西藏松茸多糖的提取及其单糖组成研究

采用正交实验优化西藏松茸多糖提取工艺条件,并应用气相色谱法对松茸多糖的单糖组成进行分析.确定西藏松茸多糖最佳提取条件为:提取时间4 h、提取温度80℃、料水比1:10、醇析浓度85%,此条件下粗多糖得率为8.98%.色谱分析发现,该多糖是由7种单糖组成的杂多糖.     

橙皮多糖组成、理化性质及抗氧化性检测

探索并优化了橙皮多糖的提取工艺条件,检测纯化后橙皮多糖的组成,理化性质及抗氧化性;方法:采用用单因素及正交实验设计探索并优化超声波辅助提取橙皮多糖的工艺条件,粗多糖经氯仿∶正丁醇(5∶1,V∶V)去蛋白、浓缩、乙醇沉淀后冷冻干燥,利用离子色谱技术分析纯化后橙皮多糖的组成,采用常规理化检测方法及体外抗氧化实验检测了纯化后橙皮多糖的理化性质及抗氧化性能力。结果表明离子色谱法测得橙皮多糖由3种单糖组成,分别为鼠李糖、葡萄糖、半乳糖醛酸;理化性质实验结果显示,橙皮多糖溶于水,微溶于体积分数为95%乙醇,不溶于乙醚、丙酮,灰分含量为0.1191%,蛋白质含量为0.15 mg/g抗氧化能力低于抗坏血酸(Vc)和2,6-二叔丁基对甲酚(BHT),橙皮粗多糖抗氧化能力优于精制橙皮多糖。     

柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成

建立PMP(1-苯基3-甲基-5吡唑啉酮)柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成。先用三氟乙酸水解香椿子多糖,再用PMP柱前衍生,KH2PO4-Na OH缓冲液(p H值6.8)-乙腈(81∶19)等度洗脱,HPLC法测定香椿子多糖中单糖组成以及物质的量比。香椿子多糖主要由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D(+)无水葡萄糖、D-(+)-木糖、L-阿拉伯糖等组成,它们的物质的量比约为0.18∶0.15∶0.08∶0.09∶1.03∶0.83∶1.59。本实验摸索的方法条件适用于研究香椿子多糖中单糖组成。     

人参多糖的分离纯化及其单糖组成分析

以人参为原料,研究人参多糖分离纯化方法得到均一多糖,并对其相对分子质量、单糖组成、红外光谱(Infrared,IR)进行分析。利用三氯乙酸法(Trichloroacetic Acid,TCA)除蛋白,再经DEAE-Cellulose-52柱和HW-55F凝胶柱分离纯化获得均一组分PGS1-1。采用凝胶柱层析法测定其相对分子质量,高效液相色谱与蒸发光散射检测器联用及IR研究PGS1-1的单糖组成及基本结构。研究表明三氯乙酸除蛋白最佳工艺条件为料液比1∶2,三氯乙酸(TCA)浓度12%,作用时间60 min,此条件下测得蛋白脱除率与多糖保留率综合得分87.80。分离纯化得到PGS1-1组分,其相对分子质量为2.8×104Da,主要由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖组成,物质的量比为0.34∶0.27∶1.44∶0.42,IR证明PGS1-1具有吡喃型β-糖苷键的多糖特征峰,为人参多糖的分离纯化及单糖组成提供了理论依据。     

超声辅助离子液体提取人参多糖工艺及其抗氧化活性

采用超声辅助离子液体提取人参中的人参多糖，通过单因素实验和正交实验确定了人参多糖的最优提取工艺条件；利用苯酚-硫酸法测定提取的人参多糖中总糖含量；以抗坏血酸为对照组，采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）、羟基自由基（·OH）、2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基（ABTS·）测定提取的人参多糖的抗氧化活性。结果表明，超声辅助离子液体提取人参多糖的最佳工艺为：选择质量浓度为8 g/L的1-己基-3-甲基咪唑溴盐水溶液为提取溶剂，料液比（人参和离子液体水溶液之比）为1:40（g：mL），在80 ℃下超声辅助提取30 min，人参多糖提取量为172.89 mg/g，提取的人参多糖总糖含量（质量分数）为65.9%。采用高效液相色谱法对纯化后的人参多糖的单糖组成进行测定，得到人参多糖的单糖组成为：甘露糖，核糖，半乳糖醛酸，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖，岩藻糖，物质的量比为4.8∶6.43∶10.13∶15.71∶0.5∶4.3∶1.1。人参多糖对DPPH·和·OH以及ABTS·具有一定的清除力，其抗氧化能力随质量浓度增大而增强，但弱于抗坏血酸。     

山药活性成分的提取

对鲜山药中水溶性粗多糖的提取工艺进行了研究.通过单因素实验和L9(34)正交实验,研究了料液比、提取温度、提取时间和乙醇体积分数对粗多糖得率的影响.极差分析及方差分析结果表明,乙醇体积分数和提取温度是影响山药粗多糖提取的主要因素.最佳工艺条件为:料水比1 g∶15 mL,浸提温度100 ℃,浸提时间3 h,乙醇体积分数5%.在此工艺条件下,鲜山药多糖的得率为2.32%.     

八角叶多糖的最佳提取工艺研究

采用水提醇沉法提取八角叶多糖,苯酚-硫酸法测定了八角叶的多糖含量。利用正交设计方法优化得到最佳提取工艺条件为:提取温度75℃、料液比1∶50、提取时间3h、提取次数2次,所得八角叶粗多糖产率达12.87%,粗多糖中多糖总含量为28.22%。     

吉祥草多糖的单糖组成及抗氧化活性分析

优化吉祥草多糖(RCP)提取工艺,探讨RCP的单糖组成和体外抗氧化活性。以吉祥草全草为原料,经烘干、粉碎、脱脂、脱色等前处理,在单因素基础上,利用正交试验优化RCP的提取工艺,采用高效液相色谱仪(HPLC)测定单糖组成,并探讨RCP体外抗氧化活性。RCP提取最佳工艺为料液比1∶40(g∶mL),提取温度100℃,提取时间60 min,提取次数3次,此条件下RCP提取率为17.23%±0.78%。经HPLC分析表明,RCP主要由8种单糖组成,分别是半乳糖醛酸41.90%±0.01%、半乳糖9.14%±0.01%、阿拉伯糖4.20%±0.03%、鼠李糖1.99%±0.02%、葡萄糖1.98%±0.01%、甘露糖1.06%±0.01%、葡萄糖醛酸0.49%±0.01%。体外抗氧化活性分析表明,RCP具有较强的体外抗氧化能力,在1.0 mg/mL质量浓度时,DPPH自由基、羟自由基、O₂^-·自由基、模拟胃液NO₂^-自由基的清除率各为91.49%±2.76%,29.33%±2.09%,42.37%±2.65%...     

红松松子壳多糖的单糖组成及结构初步分析

采用膜分离技术对红松松子壳热水提取物进行分离纯化,经脱蛋白、脱色后得到总多糖PPSPⅠ-b,通过DEAE-52离子交换纤维素柱层析分离得到纯化组分PPSPⅠ-1,采用气相色谱和红外光谱分析了多糖样品的单糖组成及结构特征。气相色谱分析表明:PPSPⅠ-b主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为3.40∶1.40∶0.79∶7.82∶10.67∶18.35;PPSPⅠ-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为0.96∶2.30∶2.97∶10.60∶6.91。红外光谱分析表明,PPSPⅠ-1具有多糖的特征吸收峰。     

柱前衍生化HPLC法分析马卡列丙多糖中单糖的组成

建立了柱前衍生化测定马卡列丙多糖中单糖组成的方法,采用柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化结合高效液相色谱法(HPLC),分析侗药马卡列丙多糖中单糖的组成及摩尔比值。马卡列丙多糖经硫酸水解,PMP衍生化后,采用Thermo Scientific BDS Hypersil C_(18)(250 mm×4. 6 mm,5μm),以0. 5%的磷酸水和乙腈为流动相,在245 nm波长下检测,测得马卡列丙多糖主要由甘露糖,葡萄糖,阿拉伯糖,木糖组成,其摩尔质量比为0. 10∶3. 87∶1. 00∶0. 07。该方法重现性良好,能够快速对多糖样品进行组成分析。     

速生杨半纤维素碱法提取工艺的优化和表征

在 50 ℃ 下,对速生杨木粉原料进行苯-醇预处理,得到脱脂杨木粉。后进行超声波乙醇-碱处理,得到碱脱木质素杨木粉。再运用正交试验设计法研究了抽提温度、抽提时间和NaOH溶液质量分数对速生杨半纤维素得率的影响。结果表明:NaOH溶液质量分数对半纤维素的提取率影响最为显著,而抽提时间的影响最小。最佳抽提条件为:抽提温度 90 ℃、抽提时间 12 h、NaOH溶液质量分数 8 %,在此条件下的半纤维素的提取率为 87.20 %。通过傅里叶红外光谱,核磁共振光谱和组成分析,结果发现,碱法抽提所得半纤维素的主要成分是4-O-甲基葡萄糖醛酸基-木聚糖,木糖和葡萄糖醛酸糖基物质的量之比为22.83∶1,同时含有少量甘露糖、葡萄糖和半乳糖,它们的含量分别为 2.87 %、 0.83 % 和 0.55 %,对应的糖基比为3.46∶1∶0.66, 4-O-甲基葡萄糖醛酸基-木聚糖和葡萄糖基甘露聚糖两种半纤维素分别占 86 % 和 4 %,阿拉伯糖基木聚糖含量较低,另外含有约 4.5 % 木质素组分。     

An Engineered Biocatalyst for the Synthesis of Glycoconjugates: Utilization of β1,3‐N‐Acetyl‐D‐glucosaminyltransferase from Streptococcus agalactiae Type Ia Expressed in Escherichia coli as a Fusion with Maltose‐Binding Protein

A fusion protein composed of β1,3‐N‐acetyl‐D ‐glucosaminyltransferase (β1,3‐GlcNAcT) from Streptococcus agalactiae type Ia and maltose‐binding protein (MBP) was produced in Escherichia coli as a soluble and highly active form. Although this fusion protein (MBP‐β1,3‐GlcNAcT) did not show any sugar‐elongation activity to some simple low‐molecular weight acceptor substrates such as galactose, Galβ(1→4)Glc (lactose), Galβ(1→4)GlcNAc (N‐acetyllactosamine), Galβ(1→4)GlcNAcβ(1→3)Galβ(1→4)Glc (lacto‐N‐tetraose), and Galβ(1→4)GlcβCer (lactosylceramide, LacCer), the multivalent glycopolymer having LacCer‐mimic branches (LacCer mimic polymer, LacCer primer) was found to be an excellent acceptor substrate for the introduction of a β‐GlcNAc residue at the O‐3 position of the non‐reducing galactose moiety by this engineered enzyme. Subsequently, the polymer having GlcNAcβ(1→3)Galβ(1→4)Glc was subjected to further enzymatic modifications by using recombinant β1,4‐D ‐galactosyltransferase (β1,4‐GalT), α2,3‐sialyltransferase (α2,3‐SiaT), α1,3‐L ‐fucosyltransferase (α1,3‐FucT), and ceramide glycanase (CGase) to afford a biologically important ganglioside; Neu5Aα(2→3)Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ(1→3)Galβ(1→4)GlcCerα(IV3Neu5Acα,III3Fucα‐nLc4Cer) in 40% yield (4 steps). Interestingly, it was suggested that MBP‐β1,3‐GlcNAcT could also catalyze a glycosylation reaction of the LacCer mimic polymer with N‐acetyl‐D ‐galactosamine served from UDP‐GalNAc to afford a polymer carrying trisaccharide branches, GalNAcβ(1→3)Galβ(1→4)Glc. The versatility of the MBP‐β1,3‐GlcNAcT in the practical synthesis was preliminarily demonstrated by applying this fusion protein as an immobilized biocatalyst displayed on the amylose resin which is known as a solid support showing potent binding‐affinity with MBP.     

[Bmim]Cl-AlCl3离子液体催化1,2-苯并苊醌的合成

研究了氯代1-甲基-3-丁基咪唑-三氯化铝([Bmim]Cl-AlCl3)离子液体催化蒽与草酰氯的Friedel-Craft酰基化反应。GC/MS分析发现生成了1,2-苯并苊醌(又名1,2-蒽乙二酮),用GC法考察了不同反应条件对1,2-蒽乙二酮收率和选择性的影响。当AlCl3在[Bmim]Cl-AlCl3离子液体中的摩尔分数为0.67,m{[Bmim]Cl-AlCl3}∶m(蒽)=8∶1,n(草酰氯)∶n(蒽)=2∶1,反应温度45℃,反应时间6 h时,1,2-蒽乙二酮收率为88.2%,选择性可达100%。[Bmim]Cl-AlCl3离子液体5次循环使用后,1,2-蒽乙二酮的收率和选择性仍达88.0%和99.6%。经萃取、重结晶等方法得到了w(1,2-蒽乙二酮)=98.3%的产品,通过熔点测定、GC、GC/MS、FTIR和1HNMR对反应产物进行了定性和定量分析。     

离子液体提取皂角刺白桦脂酸衍生物的研究

考察离子液体溴化-1-乙基-3-甲基咪唑([emim]Br)作为提取溶剂对中草药中白桦脂酸衍生物的提取特性,并找到最佳提取条件。以中草药皂角刺为原料,以离子液体溴化-1-乙基-3-甲基咪唑为提取溶剂,选取提取温度、提取时间和液固比3个因素,进行正交试验,考察提取得率,并与乙醇回流提取方式作对比,找到离子液体提取最佳条件。结果表明:乙醇回流提取对目标成分的提取得率为0.050%,离子液体溴化-1-乙基-3-甲基咪唑在不同条件下对目标成分的提取得率为0.079%—0.107%。在室温(25℃)、液固比30∶1、提取时间2 h的条件下离子液体对目标成分的提取得率为0.105%。离子液体溴化-1-乙基-3-甲基咪唑对中草药皂角刺中白桦脂酸衍生物的提取得率明显高于乙醇回流提取方式的提取得率,最佳提取条件为室温(25℃)、液固比30∶1,提取时间2h。     

Capture of Uropathogenic E. coli by Using Synthetic Glycan Ligands Specific for the Pap‐Pilus

Biotinylated mono‐ and biantennary di‐/trisaccharides were synthesized to evaluate their ability to capture E. coli strains that express pilus types with different receptor specificities. The synthesized biotinylated di‐/trisaccharides contain Galα(1→4)Gal, Galα(1→4)GalNHAc, GalNHAcα(1→4)Gal, Galα(1→4)Galβ(1→4)Glc and GalNHAcα(1→4)Galβ(1→4)Glc as carbohydrate epitopes. These biotinylated oligosaccharides were immobilized on streptavidin‐coated magnetic beads, and incubated with different strains of live E. coli. Capturing ability was assessed by using a luciferase assay that detects bacterial ATP. The trisaccharides containing Galα(1→4)Galβ(1→4)Glc and the disaccharides containing Galα(1→4)Gal as the epitopes exhibited strong capturing ability for uropathogenic E. coli strains with the pap pilus genotype, including CFT073, J96 and J96 pilE. The same ligands failed to capture E. coli strains with fim, prs, or foc genotypes. Uropathogenic CFT073 was also captured moderately by biantennary disaccharides containing a GalNHAc moiety at the reducing end; however, other saccharides containing GalNHAc at the nonreducing end did not capture the CFT073 strain. These synthetic glycoconjugates could potentially be adapted as rapid diagnostic agents to differentiate between different E. coli pathovars.     

马尾松松针儿茶素提取工艺研究

采用乙醇回流法提取马尾松松针儿茶素,考察了乙醇浓度、提取温度、液料比对儿茶素得率的影响。结果显示,最优工艺条件为:乙醇浓度为60%,提取温度为60℃,料液比为1∶10(g∶mL),儿茶素得率为0.038%。     

对羟基苯甲酸乙酯印迹聚合物固相微萃取制备及条件优化

采用分子印迹技术,以对羟基苯甲酸乙酯(模板分子):α-甲基丙烯酸(功能单体):乙二醇二甲基丙烯酸酯(交联剂)摩尔比为1∶4∶20,反应温度为80℃,反应时间为15h,本体聚合的方法合成印迹聚合物。利用微量进样器和玻璃毛细管自制分子印迹固相微萃取装置。将自制固相微萃取与气相色谱联用,并对萃取头的萃取条件如萃取温度、萃取时间、解析时间、溶液离子强度等进行优化。通过选择性吸附实验测得,分子印迹固相微萃取对对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯的萃取量分别为103.54、134.26和114.68μg,均大于非分子印迹固相微萃取的萃取量47.88、49.24和41.41μg,印迹萃取头表现出了良好的吸附性和选择性。     

荔枝核黄酮类化合物的提取工艺研究

采用回流、热浸提、微波提取等工艺提取荔枝核黄酮类化合物,采用正交实验考察了提取溶剂浓度、提取时间、微波功率、提取温度、料液比等因素对提取率的影响,优选出不同工艺的提取条件。回流提取工艺的优化条件是:50%乙醇溶液,提取温度80℃,提取时间1h,料液比1∶10,提取3次,总黄酮得率为6.76%。热浸提工艺的优化条件是:50%乙醇溶液,提取温度70℃,提取时间1.5h,料液比1∶12,提取2次,总黄酮得率达到6.37%。微波提取工艺的优化条件是:60%乙醇溶液,微波功率700W,提取时间2.5h,料液比1∶25,总黄酮得率达到6.86%。     

苹果渣中苹果多酚的提取工艺优化

采用有机溶剂提取法从苹果渣中提取苹果多酚,研究了提取溶剂乙醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间对苹果多酚提取量的影响。通过单因素实验及正交实验确定苹果多酚的最佳提取工艺条件为:提取溶剂乙醇体积分数70%、料液比1∶25(g∶mL)、提取温度30℃、提取时间40min,此条件下苹果多酚的提取量为2.982mg.g-1。     

气相色谱法测定羟丙基-β-环糊精平均取代度

以甲苯为内标物,碘丙烷为对照品,建立了一种利用气相色谱法测定羟丙基-β-环糊精平均取代度的新方法。色谱柱为HP-5固定相(30 m×0.251 mm,膜厚0.25μm),检测器为氢火焰离子化检测器(FID),柱温100℃,进样器温度200℃,检测器温度250℃,载气N2,流速1.0 mL/min,分流比1∶80,方法重复性好,RSD=0.9%,精密度高,RSD=2.8%,测定结果与核磁共振法结果基本一致。