转基因番茄DNA检测芯片的研究

自19世纪70年代世界上第一例转基因植物问世以来，它对人类健康及环境的安全性问题，受到了全世界广泛的关注：本研究根据转基因番茄（Zeneea）中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PG／NOS基因和内源PG基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG—dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的；隹确性和效率。     

转基因玉米DNA检测芯片的研究

根据转基因玉米中所转入的外源基因,选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PAT基因和目的基因IVS2/PAT、CDPK/CryIA(b)、Maize genome/CaMV35S、PAT/CaMV35S1、Cry9C/CaMV35S!以及内源IVR基因设计特异性引物,采用多重PCR法对待测样品进行扩增,通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针,并制备基因芯片.在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时,比较了芯片检测的特异性和重复性,并对检测的灵敏度进行测试.结果表明,该方法具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达0.1%.     

应用依赖解旋酶DNA扩增技术检测转基因大豆

目的：基于依赖解旋酶DNA恒温扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）技术,建立快速检测转基因大豆的方法。方法：采用以CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS 3 种外源基因和内源基因Lectin（大豆凝集素基因）为目的片段设计4 对特异引物,建立反应体系,通过HDA方法对内源基因和3 种外源基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对结果进行同源性分析。结果：建立了转基因大豆HDA检测法,检测特异性良好,3 种外源基因的检出限为0.2%。结论：转基因大豆的HDA检测方法具有普通聚合酶链式反应的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。     

公共引物介导的多重定量PCR技术在转基因大豆检测中的应用研究

目的 建立公共引物介导的多重定量PCR法检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆(包括:MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705、MON87708)的方法.方法 设计并筛选出针对本研究涉及的6种转基因大豆对特异性引物,在每对特异性引物的5'端均加上一段公共引物,形成特异性嵌...     

PCR法定性检测大豆食用油中转基因成分

针对大豆食用油中核酸含量低且被严重破坏、DNA难以提取的问题,对CTAB法进行优化,有效从食用油中提取到可用于PCR扩增反应的DNA模板。同时定性检测出大豆内源基因lectin,外源调控序列启动子CaMV35S、终止子Nos及目的基因CP4-EPSPS序列,成功建立了基于PCR技术在大豆食用油中快速检测转基因成分的方法。     

食品中转基因大豆成分的定性和定量检测

为建立食品中转基因成分的定性定量分析，运用传统的定性PCR方法检测大豆加工产品中转基因成分的存在，运用Taqman探针技术，对存在的转基因成分进行准确定量。对于定量过程中由于扩增效率的不同造成的误差，通过大豆的内源基因Lectin进行校正，根据△Ct值对应于校正曲线计算出转基因大豆的含量。本方法灵敏度达到0．1％，误差范围小于30．0％。可用于转基因大豆的监测管理。     

PCR法定性检测大豆食用油中转基因成分

针对大豆食用油中核酸含量低且被严重破坏、DNA难以提取的问题,对CTAB法进行优化,有效从食用油中提取到可用于PCR扩增反应的DNA模板。同时定性检测出大豆内源基因lectin,外源调控序列启动子CaMV35S、终止子Nos及目的基因CP4-EPSPS序列,成功建立了基于PCR技术在大豆食用油中快速检测转基因成分的方法。      

转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状

转基因大豆及其制品日益增多，已经直接或间接地成为人类消费的食品，进入人们的食物链。转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响越来越引起人们关注，阐述了转基因大豆及其制品的安全性，并对其检测现状进行了概述。     

五重PCR检测转基因大豆

旨在建立一套准确、快速、可靠的用于转基因大豆检测及DNA提取方法;以35S启动予(Cauliflowermosaicvirus 35S, CaMV 35S)、Nos终止子(Nopalinesynthase, Nos)、NPTⅡ、CP4-EPSPS四种外源基因和大豆内源基因(Lectin)为检测的目的片段,建立五重PCR反应体系,并采用改进的方法提取DNA,进行PCR扩增,实际检测了已知转基因大豆和市售大豆;改进的DNA提取方法与经典的CTAB方法相比,提取时间至少缩短了1h,降低了提取成本.经过PCR扩增对五种外源基因进行了检测,经DNA测序证实了产物为目的扩增产物.转基因大豆的检出限为0.2%～0.5%.改进后的DNA提取方法能够快速提取用于PCR扩增的高质量模板,消除了PCR反应的抑制因子;建立的五重PCR反应体系能够高效、准确的检测转基因大豆.     

转基因"华番一号"番茄的筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法

为给转基因植物监测提供技术支持，建立了转基因“华番一号”番茄筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。转基因“华番一号”的筛选PCR检测主要以转基因通用元件CaMV35S启动子和NOS终止子为目的基因片段，特异性PCR检测以转基因外源重组子的CaMV35S启动子和反义EFE基因的相邻序列为目的片段；实验同时设立番茄的LAT52基因为转基因番茄定性、定量PCR检测的内对照基因。在所建立的PCR检测体系中，定性PCR筛选和特异性检测的检测极限为68个拷贝，实时定量PCR方法的检测极限为3个拷贝；筛选定量．PCR检测的定量极限为3个拷贝，特异性定量PCR检测的定量极限为25个拷贝。最后通过对2个已知含量的转基因番茄“华番一号”混合试样的检测，证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性、定量PCR检测。     

转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立及其在基因水平转移研究中的应用

为建立用于基因水平转移研究, 尤其是DNA经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基因hpt（hygromycin phosphotransferase）的定性和实时定量PCR体系,设计针对hpt的上游通用引物多个片段定性PCR扩增体系,以植物叶绿体基因rbcl为内对照,PCR扩增产物经测序验证.将定性PCR中最小片段（236 bp）连接到质粒载体pUC18-pMD T载体上,提取质粒经验证后做外标.应用TaqMan-MGB荧光探针和引物,建立定量的外标校正曲线法,并评价方法的精密度.建立的定性PCR体系能稳定扩增出236 bp～910 bp不同大小的5个hpt片段,并经测序验证.实时定量PCR的线性范围为105～10拷贝（R^2=0.998）,最低能检出10拷贝,重复性好.本研究已成功建立了用于转基因水稻标记基因hpt基因水平转移研究的定性和定量PCR系统。     

利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数

为分析转基因水稻外源基因拷贝数，利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了14株T0代的转基因水稻植株，得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株，同时利用Southern Blot方法进行验证分析。随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株，用Southern Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数，Southern Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的，3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southern Blot的分析结果，主要原因是Southern Blot方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时，转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段，电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生，除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。     

转基因大豆的PCR-免疫层析筛查方法研究初探

目的建立转基因大豆的PCR-免疫层析（PCR—ICT）快速筛查新技术。方法利用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的筛查标记，根据其序列设计特异性引物和探针，分剐用生物素和地高辛标记，用胶体金免疫层析技术检测并鉴定PCR产物。结果用新建立的PCR—ICT方法可以检出含0．5％转基因大豆的标准品，对大豆样品的检测结果与琼脂糖凝胶电泳检测结果一致。结论PCR—ICT方法通过DNA杂交和金标显色来同时检测、鉴定PCR产物，可以简便、快速地筛查转基因产品。     

食品中转基因成分的PCR快速检测研究

为建立食品中转基因成分的快速检测方法，针对转基因大豆、玉米、油菜的多个相对稳定的转基因元件，包括35S、NOS、EPSPS、Cry1A、NPTⅡ等基因，同时选定植物本身固有的基因：大豆Lectin、玉米IVR、油菜Napin基因作为内源参照指示基因，设计、筛选出9对引物分别组成多重PCR．结合高灵敏度的聚丙烯酰胺凝胶电泳组成快速检测体系对转基因食品进行检测，1～2d能完成整个检测过程。经测试：该检测体系稳定可靠、灵敏准确、特异性好，且操作简便、成本低廉，是一种进行转基因食品检测的良好技术模式。     

利用PCR方法检测转BT基因水稻

应用PCR技术进行转基因水稻检测研究。本文以转基因水稻为材料，以聚合酶链式反应（PCR）方法为基础，选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术，针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒（CaMV35S）启动子、胭脂碱合成酶（NOS）终止子、和转入苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简写为Bt）基因水稻的CrylAc片段进行PCR检测，建立适合转BT基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。     

转SCK基因大米对小型猪生长发育的影响

为观察和比较转SCK基因大米和亲本大米对机体生长发育的影响,从而评价转SCK基因大米的营养价值,选用15头雄性断乳中国实验用小型猪为试验对象,随机分成3组,分别是正常对照组(NG)、亲本大米对照组(CG)、转基因大米组(GG),饲料根据实验目的配制,共饲养62d。观察3组动物体格发育(体重、体长、体高、胸围)和脏器发育(脏器重、大体病理和组织病理)等方面的差异。结果表明,亲本大米对照组和转基因大米组动物的体格发育均优于正常对照组;3组动物脏器发育差异不明显,大体病理和组织病理均未观察到转SCK基因大米具有明显的非期望效应。说明外源性基因的插入未改变大米的营养价值或产生对动物的不良影响,转SCK基因大米和亲本大米在动物喂养方面基本满足“实质等同性”的要求。     

食品中单核增生性李斯特菌的PCR快速检测研究

为提高食品中单增李斯特菌的检测水平,针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因hlyA、plcB、prfA、iap,设计并筛选出7对引物组成多重-巢式PCR联合检测体系,并结合高灵敏性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,对单增李斯特菌进行快速检测,多重PCR的灵敏度达到1×102CFU ml,巢式PCR的灵敏度达到1×10CFU ml。结果表明该检测体系具有快速可靠、灵敏准确及特异性好的特点,而且有效缩短了检验周期,从传统的7～14d缩短到1～2d。     

食品中副溶血性弧菌PCR快速检测方法的研究

为建立食品中副溶血性弧菌 (VP)的PCR检测方法 ,选取tl基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 14株从国内食品中分离的副溶血性弧菌 (经传统方法验证 )和 30株非副溶血性弧菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测。扩增片段表现出极好的特异性 ,对人工污染的冷冻虾仁、沙丁鱼的检出限为 10CFU g ,且与传统方法结果吻合。该方法适宜于食品中副溶血性弧菌的检测。