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聚合酶链反应,又称PCR技术,是近几年发展起来的一种快速的特定DNA片段的体外扩增法,一般与电泳连用.PCR技术可以用来对发酵中的某些特定菌进行检验和鉴定,与传统方法相比,它的最大特点是快速、准确. 相似文献
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PCR-DGGE技术及其在云南传统火腿微生物研究中的应用展望 总被引:1,自引:0,他引:1
聚合酶链式反应技术(PCR技术)能快速的研究传统发酵肉制品微生物物种的多样性,准确地获取复杂样品中微生物的消长规律而不需要进行微生物的传统培养,因此被广泛应用于各领域的研究。主要介绍了各种PCR-DGGE技术在发酵肉制品微生物方面的应用,并对其在云南传统火腿微生物中的研究应用做出展望。 相似文献
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PCR技术即利用聚合酶链反应,进行DNA片段的体外扩增,可用于发酵过程的特定菌的检验和鉴定,该法快速、准确。PCR技术有特异引物PCR技术、RAPD-PCR技术和Nested-PCR几种。PCR技术在酿酒中可用于啤酒中的腐败菌的鉴定、对葡萄酒中苹果酸一乳酸发酵(MLF)的检测和控制以及对葡萄酒中生物胺的检测。(孙悟) 相似文献
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空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是一种人畜共患病病原菌,可以使人和动物引发多种疾病。目前,检测C.jejuni采用的国标方法是传统的培养法,但C.jejuni培养条件苛刻,且培养法存在操作繁琐、特异性不强、费时等缺点。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以其快速、准确、灵敏度高、特异性强的特点,现已广泛应用于C.jejuni的检测,并成为目前快速检测临床与食品中C.jejuni最常用的的方法。本文综述了近年来利用RCR技术,包括常规PCR、多重PCR、巢式PCR、实时荧光定量PCR、PCR-酶联免疫吸附法、最大几率数-PCR、PCR-限制性片段长度多态性、PCR-变性高效液相色谱、PCR-变性梯度凝胶电泳和磁捕获-荧光PCR方法检测C.jejuni的研究进展,并针对这些PCR技术的原理、检测效果、优点和缺点等方面进行了分析比较,为有效控制和预防该菌引起的疾病提供重要信息。 相似文献
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PCR方法快速检测变形杆菌的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了一种快速、准确检测变形杆菌属的PCR方法.采用传统分离培养法、全自动微生物分析系统检测法和常规PCR方法对66株变形杆菌样本分离株进行鉴定.三种检测方法结果一致,但PCR方法检测时间只需5~6h,比传统分离方法节省40h左右.通过对13株非变形杆菌属菌株的特异性实验和标准菌株的灵敏度实验,进一步表明,PCR方法具有操作简便、准确可靠以及灵敏特异的特点,优于传统分离培养法和全自动微生物分析系统检测法. 相似文献
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基于Cyt-B基因设计特异性引物,建立高效快速检测肉制品中鸭源性成分的方法。选取Cyt-B基因作为检测靶标,应用生物信息学技术设计各物种特异性引物,建立聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系检测肉制品中鸭源性成分,并将鸭特异性基因片段进行克隆和测序分析。该检测体系可以对鸭肉含量为1pg的肉制品实现稳定检测,灵敏度髙,特异性好。测序分析结果显示克隆的特异性基因序列与Genbank中相同物种(序列ID:EU755253.1)的核苷酸同源性达100%。该文建立的基于Cyt-B基因的PCR检测方法,可实现对肉制品中鸭源性成分高效快速的检测,既为肉类产品DNA鉴定试剂盒的研发提供试验基础,也有望对肉制品的市场监管和相关执法提供有力的技术保障。 相似文献
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肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、木糖葡萄球菌(S. xylosus)、腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)、表皮葡萄球菌(S. epidermidis)、马胃葡萄球菌(S. equorum)和松鼠葡萄球菌(S. sciuri)是发酵肉制品中常见的葡萄球菌,为准确、快速地检测和鉴定这些菌种,建立6?种葡萄球菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法并进行验证。以上述菌种的gap、rpoB、SodA和SNc为靶基因,设计和筛选菌种特异性引物6?对,优化PCR体系,建立6?种葡萄球菌的多重PCR鉴定方法。实验结果显示多重PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到4?pg,活菌检测灵敏度可达到2×102?CFU;采用建立的多重PCR方法对传统肉制品中分离的8?株葡萄球菌进行鉴定,结果与16S rDNA序列分析、生理生化鉴定结果一致。建立的多重PCR方法具有较高的种间特异性,可快速、准确地用于发酵肉制品中肉葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、松鼠葡萄球菌和腐生葡萄球菌的检测和鉴定,具有较好的应用前景。 相似文献
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Microbial diversity and stability during primary cultivation and subcultivation processes of Tibetan kefir
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Wei Gao Lanwei Zhang Zhen Feng Hui Liu Nditange Shigwedha Xue Han Huaxi Yi Wenli Liu Shuang Zhang 《International Journal of Food Science & Technology》2015,50(6):1468-1476
In this study, we have investigated the microbial diversity and stability in the Tibetan kefir during the primary cultivation and subcultivation processes via a combination of culture‐independent and culture‐dependent methods. According to the culture‐independent methods, the profiles of PCR‐DGGE (polymerase chain reaction–denaturing gradient gel electrophoresis) indicated that nine microbial species were predominant at different cultivation stages; seventy four isolates of seven predominant species were obtained and identified via the culture‐dependent methods. PCR‐DGGE further confirmed that Lactobacillus kefiranofaciens, Lactobacillus kefiri, Lactobacillus paracasei, Streptococcus thermophilus, Kazachstania unispora and Saccharomyces cerevisiae were the most dominant species in the Tibetan kefir during the process of primary cultivation, among which Lb. kefiri, Lb. paracasei and K. unispora showed relative strong stability during both the processes of primary cultivation and subcultivation. These findings suggested that some isolates of the three species possessed the potentiality of being used in the development of direct vat set (DVS) starters for the production of Tibetan kefir and the related products. 相似文献
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Abstract: The bacterial community of Chungkookjang and raw rice‐straw collected from various areas in South Korea was investigated using both culture‐dependent and culture‐independent methods. Pure cultures were isolated from Chungkookjang and raw rice‐straw on tryptic soy agar plates with 72 to 121 colonies and identified by 16S rDNA gene sequence analysis, respectively. The traditional culture‐based method and denaturing gradient gel electrophoresis analysis of PCR‐amplified 16S rDNA confirmed that Pantoea agglomerans and B. subtilis were identified as predominant in the raw rice‐straw and Chungkookjang, respectively, from Iljuk district of Gyeonggi province, P. ananatis and B. licheniformis were identified as predominant in the raw rice‐straw and Chungkookjang from Wonju district of Gangwon province, and Microbacterium sp. and B. licheniformis were identified as predominant in the raw rice‐straw and Chungkookjang from Sunchang district of Jeolla province. Other strains, such as Bacillus, Enterococcus, Pseudomonas, Rhodococcus, and uncultured bacteria were also present in raw rice‐straw and Chungkookjang. Practical Application: A comprehensive analysis of these microorganisms would provide a more detailed understanding of the biologically active components of Chungkookjang and help improve its quality. Polymerase chain reaction‐denaturing gradient gel electrophoresis analysis can be successfully applied to a fermented food to detect unculturable or more species than the culture‐dependent method. This technique is an effective and convenient culture‐independent method for studying the bacterial community in Chungkookjang. In this study, the bacterial community of Chungkookjang collected from various areas in South Korea was investigated using both culture‐dependent and culture‐independent methods. 相似文献
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目的:运用聚合酶链式反应和变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction- denatured gradient gelelectrophoresis,PCR-DGGE)技术分析西藏传统发酵乳制品中乳酸菌的生物多样性。方法:从西藏8个牧区采集19份样品,提取样品总DNA,用巢式和降落PCR扩增16S rRNA的V3区段,对扩增产物做变性梯度凝胶电泳,用NTsys 2.10e软件分析条带的相似性,切胶回收条带并测序,鉴定菌种并构建系统进化树、分析优势菌种。结果:19份样品中的乳酸菌菌群组成包括Lactobacillus paracasei、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus crispatus、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus buchneri、Lactococcus raffinolactis、Leuconostocmesenteroide、Lactobacillus plantarum、Pediococcus pentosaceus、Lactococcus lactis、Streptococcus thermophilus。综合样品和牧区的乳酸菌分布情况,确定Lactobacillus delbrueckii为优势菌种。结论:PCR-DGGE技术能够有效分析西藏地区发酵乳制品中乳酸菌的多样性。 相似文献
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应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究托盘保鲜膜包装的冷却牦牛肉在4℃贮藏过程中的微生物多样性及其动态变化.直接从样品中提取细菌总的DNA,采用降落PCR扩增16S rDNA的V3可变区序列,再通过DGGE得到动态变化的指纹图谱,并对主要条带进行测序分析.结果表明:检测到的优势腐败菌为Pseudomonas sp.(假单胞菌)、Lactococcus sp.(乳球菌)、Acinetobacter sp.(不动杆菌)、Brochothrix thermosphacta(热死环丝菌)、Enterobacteriaceae bacterium(肠杆菌科细菌),此外还检测到Uncultured Citrobacter sp.(非培养的柠檬酸杆菌)和Staphylococcus sp.(葡萄球菌) 相似文献
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本文同时采用PCR-DGGE(聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳)方法和传统平板培养法两种方法研究了反复冻融条件下造成的温度波动对速冻水饺中微生物数量及其种类多样性的影响。并向水饺中人为添加金黄色葡萄球菌,分析反复冻融条件下金黄色葡萄球菌数量的动态变化及其对水饺中菌相的影响。研究结果表明随着反复冻融次数的增加,水饺中的微生物数量均呈显著增加趋势(P0.05),人工接种金黄色葡萄球菌处理组水饺中金黄色葡萄球菌数量从速冻后的3.49 lg CFU/g增加至5.07 lg CFU/g,已经达到了可导致葡萄球菌属中毒的水平(105CFU/g)。PCR-DGGE结果表明,乳酸菌、假单胞菌和热杀索丝菌为反复冻融过程水饺中的优势菌株,葡萄球菌属在后期数量较多成为反复冻融后期的优势菌株,与传统平凡培养方法结果基本一致。 相似文献
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采用选择性培养基和聚合酶链式反应和变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gelelectrophoresis,PCR-DGGE)技术,研究益生菌切达干酪成熟过程中(6 ℃,180 d)细菌群落构成及益生菌(干酪乳杆菌LC2W)的存活情况。结果表明:SBM和MSE等选择性培养基存在选择专一性不强的缺点,不能客观反映干酪内各种微生物的动态变化;随着切达干酪成熟时间的增加,发酵剂嗜热链球菌和乳酸乳球菌的数量明显下降,而非发酵剂菌群乳杆菌的数量和主要种类呈上升趋势;干酪成熟180 d后,干酪乳杆菌LC2W的存活量仍高于1×108CFU/g。切达干酪能作为干酪乳杆菌LC2W存活的良好载体;PCR-DGGE技术和选择计数法联用更加适合干酪细菌群落结构的分析。 相似文献
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目的:采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denatured gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术分析资中冬尖发酵过程中微生物群落结构及其动态变化。方法:从资中采集4份不同发酵年份冬尖样品,提取样品总DNA,采用巢式PCR法扩增细菌16S r DNA V3区,扩增产物采用DGGE分离,对细菌主要优势条带进行克隆、测序、构建系统发育树。结果:冬尖在发酵过程中细菌多样性较丰富,且群落结构发生了较大变化。不同发酵时间样品间,细菌群落结构相似性为9%~67%,其中第2年与第3年样品相似性最高,达67%。资中冬尖发酵过程中,所涉及的细菌主要分为3类,分别为厚壁菌门(Firmicutes)、变形杆菌门(Proteobacteria)和非培养菌,其中厚壁菌门为优势菌群,占53%;变形杆菌门占37%;非培养菌仅占10%。结论:采用PCR-DGGE技术能更全面、更真实地反映资中冬尖在发酵过程中微生物群落的多样性及其动态变化,为冬尖的生产工艺和风味物质的形成提供理论支撑。 相似文献