烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以鄂烟1号无菌苗的叶为材料进行愈伤组织的诱导,筛选出生长培养基的最佳激素配比,初步建立了烟草细胞悬浮培养体系。结果表明,愈伤组织诱导的最优基本培养基为MS培养基,以MS NAA1.0mg/L 6-BA0.5mg/L为最佳配方;愈伤组织最佳生长培养基为MS 2,4-D0.1mg/L NAA1.5mg/L 6-BA0.3mg/L,愈伤组织培养第6天进入对数生长期,第14天干重增至最初干重的12.536倍,并以此配方建立了烟草细胞悬浮培养体系。     

激素对烟草愈伤组织分化影响的研究

以烟草(Nicotiana tabacum)愈伤组织为材料,研究了不同激素配比及浓度对愈伤组织绿苗分化率、绿苗产量/玻璃苗产量(G/V)等分化指标的影响。试验结果表明:在 MS+IAA0.2mg/L+KT1mg/L 培养基上,可获得较高的绿苗分化率;在含IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L 的 MS 培养基上,可获得较高的 G/V 值;当愈伤组织先在附加 IAA 和 KT 的培养基上培养20天,再转至附加 IAA+6-BA 的培养基上培养时,则既可得到较高的绿苗分化率,又可提高 G/V 值。     

活性炭和不同碳源对烟草苯乙酸一步成苗培养的影响

通过将生长素苯乙酸(PAA)应用于烟草单倍体植株叶脉组织培养,研究了活性炭和不同碳源在烟草单倍体植株叶脉组织苯乙酸(PAA)一步成苗培养中的作用及机理。结果表明,麦芽糖并不是促使PAA一步成苗培养成功的唯一碳源,葡萄糖具有同麦芽糖相同的功效。添加活性炭后,蔗糖也可促进PAA一步成苗的发生,主要机理是活性炭吸附了培养基中的5-羟甲基糠醛而促使PAA一步成苗的发生。果糖(或蔗糖分解出果糖)不是一步成苗的直接抑制因子,只是在高温高压灭菌时易分解成5-羟甲基糠醛的前体物质,一定浓度的5-羟甲基糠醛是PAA一步成苗的直接抑制因子。试验还表明,PAA对一步成苗的促进效应与碳源的种类和活性炭的添加与否有关。     

丹参组织培养技术的初步研究

目的建立丹参的无性繁殖体系培养条件。方法选用丹参植株的幼嫩芽,比较不同灭菌试剂种类、不同灭菌时间、生长调节剂比例等条件对丹参组培快繁的影响。结果用2%次氯酸钠处理7.5 min灭菌效果最好;MS+6-BA(1.0 mg/L)+2,4-D(0.5 mg/L)是丹参最适宜的愈伤组织诱导和继代培养基;MS+6-BA(1.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L)为最适宜的芽诱导培养基;MS+IAA(0.2 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)为最适宜的丹参试管苗生根培养基。结论建立了丹参无性繁殖体系培养的最适条件。     

云烟87烤烟品种突变株的离体快繁技术研究

以云烟87烤烟品种突变巨型株的休眠芽为试材,对其进行了打破休眠促使萌芽、愈伤组织诱导、丛生芽增殖和生根培养的研究。结果表明:打破休眠促使其萌芽的最佳培养基配方为MS+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA;诱导产生愈伤组织效果最佳的培养基配方为MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;丛生芽增殖效果最佳的培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+0.6mg/L NAA对根系的生长最为有利。      

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累

以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤(6-BA)及萘乙酸(NAA)不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。     

祈州漏芦的组织培养与快繁技术研究

目的：对祁州漏芦愈伤组织诱导培养基和生长的培养条件进行研究,构建祁州漏芦快速繁殖体系。方法：通过筛选外植体,添加不同种类及浓度的生长调节剂对祁州漏芦进行愈伤组织诱导、芽增殖培养及生根培养。结果：诱导愈伤组织适宜培养基：MS＋0.3mg/L NAA＋3.0mg/L 6-BA;芽增殖培养以MS＋0.3mg/L NAA＋5.0mg/L 6-BA为宜;生根培养以1/2MS＋0.1mg/L NAA为佳。结论：利用组织培养技术能够实现祁州漏芦快速繁殖。     

外源激素对紫苏愈伤组织诱导及迷迭香酸积累的影响

以紫苏叶片为外植体,通过向B5培养基中添加不同浓度的激素组合,进行正交实验,研究其对紫苏叶片愈伤组织诱导率的影响。结果表明,在B5培养基中,添加2,4-D1.0 mg/L+KT0.4 mg/L+6-BA1.0 mg/L+NAA1.5mg/L时,愈伤组织诱导率最高。通过高效液相色谱法测定,紫苏叶片中迷迭香酸含量为0.25%,而在最佳培养基中培养40 d的愈伤组织中的含量为3.85%,有了显著的提高。研究为紫苏迷迭香酸高产细胞系的建立提供了理论依据。     

杜仲疏松愈伤组织诱导条件的优化筛选

杜仲愈伤组织生长过于致密从而导致难以实现悬浮培养,因此获得疏松、生长快速愈伤组织是实现杜仲细胞悬浮培养的前提.本文研究了不同外植体、激素和培养基对杜仲愈伤组织诱导率、疏松程度以及褐化率的影响,结果表明：上胚轴和子叶更容易被诱导为疏松愈伤组织,MS培养基是最适诱导培养基;适当增加6-BA浓度有助于褐化的减轻且提高愈伤组织疏松程度,杜仲疏松愈伤组织诱导最适激素配比为1.0mg/L 2,4-D＋1.0mg/L NAA＋1.0mg/L 6-BA.     

拳参愈伤组织的诱导及增殖效应的研究

目的研究适宜拳参愈伤细胞的诱导、组织分化及快速生长的培养基成分。方法以拳参的幼嫩叶柄为外植体,接种于附加2,4-D、N A A、6-B A、K T及其组合的M S培养基上,观察拳参愈伤组织的诱导、分化及愈伤细胞的生长状态。结果MS 0.4 mg/L 6-BA 2.0 mg/L NAA对拳参愈伤组织的诱导效果最好。MS 0.2 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D增殖培养的愈伤组织较适合于器官的分化,MS 0.2 mg/L 6-BA 4.0 mg/L NAA增殖培养的愈伤组织较适合于做细胞悬浮培养的材料。结论建立拳参愈伤组织诱导,愈伤组织分化和愈伤细胞快速增殖体系,为进一步研究药用植物拳参细胞的分子机制及次生代谢等提供资料。     

甘蔗新品种桂糖48号的组织培养技术研究

甘蔗组织培养技术是加速繁殖新品种和加快新品种大面积推广的主要手段,不同品种的离体培养中其培养基中激素配比存在差异,因此筛选合适培养基是提高品种快繁效率的关键。本文以桂糖48号为材料,以MS基本培养基加外源激素浓度梯度进行试验处理设计,对品种的愈伤组织诱导、愈伤分化、试管苗增殖和生根阶段进行培养基筛选试验,以其筛选出最合适桂糖48号的培养基配方。试验结果表明:诱导愈伤组织培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L;愈伤组织分化培养基为MS+BA 1.0 mg/L;初代增殖培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.5 g/L;继代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 12 mg/L。在该培养基下,生根最好,苗绿,比较高,长势好,对加快甘蔗新品种桂糖48号在广西大面积推广起到积极的作用。     

大花金挖耳细胞悬浮系的建立及黄酮类化合物的产生

研究不同培养基、蔗糖质量浓度、pH 值、接种量、NAA、6-BA、VB1 及培养时间对大花金挖耳细胞生长和黄酮类化合物合成的影响。结果表明：NT 液体培养基在pH5.5、蔗糖质量浓度40g/L、接种量40g/L 鲜质量细胞、NAA 1.0mg/L+6-BA 0.2mg/L 时有利于细胞的生长和黄酮类化合物合成,向NT 培养基中添加1.0～4.0mg/LVB1 有抑制细胞褐化的作用,大花金挖耳悬浮细胞的生长及黄酮类化合物合成随培养时间的延长,表现出先升高后降低的趋势,在接种15～21d 后,细胞生物量可达23.54～24.51g/L,黄酮类化合物得率为1.19%～1.23%。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸条件研究

通过诱导紫苏下胚轴和子叶外植体产生愈伤组织,建立细胞悬浮培养体系,以提高细胞产量及细胞中迷迭香酸含量。结果表明,在MS液体培养上添加3.0mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)＋0.3mg/L萘乙酸(NAA)培养基上,下胚轴愈伤组织呈嫩黄色松散状态,出愈时间短,出愈率可达100%。紫苏细胞悬浮培养产生迷迭香酸的最佳条件为培养时间7d、接种量鲜质量浓度20g/L、摇床转速110r/min、蔗糖30g/L、L-苯丙氨酸0.15g/L,此条件下可获得高达2.283mg/g的迷迭香酸。