生态条件对VA菌根真菌侵染烟草的影响

本文研究了主要生态条件对ＶＡ菌根真菌侵染烟草的影响。结果表明：山东植烟土壤类型中，以轻壤质普通棕壤最利于ＶＡ菌根真菌的侵染和增殖，其次为中壤质普通棕壤、轻壤质淋溶褐土、中壤质淋溶褐土和轻壤质普通褐土，此类土壤中ＶＡＭ真菌的种类多、数量大；而壤砂质粗骨棕壤、重壤质普通棕壤和重壤质淋溶褐土中ＶＡＭ真菌种类少，孢子量少。山东植烟土壤中ＶＡＭ真菌的优势属为球囊霉属Ｇｌｏｍｕｓ，少数为无轴囊霉属Ａｃａｕｌｏｓｐｏｒａ。常见种为摩西球囊霉Ｇ·ｍｏｓｅａｅ、透光球囊霉Ｇ·ｄｉａｐｈａｎｕｍ、幼套球囊霉Ｇ·ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ、近明球囊霉Ｇ·ｃｌａｒｏｉｄｅｕｍ和苏格兰球囊霉Ｇ·ｃａｌｅｄｏｎｉｕｍ等。不同类型的烟草与ＶＡＭ真菌的不同种之间存在一定选择性。烟草在不同生育期对ＶＡＭ真菌的侵染反应存在差异，以幼苗期接种反应最好。     

不同烤烟品种根系丛枝菌根真菌(AMF)群落结构和组成的差异分析

为了探明不同烤烟品种根系丛枝菌根真菌(AMF)多样性及群落结构的差异,以云南主栽烤烟品种云烟202、云烟87、云烟85和K326为材料,构建每个品种根系AMF 18S r RNA基因克隆文库。结果表明,在4个烤烟品种的文库中共发现了21个操作分类单元(OTU),云烟202、云烟87、云烟85和K326克隆文库的OTU数分别为6、9、8和8;OTU在烟草根系中的分布显示,OTU1和OTU2是4个烟草品种根系的主要类型,OTU3为常见类型,OTU4只在云烟85和K326中有分布,而其余类型仅在一个烟草品种根系中出现;系统发育分析表明,9个OTU类型可划分到属,其中球囊霉属(Glomus)5种,无梗囊霉属(Acaulospora)2种,硬囊霉属(Sclerocystis)2种,其余12个OTU类型具体分类地位不明确,可能为新的AMF种类。多样性分析结果表明,云烟87根系AMF多样性最为丰富,云烟85和K326品种间差异不明显,而云烟202中物种类型则最少。可见,侵染4个烟草品种根系的主要AMF类型相同,但稀有AMF类型则明显不同。     

广西烟草内生细菌的动态分布及其对烟草疫霉的拮抗作用

从广西百色市的9个烟草品种中分离出470株内生细菌菌株,经常规细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析,获得的菌株分别属于肠杆菌属(Enterobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、寡养单胞菌属(Stenotro-phomnas)和假单胞菌属(Pseudomonas),其中土壤杆菌属和肠杆菌属为烟草内生细菌中的优势种群。烟草内生细菌的类群和数量随烟草种植地点、品种、器官和生育期的不同而不同。烟草内生细菌在根部数量最多,其次是茎和叶。内生细菌的总量从缓苗期到旺长期增加,之后显著下降。从470株烟草内生细菌菌株中筛选出对烟草疫霉有拮抗作用的菌株56株,其中芽孢杆菌菌株Y10的抑制效果最好,抑制率达91.48%,室内盆栽防治效果为68.72%。     

小麦中致病真菌的分离鉴定及熏蒸对其毒力的影响

小麦受镰刀菌的感染会导致赤霉病、真菌毒素污染和减产,镰刀菌对粮食安全有着严重威胁。通过对小麦中镰刀菌株进行分离鉴定,分离出的三种菌株N1、N2、N3分别属于禾谷镰刀菌属、亚洲镰刀菌属和高秆镰刀菌属。利用产毒基因检测和真菌毒素检测对三株菌株玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和伏马毒素的产毒情况进行分析,结果一致显示N1和N3能产生玉米赤霉烯酮和呕吐毒素,均含有PSK和Tri5两种产毒基因,而N2不产生这三种毒素。进一步通过臭氧和二氧化氯进行气体熏蒸,探究气体熏蒸对分离出的三株菌株的影响,通过观察孢子形态、菌丝体长度、菌丝形态,结果表明二氧化氯熏蒸能有效抑制菌丝生长和孢子萌发,低浓度二氧化氯（300 mg/L）处理0.5 h,可明显抑制菌丝的生长。而臭氧只能抑制孢子萌发,对菌丝的生长没有明显的抑制作用。     

烟草镰刀菌根腐病抗性鉴定方法研究

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法，采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种（小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01）的镰刀菌抗病性进行了研究。结果表明，镰刀菌毒素液胁迫法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系毒素浓度为8%，处理时间6d；镰刀菌孢子悬浮液接种法可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系孢子液浓度为107个/mL，处理时间4 d；带菌菌谷接种也可以鉴定品种的抗感程度，适宜体系菌谷比例为20%，处理时间9 d；离体叶片用菌饼和草酸液处理，能区分品种的抗感性，但不能区分品种的抗感程度。研究结果认为孢子悬浮液接种法和带菌菌谷接种与其他3种方法相比可以准确评价品种对镰刀菌根腐病的抗感性。     

烟草VA菌根研究进展

综述了烟草VA菌根真菌资源 ,VA菌根真菌对烟草病虫害的影响、作用机理及在烟草防虫防病中的应用。     

烟草根茎部病原真菌的分离与鉴定

为系统了解烟草根茎部主要病原真菌,采集根茎部发黑腐烂病株进行室内分离与鉴定,共分离到病原真菌64株。根据菌落、菌丝和孢子形态特征观察以及多基因位点系统发育分析对病原菌进行分类鉴定,并在烟草叶、茎和根部进行病原菌致病力测定。结果表明,分离得到的病原菌包括：尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、接骨木镰刀菌（F. sambucinum）、共享镰刀菌（F. commune）、苏拉威镰刀菌（F. sulawesiense）、柑橘镰刀菌（F. citri）、番薯镰刀菌（F. ipomoeae）、条纹孢壳属（Lasiodiplodia brasiliense）、小孢根霉（Rhizopus microspores）和枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）。致病力测定表明,这些病原真菌对烟草都有致病力,其中接骨木镰刀菌、尖孢镰刀菌、共享镰刀菌和L. brasiliense的致病力较强,苏拉威镰刀菌、番薯镰刀菌、柑橘镰刀菌、小孢根霉和枝状枝孢菌致病力稍弱。病原真菌的分离与鉴定结果将为科学、合理、有效地防治烟草根茎部病害提供依据。     

丛枝菌根真菌对植烟土壤磷含量及烟株养分吸收的影响

为明确菌根化烟苗移栽后的菌根效应,通过大田试验研究了3种氮肥水平(45,67.5和90 kg/hm2)下菌根化烟苗对植烟土壤磷含量及烤烟旺长期氮、磷营养吸收的影响.结果表明:①烤烟接种Arbuscular mycorrhizal(AM)真菌在45和67.5 kg/hm2施氮水平下对植烟土壤及烟株磷含量影响较小,但在90 kg/hm2水平下能有效提高磷含量;②不同施氮水平下,接种摩西球囊霉Glamus mosseae( Gm01)显著降低了烤烟根、茎、叶氮含量,但接种Glamus mosseae( Gm02)仅在90 kg/hm2施氮水平下达到显著水平;③不同施氮水平下,接种AM真菌均有效降低烤烟的氮磷比,其中,Glamus mosseae( Gm01)的菌根效应较佳.可见,不同施氮水平影响AM真菌的菌根效应,但不同来源的摩西球囊霉(Glamus mosseae)对烤烟的作用效果有一定差异.     

土壤中正己醇降解菌的多样性研究

目的：筛选能够有效降低正己醇含量的微生物菌种,了解自然界中正己醇降解菌的分布与多样性。方法：以正己醇生产厂废水排放口周围的土壤为分离源,通过富集培养和分离筛选。结果：获得了6 株对正己醇有显著降解作用的菌种,根据其在PDA 培养基上的菌落形态和孢子形态初步分类鉴定为镰孢菌属、地霉属、毛霉属和曲霉属。其中,地霉属的菌株最多(3 株),对正己醇的降解能力强,适用pH 值范围广。地霉属菌株S12 和S13在中性和酸性条件下对3g/L 正己醇的降解率均达60% 以上。结论：自然界中的正己醇降解菌在种类、生态、降解能力、作用条件等方面都具有丰富的多样性。     

醇化过程中烤烟烟叶表面可培养真菌的多样性

为研究醇化过程中烤烟烟叶表面可培养真菌的多样性,选取国内外25个不同产地、等级的正常、霉变烟叶为研究对象,利用平板分离和分子生物学方法对烟叶表面的可培养真菌进行鉴定和系统发育分析。从415株真菌中挑选具有代表性的77株真菌进行ITS分析。结果表明:(1)从霉变烟叶中分离到的真菌,其多样性高于正常烟叶。(2)除7株真菌无法准确鉴定外,其余70株真菌分布在3个门、8个纲和30多个属中。优势菌属为曲霉属(Aspergillus)、分子孢子菌属(Cladosporium)和根霉属(Rhizopus),占比分别为22.9%、7.1%和7.1%。(3)从进口烟叶中分离到了特异的属,包括短梗霉属(Aureobasidium)、Myrmaecium和锥毛壳属(Coniochaeta)。表明醇化过程中烤烟烟叶表面的可培养真菌的多样性高,且真菌类别与烟叶产地密切相关。控制曲霉属真菌的生长繁殖是降低醇化烟叶霉变发生率的关键。     

烟草青枯菌致病型及分布的研究

1997~2001年从我国南方烟区青枯病采集分离出97个菌株,依据各菌株在鉴别品种红花大金元、K326、岩烟97和G3上的反应特征,可区分为3个致病型。Ⅰ型菌致病力弱,在K326上反应为LR-MR;Ⅱ型菌致病力中,在K326上反应HS,而在岩烟97上反应为LR-MR;Ⅲ型菌致病力强,在岩烟97上反应HS。调查表明,感病品种连作地以Ⅰ型菌占优势,抗I型菌的品种连作地以Ⅱ型菌居多;Ⅲ型菌主要表现在小气候闷热、阴、湿、砂的烟草连作地。温度对不同菌株与高感品种互作看不出明显影响,而对不同菌株与抗性型品种互作则有明显影响;只有在较高的温度>24℃下,II型菌对K326,Ⅲ型菌对K326和岩烟97产生强侵染。      

烟草耐黄瓜花叶病(Cucumber Mosaic Virus)育种研究

当今世界尚未发现烟草CMV抗源,据此,笔者经多年在烟草苗床和大田加压选择,育成三个高耐CMV品系:C151、C152和C212。在自然感染和田间接毒测定中,其抗性均占显著优势,平均病情指数比台湾育成的TT6、TT7低,室内接种鉴定对大陆各烟区CMV病毒株系的耐力远比TT6、TT7强,对各地CMV流行株系表现明显的抗性,达显著和极显著水平。尤其C212,其病情指数为28.88,是三品系中最低者,抗(耐)力居首位。TMV接毒鉴定,C151为过敏枯斑反应,是当前对CMV和TMV兼抗性能的较好桥梁品系。      

烟草几种重要病害拮抗菌的筛选

从山东滕州,临沂等县（市）的烟草,番茄和辣椒根际采集土壤样本１５份,经内分离纯化获得细菌１０２株,放线菌５５株。以烟草赤星病菌,野火病菌和青枯病菌等为力,对１５７个菌株进行平板对峙培养法抑菌测定,分别筛选出和对１种病原真菌和病原细菌有拮抗活性的细菌３３株和放线菌２２株。     

湖南烟草病毒病种类检测与系统进化分析

为明确湖南烟草病毒病的种类及分布状况,利用小干扰RNA（siRNA）测序和反转录PCR（RT-PCR）对湖南烟区样品进行检测,分析主要病毒侵染类型,最大似然法构建系统进化树确定分类地位。结果表明,湖南烟草受到烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）、番茄斑驳花叶病毒（Tomato mottle mosaic virus,ToMMV）、地黄花叶病毒（Rehmannia mosaic virus,ReMV）和辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMV）等6种病毒的侵染,其中ToMMV、ReMV、PMMV首次被检测到,TMV、CMV和PVY是主要病毒,TMV为优势病毒,复合侵染是主要侵染类型,复合侵染率为71.29%;湖南烟草上的TMV分离物形成3个独立组系,CMV分离物属群组I的亚组IB,PVY分离物属PVY^NTN-a、PVY^E和PVY^SYR-I株系。本研究摸清了湖南烟草病毒种类、分布及侵染情况,明确了TMV、CMV、PVY的分类地位,为病毒病的防治提供了理论依据。     

基于16S rRNA基因测序分析烟叶发酵过程中表面微生物的多样性

雪茄烟叶经过发酵处理才能制成风味独特的雪茄产品,研究烟叶发酵过程中微生物的多样性对提高国产雪茄烟叶品质有重要意义。作者采集了来自云南省8个地区初步晾晒的雪茄烟叶和7种来自多米尼加共和国各地的优质雪茄烟叶,基于16S rRNA基因测序技术鉴定各个样品表面微生物种类,通过OTU聚类分析、Alpha多样性分析、物种组成分析等方法进行微生物多样性分析,获得晾晒烟叶表面的优势菌。结果显示,云南省雪茄烟叶的优势菌属为葡萄球菌属,其他常见菌属有假单胞菌属、无色杆菌属、棒状杆菌属、泛菌属等;多米尼加共和国雪茄样品中微生物物种分布较中国雪茄样品更均匀,微生物的多样性整体高于中国雪茄样品,其优势菌属多为葡萄球菌属、棒状杆菌属、四联球菌属;云南省临沧市雪茄烟叶优势菌属与多米尼加雪茄相似,而且它的物种多样性和均匀度高于中国其他地区,具有较大的发展潜力。     

感染赤星病烟草叶际细菌的多样性分析

为揭示田间感染赤星病烟草叶际细菌属水平上的多样性,提取了感病烟叶样品DNA,PCR扩增样品的16S区,采用IonS5XL高通量测序技术对扩增片段测序,并对其细菌群落结构进行分析。结果表明,田间感赤星病烟草叶片叶际细菌群落结构较为典型。在门水平上,优势菌门为变形菌门Proteobacteria(71.59%);属水平上,优势菌为泛菌属Pantoea(31.23%)、假单胞菌属Pseudomonas(22.44%)、甲醇杆菌属Methylobacterium(6.17%)、鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas(6.02%)、Aureimonas(2.08%)、Falsirhodobacter(1.35%)。因此,感烟草赤星病叶片叶际优势细菌属为泛菌属和假单胞菌属。     

微生物菌剂对植烟连作土壤酶活性的影响

采用盆栽试验,研究了微生物复合肥、摩西球囊霉、幼套球囊霉、根内球囊霉对烤烟连作土壤酶活性的影响.结果表明:1)微生物复合肥、摩西球囊霉和根内球囊霉处理的脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性,幼套球囊霉处理的脲酶和磷酸酶活性,CK的脲酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性均在烤烟整个生育期中呈"升-降-升-降"的双峰变化趋势,且它们均在移栽后65 d和98 d时出现活性高峰.2)与CK相比,微生物复合肥、摩西球囊霉、幼套球囊霉均能不同程度地提高连作土壤中蔗糖酶、脲酶、磷酸酶和过氧化氢酶活性,而根内球囊霉只对连作土壤中蔗糖酶、磷酸酶和过氧化氢酶活性有明显的提高作用.综合评价不同微生物菌剂处理对烤烟连作土壤中4种酶活性的影响,认为微生物复合肥、摩西球囊霉改善烤烟连作土壤酶活性的效果较好,其次为幼套球囊霉和根内球囊霉.3)4种酶的相关分析显示,蔗糖酶与磷酸酶和过氧化氢酶与脲酶呈极显著正相关,脲酶与磷酸酶、蔗糖酶呈显著正相关,表明4种酶之间在酶促反应时存在着相互促进的作用.     

四个国家雪茄外包皮烟叶表面细菌分离与活性测定

研究不同国家雪茄外包皮烟叶表面细菌差异,并为筛选菌株在雪茄外包皮烟叶发酵中的利用奠定基础。利用常规分离方法对美国、巴西、多米尼加及中国4个国家的7个雪茄外包皮烟样表面细菌进行分离鉴定,并初步测定筛选细菌的功能活性。结果表明,4个不同国家雪茄外包皮烟叶表面共分离获得细菌100株;属水平上不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌多样性及数量存在差异,基本以芽孢杆菌和葡萄球菌为主,尤其芽孢杆菌属为优势菌属;细菌种类多米尼加 > 美国-2=中国-1 > 巴西-1 > 巴西-2 > 中国-2 > 美国-1。活性分析结果显示,具有纤维素酶、果胶酶和蛋白酶分泌功能的菌株分别为24株、20株和22株,耐烟碱菌株46株,有7株芽孢杆菌同时具有上述4种活性。本研究证明国内外不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌种类存在差异,以芽孢杆菌属为优势细菌,其次是葡萄球菌,且芽孢杆菌属酶活更全面,不同菌株间活性差异较大。     

有机肥施用对烟田土壤细菌多态性的影响

为实现烟田土壤保育的目标,对长年连作的烟田施用有机肥,采用高通量测序技术,应用Solexa基因组分析平台,测定和分析复合有机肥OFN、OFJ和烟草秸秆有机肥TS对烟田土壤细菌多态性的影响。结果表明,相对于单施化肥,烟田施用有机肥后,烟田土壤细菌OTU、chao1指数和ace指数增大,表明有机肥提高了烟田土壤细菌物种丰富度;细菌丰富度因有机肥种类而不同,并随烟草发育期而产生差异。有机肥对土壤细菌菌群结构影响显著,在门和属的分类水平上,土壤优势细菌种类和比例产生明显改变,特别是有机肥处理可显著提高假丝酵母属细菌的丰度,而降低红色杆菌属、硝化螺旋菌属细菌的丰度。KEGG代谢途径差异分析发现,施用有机肥后土壤细菌代谢路径和代谢路径中基因数量发生改变,而改变了烟田土壤细菌群落功能和细菌代谢。总之,烟田施用有机肥改变了土壤细菌的多态性,并可能达到烟田土壤保育的效果。     

美国烟草霜霉病大范围预测预报研究概况

在北美洲霜霉病是烟草的重要病害.目前中国还没有这一病害,属对外检疫对象,若传入中国,将给中国的烟草生产造成巨大损失.我们应对该病保持高度警惕,密切关注烟草霜霉病的发生发展与研究的新动向.本文将烟草霜霉病预测预报研究概况做一综述,以期严防此危险性病害的传入.