江苏中烟核心原料产区烤烟品种遗传分析及分子身份证构建

烟叶原料的稳定性、一致性是保障烟草工业公司产品高质量发展的关键，有效区分和鉴别烟叶原料是当前工业公司亟需解决的难点。本研究以江苏中烟核心原料产区主栽的23个烤烟品种为材料，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从212对SSR引物中最终筛选出12对多态性高且条带清晰的引物，等位基因数介于2～5，多态性信息含量介于0.333 8～0.571 1。聚类分析发现，各品种按照遗传背景聚为4类；群体遗传结构和主成分分析均将供试材料划分为2个亚群，且类群内各品种的分布结果高度一致，与种质亲缘关系吻合度较高。该组引物高效可靠，可用于烤烟品种的DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。本研究可为江苏中烟核心产区主栽烤烟品种的育种利用和烟叶原料鉴定提供理论依据。     

吉林省绿豆种质资源遗传多样性SSR分析及指纹图谱构建

为分析吉林地区绿豆种质资源遗传多样性并构建DNA指纹图谱,明确吉林省绿豆资源遗传背景及品种真伪鉴定提供依据,以吉林省74份绿豆品种为材料,利用9对多态性丰富的SSR引物对其进行遗传多样性分析及SSR指纹图谱构建。9对SSR引物共检测到40个等位基因,每对引物检测到2~9个,平均为4.44,PIC值变幅介于0.076 8~0.725 4之间,平均为0.45;品种间遗传相似系数变幅介于0.111 1~1.000 0之间,平均为0.499 0。遗传相似系数在0.6~1.0之间有1 159个,占全部数据的42.91%;UPGMA聚类分析结果显示,在遗传相似系数为0.503 7的阈值处,可将74份绿豆材料分为三大类群,相同地理来源品种大多成簇分布;基于检测结果构建了0/1格式的DNA指纹图谱和分子身份证,为吉林省绿豆品种区分鉴别提供参考。吉林省绿豆品种间亲缘关系较近,遗传背景狭窄,遗传相似度较高,今后应加强种质资源引进与创新以丰富该地区绿豆资源遗传多样性;SSR指纹图谱及分子身份证的构建对绿豆品种真伪鉴定、溯源管理及原产地保护具有重要意义。     

内蒙古地区绿豆品种遗传多样性SSR分析及DNA指纹图谱构建

目的:分析内蒙古地区绿豆品种的遗传多样性并构建其DNA指纹图谱,为探明绿豆种质资源遗传背景及真伪鉴定提供科学依据。方法:以内蒙古地区92份绿豆品种为模板,利用筛选得到的10对多态性丰富的简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)引物对其进行遗传多样性分析及DNA指纹图谱构建。结果:10对SSR引物共检测到58个等位基因,每对引物检测到3~10个不等;不同引物揭示的多态信息含量变幅介于0.371 4~0.773 7,平均为0.52。92份绿豆种质的遗传相似系数变幅介于0.033 4~1.000 0之间,平均为0.46。非加权组平均法聚类分析结果显示,在遗传相似系数为0.294 4时,可将92份绿豆种质分为两大类群。构建了92份绿豆品种的SSR指纹图谱及分子身份证,除个别品种外,大部分具有唯一性,可用于品种鉴定。结论:内蒙古地区绿豆种质资源的遗传多样性相对较丰富,但存在一定程度的近交现象,有待进一步加强引进基因资源,创新绿豆育种材料;构建绿豆SSR指纹图谱和分子身份证,对绿豆品种真伪鉴定、身份识别、溯源管理及原产地保护具有重要意义。     

基于SSR标记的黑龙江省绿豆品种遗传多样性分析及指纹图谱构建

目的:为明确黑龙江地区绿豆品种遗传多样性水平并构建SSR指纹图谱,为绿豆育种研究及品种鉴定奠定基础。方法:基于SSR荧光标记技术,利用筛选得到的14对SSR引物对黑龙江地区35份绿豆品种进行遗传多样性分析及SSR指纹图谱构建。结果:14对SSR引物在35个绿豆品种中共检测到49个等位基因,每对引物检测到2~7个,平均3.5个;多态性信息含量PIC值介于0.106~0.761之间,平均为0.398。参试品种遗传相似系数变幅介于0.6966~1.0000之间,平均为0.894,其中在0.82~0.86之间的遗传相似系数占全部数据的51.2%。在遗传相似系数为0.83的阈值处可将参试材料分为三大类群。构建了35份具有品种特异性的绿豆SSR指纹图谱及分子身份证,具有唯一性,可用于绿豆品种鉴定。结论:黑龙江地区绿豆品种遗传多样性水平不够丰富,SSR指纹图谱具可应用于绿豆品种真伪鉴定。      

麦芽品种DNA指纹图谱构建的研究

麦芽作为啤酒的主要原料,麦芽品种折鉴定对啤酒酿造至关重要。微卫星DNA(SSR)作为第二代分子标记技术,在植物物种多样性和品种鉴定上应用广泛,因此本研究利用SSR分子标记进行麦芽品种DNA指纹图谱构建。结果表明,从105对SSR引物中筛选到6对多态性丰富的SSR引物,每对引物的等位基因3~10个不等,平均每个引物产生5.83个等位基因。对实验样品的等位基因进一步分析发现,仅需4对核心引物就可以实现21个麦芽品种的区分。利用该技术,我们建立了相应麦芽品种DNA指纹图谱,为啤酒企业的麦芽采购提供技术支持。     

SSR与SRAP分子标记在烤后烟叶中的应用及烤烟遗传多样性分析

为筛选出适合烤后烟叶的分子标记并用于烤烟遗传多样性分析,以烤后烟叶为材料,利用毛细管电泳技术检测SRAP与SSR标记在烤后烟叶中的多态性和稳定性,并基于稳定性较好的SSR分子标记分析了云烟87、云烟97、云烟116、翠碧1号、红花大金元、中烟100、K326、KRK26、NC297等9个烤烟品种的遗传多样性。结果表明:与新鲜烟叶相比,烤后烟叶DNA降解较为严重,其降解主要发生在烘烤过程中干筋期的中后期。与SRAP相比,SSR标记在烤后烟叶中扩增稳定性更好,但多态性略差。此外,NTGS66290、NTGS66292、NTGS66295、PT30008、PT30169、PT30361、PT30403和PT30424等8对SSR引物能将9个烤烟品种进行有效区分,其遗传相似系数为0.250～0.900,平均值为0.622。     

43份葡萄种质遗传多样性的SSR分析

SSR(Simple Sequence Repeat,简单序列重复)标记技术被广泛应用于葡萄的品种鉴定和遗传多样性研究。本研究选取43份葡萄种质,采用6对SSR引物对供试品种遗传多样性进行了分析,构建了DNA指纹图谱,并根据遗传相似系数,采用非加权平均法(UPGMA)进行聚类分析,以期为品种鉴定和亲缘关系分析提供参考依据。结果表明,6对SSR引物共扩增出64个多态性位点,观测杂合度在0.74~0.84;利用获得的DNA指纹图谱,可以实现对葡萄品种的区分;聚类分析表明,在遗传相似系数为0.13时,全部供试品种被分为3大类,可以区分酿酒品种和鲜食品种,并能区分欧亚种和欧美杂种。研究结果表明,SSR标记可以从分子水平上有效区分葡萄品种和分析其亲缘关系。     

基于SSR标记的MCID法鉴定72个酿酒葡萄品种

葡萄品种繁多,表型现象不明显,同名异物或同物异名现象时有发生,品种的精准鉴定异常重要。本文利用8对引物的SSR指纹图谱通过NTSYS-2.10e软件对来源于不同国家及地区的72个酿酒葡萄品种进行了聚类分析,所得的聚类树状图直观反映了各品种间的遗传关系。在遗传相似系数为0.52左右时,可以分为4个类群。同时也发现聚类结果无法显示特定的引物和多态性标记等可用于品种鉴定参考的信息,限制了分子标记在品种鉴定中的实际应用。本文同时利用基于SSR分子标记的人工绘制植物品种鉴别图法(MCID),通过筛选出的6对引物的多态性指纹图谱,绘制了这些品种的鉴定图(CID),成功将72个酿酒品种进行区分。从CID图上可以找到任意2个或多个品种间进行区分与鉴定的引物以及依据的多态性条带。这对酿酒葡萄品种鉴定、新品种保护及促进酿酒葡萄产业的持续发展具有重要作用。     

TP-M13-SSR技术在麦芽品种鉴定中的应用

利用TP-M13-SSR标记技术构建麦芽品种指纹图谱,从163?对简单序列重复（simple sequence repeat,SSR）引物中筛选到4?对多态性丰富的SSR引物,每对引物的等位基因为3～10?个不等,平均每个引物产生6.75?个等位基因。在大批量引物筛选的情况下,M13通用引物可大大降低SSR引物进行荧光标记的合成成本。利用4?对SSR引物进行麦芽品种DNA指纹图谱构建,得到23?个麦芽品种的指纹图谱及指纹数据库。该法检测成本低,方法准确可靠,可实现国内主要麦芽品种的鉴定,为啤酒企业在麦芽采购环节提供技术支持。     

云南品牌卷烟主体烟叶原料的ISSR多态性分析及标记

为考察云南品牌卷烟主体烟叶原料的遗传多样性,从27个ISSR引物中筛选出7个引物,分别在17份烟草材料中进行PCR扩增。结果显示,能够产生40条稳定的条带,其中多态性带28条。通过UPGMA聚类分析,将17个烤烟品种分为2类。品种间遗传相似指数范围为0.50~1.00。同时,利用1个多态性强的ISSR引物、通过聚丙烯酰胺凝胶可以将这17份烤烟材料区分开,每个品种均有各自独特的指纹图谱,表明ISSR标记适于烟草品种鉴定和遗传多样性分析。     

RAPD标记在烟草研究中的应用

随机扩增多态DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNAs,RAPD)分子标记技术的诞生,为分子生物学技术在农业研究中的应用注入了新的活力,并为传统农业研究向分子水平发展提供了捷径。本文重点综述了RAPD分子标记技术在烟草群体分离分析和鉴定、标记辅助选择、遗传变异的识别、烤烟品种分子指纹分析、黑胚病菌全基因组DNA多态性标记、根结线虫种类鉴定、赤星病菌的分类地位等方面的研究进展,以及这些领域的研究发展和应用前景。      

部分烤烟种质遗传多样性与亲缘关系的RAPD分析

以22份烤烟材料为供试材料,应用RAPD(随即扩增多态性DNA)分子标记技术研究22份烤烟材料之间遗传多样性和亲缘关系.结果表明,第一等级划分(D=0.30)可以将22份材料划分为三大类群.第二等级划分(D=0.23)可以将22份材料划分为六个小类群,其中,一个是由云烟系列与亲本是特字401系选的品种及其杂交后代组成的类群;一个是由多数美国来源品种组成的类群;一个由9804、岩烟97和Coker176三个品种组成的类群;一个由CF965和K07两个品种组成的类群;红花大金元和C2分别独立成类.说明分子标记多态性基本上反映了品种间的遗传变异.本结果为烟草品种改良和杂交种选配,提高育种效率提供了理论依据.     

主成分散点图分析在烤烟新品种评价中的应用

为了挖掘适应昆明地区生态环境的优质烤烟新品种,选择云南省自育,美国、巴西引进和中美合育的16个烤烟新品种的农艺、经济、抗病性、化学成分、外观质量和感官质量等15个性状进行分析,采用主成分分析结合散点图法对参试烤烟新品种进行综合评价。以89.014%的性状累积方差贡献率为标准,确认了5个代表烤烟新品种综合质量的主成分,经过演算得出参试烤烟新品种的主要主成分综合得分,并采用散点图对烤烟新品种进行综合评价。结果表明,PVH2310、AOV405、NCT13、云烟117的综合评价得分较高,且优于对照K326和云烟87,其综合评价结果与区域适应性试验中的表现一致。这4个烤烟新品种可以作为昆明地区烤烟的备选新品种进行大面积推广。     

利用ISSR分析贵州部分烟草品种(系)的遗传关系

利用ISSR标记,对12个贵州地方品种(系)和5个贵州主要种植品种分析亲缘关系。结果显示,有23条ISSR引物在烟草上能扩出清晰条带,其中9条引物能扩增出明显多态,能把17个品种(系)区分开。利用NTSYS 2.0软件对多态条带进行统计;用SimQual计算遗传相似系数,遗传相似系数在0.2127~0.7872之间变动。根据UPGMA进行聚类分析结果表明,17个品种(系)可以分为3个组群。     

云南烤烟主要推广品种适宜种植区域划分

对11个参试品种在云南省11个地州60个试验点的综合表现进行了分析,将参试品种的试验点划分为6个生态相似区,并提出了不同品种在不同生态相似区的品质特征和适种程度,建议云南烟区以云烟85、云烟87和K326为主栽品种,搭配种植红花大金元、K346、G28等,局部烟区搭配种植云烟317、V2、RG11等品种。     

不同品种烤烟多酚含量和组成的差异分析

采用反相高效液相色谱法对2005和2006年河南中部烟区种植的4个烤烟品种初烤烟叶中的6种多酚成分进行了测定。结果表明:①不同烤烟品种的多酚类物质含量存在不同程度的差异,且两年的情况基本相同,中烟100的多酚类物质含量较高,云烟85和云烟87的多酚类物质含量相对较低;②绿原酸及其同分异构体和芸香苷占烤烟多酚类物质的90%以上,是主要的多酚类物质,山奈酚糖苷和莨菪亭含量极低,中烟100的总绿原酸、绿原酸占多酚总量的比例高于NC89和云烟系列,云烟85和云烟87的芸香苷占多酚总量的比例明显高于其它品种;③不同部位多酚含量的差异与烤烟品种也有一定关系。     

烤烟种质资源SSR核心引物的筛选及验证

为筛选到适合烤烟品种利用的核心引物,准确评价烟草种质资源遗传多样性和亲缘关系,利用5份遗传差异明显的烤烟种质对分布于烟草24条连锁群上的2317对SSR引物进行初步筛选,筛选出70对引物。再利用20份不同地理来源的烤烟种质对初筛引物进行复筛,最终确定24对核心引物。利用核心引物对20份烤烟种质进行遗传多样性分析,共得到85个多态性位点,平均PIC值为0.52,平均等位位点数为3.54。同时对这20份烤烟种质进行聚类分析和主坐标分析,验证24对核心引物的有效性。结果显示,两种研究方法结论一致,与种质亲缘关系吻合度较高。表明该SSR核心引物体系准确有效,可以适用于烤烟种质资源鉴定和遗传多样性分析。     

基于感官评价的加热不燃烧卷烟原料品种(系)筛选

为筛选适宜生产加热不燃烧卷烟烟叶原料的烤烟品种,在云南省5个试点(玉溪、保山、红河、临沧、文山)种植5个烤烟品种(系)(云烟207、云烟99、云烟116、KRK26、红花大金元),按加热不燃烧卷烟感官评价方法进行初烤烟中部叶的感官质量评价,并检测烟叶化学成分和香味物质含量(质量分数)。结果表明:①云烟99和云烟207的香气香味、劲头、谐调性和刺激性表现相对较好,适宜作为加热不燃烧卷烟烟叶原料的候选品种(系),而云烟116的感官评价指标表现相对较差。②烟叶常规化学成分和香味物质中,氮含量与香气香味、劲头、谐调性、口感等指标呈显著正相关,总糖和还原糖含量与谐调性、口感等指标呈显著负相关,酮类化合物含量与香气香味和口感指标呈显著正相关,酯类化合物含量与刺激性和口感指标呈显著负相关。这些烟叶成分可作为筛选其他适宜烟叶原料品种时重点分析的物质成分。     

33份晒烟种质资源SSR标记的指纹图谱构建

为分析我国晒烟种质资源的遗传多样性,并构建晒烟种质资源的指纹图谱,本研究利用25对SSR标记对33份晒烟材料进行分析。结果表明,25对SSR引物共检测到112个等位基因,平均每个标记4.31个,观测杂合度（Ho）平均值为0.0028,预期杂合度（He）平均值为0.6039。Shannon's信息指数I为1.1389,Nei's多样性指数（H）为0.5693,33份晒烟种质资源的遗传多样性相对丰富。UPGMA聚类分析表明,在相似性系数0.345处,可将供试烟草资源分为两个类群。同时,利用2 5对引物构建了33个晒烟品种的指纹图谱,为晒烟品种鉴定体系的研究奠定理论基础。本研究可为我国晒烟种质资源的鉴定与利用、优异基因的挖掘、育种亲本材料的选择等提供科学依据。      

抗PVY云烟87定向改良新品种“云烟301”的选育及特征特性

抗PVY云烟87新品种“云烟301”是云南省烟草农业科学研究院、国家烟草基因工程中心在克隆烟草隐性抗PVY基因eif4e1（又称为感PVY基因eIF4E1）、开发功能性分子标记、分析国内外抗PVY品种和种质资源基因型过程中,以云烟87为母本、Y85×RY2/F₂为父本（携带eif4e1）杂交,以定向改良云烟87的PVY抗性为主要目标,通过连续回交、分子标记辅助选择、全基因组基因芯片背景检测等技术培育而成（非转基因）。云烟301的遗传背景恢复为云烟87的比率为99.43%,云烟301的PVY抗性显著提高,保留了云烟87的栽培烘烤特性、原烟风格特征和感官质量。在打顶后PVY发病率达到1%的云烟87种植区,种植云烟301可挽回病害损失,具有良好的推广价值。