树脂在使用前无需转型处理,洗脱条件简单,从而大大地缩短了操作时间,并且提高了产品的浓度.     

两种酪蛋白磷酸肽阻止钙沉淀形成的比较研究

酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptides,CPP)是以牛乳酪蛋白为原料,含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽。本文通过比较两种不同氮磷摩尔比(N/P)的CPP样品抑制钙离子形成沉淀的功能以及pH值、温度和CPP浓度对其的影响,并与柠檬酸和木糖醇的协同作用进行比较研究。结果表明:CPP浓度是CPP作用效果的主要影响因素,pH值对CPP影响较大,其次是柠檬酸和木糖醇的添加。温度对CPP作用效果几乎没有影响;柠檬酸和木糖醇与两种CPP之间都有一定的协同作用并且两种CPP与柠檬酸的协同作用效果接近。且浓度越高,效果越好。在抑制金属离子沉淀,pH、CPP浓度和木糖醇协同作用上CPPⅡ的作用效果较好,但温度对其两者都没有影响。两种CPP样品都具有良好的功能性质,但氮磷摩尔比(N/P)低的CPPⅡ性质更优。本试验为我国研究开发富含CPP的功能性食品以及营养保健食品提供理论基础。     

市售两种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的比较

对市售两种酪蛋白磷酸肽(CPP)产品体外结合钙离子的能力(即持钙能力)进行了测定和比较，结果表明CPP产品在弱碱性溶液中能有效抑制和延缓Ca3(PO4)2沉淀的产生，且在相同条件下，纯度越高，N／P值越低的CPP产品持钙能力越强。本文还讨论了在产品研发过程中如何选用CPP产品。     

一株食源性单增李斯特菌镉、砷耐受基因的测序分析

酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides,CPP）是以牛乳酪蛋白为原料,含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽。本文通过比较两种不同氮磷摩尔比（N/P）的CPP样品抑制钙离子形成沉淀的功能以及pH值、温度和CPP浓度对其的影响,并与柠檬酸和木糖醇的协同作用进行比较研究。结果表明：CPP浓度是CPP作用效果的主要影响因素,pH值对CPP影响较大,其次是柠檬酸和木糖醇的添加。温度对CPP作用效果几乎没有影响;柠檬酸和木糖醇与两种CPP之间都有一定的协同作用并且两种CPP与柠檬酸的协同作用效果接近。且浓度越高,效果越好。在抑制金属离子沉淀,pH、CPP浓度和木糖醇协同作用上CPPⅡ的作用效果较好,但温度对其两者都没有影响。两种CPP样品都具有良好的功能性质,但氮磷摩尔比（N/P）低的CPPⅡ性质更优。本试验为我国研究开发富含CPP的功能性食品以及营养保健食品提供理论基础。     

酪蛋白磷酸肽新工艺及其体外功能性质

用Alcalase水解酪蛋白,用TNBS法监测酪蛋白的水解度(DH),运用纳滤技术改善产品质量;同时还研究了不同rN/rP(摩尔比)的CPP(酪蛋白磷酸肽)结合钙离子和亚铁离子的能力.结果表明,用Alcalase酶可以使酪蛋白的水解度(DH)达到16%～20%,TNBS法可以明显减少碱的引入,从而降低CPP产品的灰分含量.截留相对分子质量为150的纳滤膜可以适当的降低CPP产品的rN/rP,改善产品质量,而且能达到80%的总氮回收率;在DH为20%左右,rP基本上没有损失.该工艺适合于工业化生产较高rN/rP的CPP产品.rN/rP较低的CPP结合钙的能力好于rN/rP较高的CPP产品;CPP也可以抑制亚铁离子的沉淀.     

毛细管区带电泳测定酪蛋白磷酸肽方法的研究

用毛细管区带电泳(CZE)对酪蛋白磷酸肽(CPP)进行了分离和测定。研究出的适宜电泳操作条件为:工作电压30KV、柱温25℃、毛细管长度50cm、内径70μm、进样量5sec(气压进样)、紫外检测波长200nm、缓冲液pH值9.2测定不同N/P样品的CPP含量分别为42.2％、50.0％、51.0％。     

Fe3O4@ZrO2磁纳米粒子在酪蛋白磷酸肽富集中的应用

本实验将制备好的Fe₃O₄@ZrO₂磁性纳米粒子作为载体,对经胰蛋白酶消化后的酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides,CPP）进行高效地选择性富集。实验以CPP的N/P（摩尔比）以及磁纳米粒子吸附量为评价指标,进行单因素实验以便选取较优的实验因素,分析酪蛋白水解度、吸附pH、吸附时间、吸附温度及肽溶液初始浓度这五个因素对Fe₃O₄@ZrO₂磁性纳米粒子选择性吸附CPP的能力的影响,优化CPP富集的技术参数。结果表明,磁性材料最佳富集工艺系数为:酪蛋白的水解度为22%,反应pH=4.5,吸附温度为30 ℃,吸附时间为50 min,肽溶液初始浓度为50 mg/mL;在此条件下,可得到N/P（摩尔比）为4.87的CPP,磁纳米粒子的吸附量为94.37 mg/g,且用NaOH(pH13)溶液进行解析,CPP的洗脱率可达95%以上。综上,Fe₃O₄@ZrO₂磁性纳米粒子呈现出优异的选择性富集CPP的潜力,对高质量高纯度CPP 的生产具有重要的指导意义。     

酪蛋白磷酸肽功能性质的体外研究

以酪蛋白为原料，通过有控制的酶解以及离子交换和凝胶过滤技术制得N／P（摩尔比）不同的酪蛋白磷酸肽（CPPS），并对其体外阻止磷酸钙沉淀的效果进行了分析、测定和比较。在添加量相同时，总的趋势是N／P较小的样品阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N／P值较大的样品。CPPs的作用效果不仅与N／P值有关，还和它们分子中氨基酸的组成和排序或磷酸基的分布有关。     

酪蛋白磷酸肽的体外功能试验

对不同级别的酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptide,以下简称CPP）促进钙吸收的体外功能性质进行了研究,测定了CPP的结合钙量、CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果及持钙能力.结果表明CPP对钙的结合量随温度的升高而减少,随pH值的升高而增加;CPP对阻止磷酸钙沉淀的作用随温度升高和溶液钙磷比增加而下降;随氮磷摩尔比降低,CPP阻止磷酸钙沉淀形成的最低有效浓度下降;对于不同的钙磷比,CPP的氮磷摩尔比越小,保持在溶液中的钙量越多,但每摩尔磷保持钙的摩尔数随氮磷摩尔比的降低而降低.     

肽钙螯合物的研究进展

利用酪蛋白磷酸肽螯合钙离子的特性,以钙离子浓度为尺度,分级制取不同钙螯合能力的CPPs,同时提高其纯度。以酪蛋白的胰蛋白酶酶解产物为原料,通过逐级增加Ca²⁺添加量,在终浓度为55%（v/v）的乙醇溶液中分级沉淀出三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分（CPP1-Ca、CPP2-Ca和CPP3-Ca）,并利用PBS脱钙得到三个级分相应的酪蛋白磷酸肽（CPP1、CPP2和CPP3）。以传统钙乙醇沉淀法得到的肽钙螯合物（CPP-Ca）为对照,分析并对比三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分的理化性质以及持钙特性。结果表明,三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分中,CPP3-Ca含有最高的纯度和钙螯合量,分别为89.42%和69.59 mg/g,明显高于未分级CPP-Ca的83.77%和55.05 mg/g。氨基酸组成及N/P（摩尔比）分析发现CPP3-Ca含有更高磷酸丝氨酸基团,进而能够结合更多的Ca²⁺。不同酪蛋白磷酸肽级分持钙能力分析结果显示CPP3能够更好地延迟和阻止磷酸钙沉淀的形成,具有更高的持钙能力。同时CPP3-Ca在模拟肠道环境中具有更高的钙溶解度,表明分级后的酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的体外生物利用度提高。

     

生物活性肽—酪蛋白磷酸肽（CPP）的研制

摸索了2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPP的最佳工艺条件：底物浓度10%、用酶量1500u/g反应温度45℃、pH10.5、反应时间150min。采用选择沉淀法分离CPP,在pH4.5添加1.1?Cl2(w/v)和50%（v/v)乙醇,室温沉淀4h ,得到CPP产品的N/P、得率分别为6.39%和13.94%。     

Optimization of L-lactic acid feeding for the production of poly-D-3-hydroxybutyric acid by Alcaligenes eutrophus in fed-batch culture

We investigated optimization of the feeding of L-lactic acid for the production of poly-D-3-hydroxybutyric acid [P(3HB)] by Alcaligenes eutrophus in a fed-batch culture system. An acidic substrate solution was fed automatically so as to maintain the pH of the culture liquid at 7.0. Feeding of a substrate solution containing 45% (w/v) L-lactic acid, 6.2% (w/v) sodium L-lactate, 5.8% (w/v) ammonia water and 1.8% (w/v) potassium phosphate [at a molar ratio of carbon to nitrogen (C/N molar ratio) of 10], allowed the L-lactate concentration in the culture liquid to be maintained at approximately 2 g/l and the cell concentration reached 27.4 g/l after 15 h of cultivation. To promote P(3HB) production, a two-stage fed-batch culture consisting of a culture for cell growth and one for P(3HB) accumulation was carried out. When the substrate solution, whose C N molar ratio was 23, was fed during the P(3HB) accumulation phase, the cell concentration and the P(3HB) content in the cells reached 103 g/l and 57.6% (w/w), respectively, in 51.5 h.     

两种酪蛋白磷酸肽混合物的钙结合能力及物化性质比较

本研究探讨了两款市售酪蛋白磷酸肽产品在物化性质、钙离子结合能力的差异。钙乙醇法结果显示两款CPP产品的纯度具有较大差异（p<0.05）,CPP2的纯度是CPP1的1.36倍。体外钙离子螯合方法结果显示CPP1、CPP2的钙离子结合量分别是107.15 mg/g和142.56 mg/g,CPP2显著高于CPP1（p<0.05）。CPP1和CPP2的轻敲密度、Hausner比值和Carr''s指数指标结果存在显著差异（p<0.05）,CPP1的Hausner比值（1.52）显著高于CPP2（1.36）（p<0.05）,CPP1的Carr''s指数（34.40）显著高于CPP2（26.51）（p<0.05）。Hausner比值和Carr''s指数可以用来表示粉体的可压缩性和流动性,两种指标结果分析表明CPP2的流动性优于CPP1。CPP1、CPP2的休止角均高于40°,说明CPP1、CPP2都存在一定黏聚性,CPP2的休止角数值低于CPP1,结果表明CPP2的流动性略好于CPP1,与Hausner比值和Carr''s指数结果一致。30%乙醇溶解性结果表明CPP1（93.49%）和CPP2（7.46%）在30%乙醇溶解性存在极显著差异,两款CPP产品两款CPP在物质组成上有一定差异。两种CPP产品的纯度和钙结合能力成正比。两者粉末都存在一定黏聚性,流动性一般,CPP2强于CPP1。30%乙醇溶解性存在极显著差异,可能是影响钙片质量的主要因素。本研究为CPP作为食品添加剂的应用情况提供科学依据。     

Cactus pear peel snacks prepared by instant pressure drop texturing: Effect of process variables on bioactive compounds and functional properties

Cactus pear (Opuntia ficus-indica) has a growing interest from both food manufacturers and consumers due to its medicinal and functional traits. Peel is a major waste from cactus pear juice industry accounting for about 38?% of the fruit weight. New concept of snacks preparation has been developed using instant controlled pressure drop (Détente instantanée controlee, DIC) techniques that provide a texturing stage between initial and final hot air drying stages. In this study, the application of DIC of cactus pear peel (CPP) was performed to be used as starch-free snacks with functional attributes. DIC resulted in high crispness CPP snacks with improved structural and nutritional attributes as well as high relative expansion ratio (up to 21 times). DIC expanded CPP snacks exhibited cutting force (3.34 N) that was much lower than untreated CPP (19.41 N). It is worth noting that optimized DIC treatment (P?=?0.6 MPa for t?=?15 s) allowed more availability of phenolic compounds and β-carotene by 83 and 551?%, respectively. In addition, antioxidant activity was increased up to 53?%. Results showed that steam pressure had significant effect on fat and alcohol insoluble solids (AIS) contents, wherein the correlation coefficients revealed critical relationships between structural and biochemical availabilities. Therefore, DIC could be used as an innovative technology to value this by-product leading to manufacture of crispy CPP snacks with high nutritious quality. There was a significant difference among the DIC treated and untreated CPP in respect to sensory properties, DIC treated CPP at operation conditions of saturated steam pressure?=?0.6 MPa and processing time?=?15 had the highest acceptability.