重组枯草芽孢杆菌生产青霉素G酰化酶发酵条件的研究

对产青霉素G酰化酶的温度诱导型重组枯草芽孢杆菌发酵条件进行了研究。结果表明,培养基的最佳氮源和碳源组成为:35gL-1牛肉膏、3gL-1葡萄糖和6gL-1淀粉;最佳诱导时机是细胞对数生长的中后期,诱导前应将pH调节至中性;最佳诱导条件为升高温度至50℃并维持4min;随后将温度降低到34℃进行重组蛋白的表达。在上述条件下,PGA的表达水平可以达到5.8UmL-1。SDS-PAGE电泳分析表明该重组菌能够将绝大部分表达的PGA分泌到细胞外,而且表达的PGA蛋白占有高比例(90%)。     

磁性微粒对青霉素G酰化酶的固定化研究

将无机磁性粒子Fe3O4与有机材料海藻酸钠结合起来制成一种复合的磁性微粒,并将其进行表面修饰,通过化学共价法来固定青霉素G酰化酶。通过扫描电镜等对微粒进行形态学观察,并用傅立叶红外图谱表征微粒表面修饰基团。酶学性质研究表明,该微粒固定化的青霉素G酰化酶的最适pH值为7.5,最适温度为40℃。固定化酶与底物的亲和力有所降低,但是稳定性显著提高。重复催化研究结果表明,固定化酶具有比游离酶更广泛的温度及pH值适用范围,并且具有良好的热稳定性、可循环使用性和贮存稳定性。     

青霉素酰化酶固定化载体材料研究进展

就青霉素酰化酶固定化载体材料的研究和应用进行了论述。重点介绍了功能基化高分子聚合物、含环氧基高分子聚合物、离子型层状水滑石和介孔分子筛等新型载体的结构特性和对青霉素酰化酶的固定化作用,并对近年来固定化生物酶载体材料的发展动向和趋势加以评述和展望。     

青霉素酰化酶的生产与应用新进展

介绍了青霉素酰化酶的生产及应用新进展。着重介绍了青霉素酰化酶固定化技术的发展。青霉素酰化酶主要应用于6氨基青霉烷酸的工业生产和半合成的β内酰胺抗生素的合成,是在半合成抗生素的生产上有重要作用的一种酶。此外,青霉素酰化酶也可应用于其它的生物转化,如肽的合成、手性化合物的外消旋混合物的拆分。     

固定化青霉素酰化酶生产6-APA的流程设计

针对本组研制的一种新型固定化青霉素酰化酶,以动力学方程为基础,分别进行了批式反应和连续反应的计算．对于批式反应,计算了不同浓度底物的水解过程和各种抑制因子对反应过程的影响;对于连续反应,计算了不同级数下的需酶量、转化率和成本消耗。结果表明,三、四级连续反应是可行的,有工业应用的前景。     

以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶的研究

介绍了以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶需首先制备壳聚糖颗粒 ,使用戊二醛、甲醛、乙二醛 3种活化剂处理所得的壳聚糖颗粒 ,确定了以戊二醛为活化剂交联其上的氨基共价结合青霉素酰化酶的固定化方法。从戊二醛的浓度、pH值、固定化时间、固定化pH值、酶用量等条件摸索了最佳固定化条件 ,获得了酶活力为4 0 0 0 0U/ (g·h)、回收率为 5 0 %左右的固定化青霉素酰化酶。     

含青霉素酰化酶的重组大肠杆菌的发酵培养

研究了含青霉素酰化酶的重组菌 Ｅ．ｃｏｌｉ Ａ５６ （ｐ Ｐ Ａ２２）发酵过程中环境因素对酶活的影响,考察了发酵液性质变化与酶活表达之间的关系,获得了酶活较高时的优化环境条件。结果表明,青霉素酰化酶在重组菌生长的平衡期后开始大量表达,苯乙酸作为限制性底物对青霉素酰化酶的合成起诱导作用     

青霉素酰化酶在新型复合载体上的固定化研究

在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固载最适条件为:戊二醛用量0.1 mmol/L,pH值7.64,给酶量1%,温度42℃,时间11 h~12 h。此条件下所得固定化酶的活力为34000 U/mL;测得所制固定化酶的最适pH值为7.82,最适温度为45℃。     

青霉素酰化酶的分离纯化和固定化研究新进展

青霉素酰化酶又称为青霉素酰胺酶或青霉素氨基水解酶,主要从大肠埃希菌胞内酶和巨大芽孢杆菌胞外酶获得,该酶已大规模应用于工业生产β-内酰胺类抗生素的关键中间体和半合成β-内酰胺类抗生素。主要介绍了青霉素酰化酶固定化技术的进展,讨论了不同固定化技术的特点,并展望了固定化青霉素酰化酶的发展前景。     

固定化青霉素酰化酶生产6-APA的产业化技术

该项目研究成功新型颗粒状固定化青霉素酰化酶,并建立了5t/a的生产能力。用无机氮源替代了有机氮,显著降低了固定化酶的成本;采用比重较大的吸附剂吸附酶蛋白,简化了酶的提取步骤;应用吸附、洗脱、超滤3步工艺,实现了酶的高效分离纯化。产品达到国外同类产品水平,用于6-APA的生产,酶成本低于国外产品。预计国内半合成抗生素生产对固定化青霉素酰化酶的需求量在10t/a左右。     

固定化基因工程菌的培养和hEGF表达

引　言人表皮生长因子 (humanepidermalgrowthfactor,hEGF)是由 5 3个氨基酸残基组成、相对分子质量为 6 0 4 5的单链多肽[1] .hEGF具有多种生物活性 ,并在医药、化妆品工业中具有广泛用途 .国内外已有很多重组表达hEGF的报道[2 ,3] .但是 ,各种hEGF表达系统的质粒稳定性随培养     

青霉素酰化酶基因工程菌 E.coli A_(56)(pPA22)水解青霉素 G 的动力学

用初速度法测定了青霉素酰化酶基因工程菌 E.coli A_(56)(pPA22)游离细胞和固定化细胞水解青霉素 G 的动力学常数,并进行了动力学模型的检验。该菌体酶活高,米氏常数小,固定化后米氏常数和苯乙酸抑制常数增大,底物抑制常数和6-APA 抑制常数没有变化。通过青霉素 G 裂解过程的考察,验证了青霉裂解动力学模型的适用性及动力学常数测定的可靠性。     

A NEW PROCESS FOR THE EXTRACTION OF PENICILLIN G FROM THE FILTRATE OF FERMENTATION BROTH WITH TBP IN BUTYL ACETATE

The mixture of neutral phosphorus esters and butyl acetate (BA) can be used, as the extractant for the extraction of penicillin G. The extraction equilibrium pH can be increased to pH3—4 due to the stronger extraction capability of the solvent mixture, instead of pH1.8—2.2 with butyl acetate as solvent. The experimental results indicate that the total recovery of penicillin G can reach 96.6% with the new extraction process, which is 5—6% higher than that obtained with the traditional process using BA as solvent at pH1.8—2.2.