富硒乳酸菌的筛选及其富硒能力的初步研究

从黄水中筛选到一株富硒乳酸菌，经鉴定为布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）。通过亚硒酸钠抗性筛选和MRS液体培养基发酵培养，初步确定其富硒条件为：接种量10％（v／v），亚硒酸钠添加量46μg／mL，pH6．2，37℃，培养36h，富硒能力为56．52％。     

富硒乳酸菌发酵条件的研究

通过单因素试验和L27(313)正交试验,确定了乳酸菌富硒的最佳发酵条件.正交试验结果表明,影响乳酸菌总硒量的主要因素是培养温度、接种量、亚硒酸钠浓度和培养温度与接种量的一次交互作用.最佳发酵条件为培养基初始pH为6.6,亚硒酸钠浓度为18 μg/mL,装液量为150 mL/250 mL三角瓶,接种量5.5%,培养温度 42 ℃,培养时间45.5 h.在此优化条件下,富硒乳酸菌生物量可达6.85 g/L,细胞硒含量达1100 μg/g,硒总含量可达7536 μg/L,细胞硒含量的92.15%为有机硒.     

富硒酵母的选育及其发酵条件的优化试验

通过对一株耐硒酵母进行UV和60Co逐级诱变,获得一株产量高的突变株Y7,发酵液的硒总含量达19mg/L,是出发菌株的1.58倍,经多次传代试验,证明其稳定性良好。通过单因素、L16(37)正交试验对其发酵培养基和培养条件进行优化,试验表明富硒酵母发酵培养基的最佳配方是:蔗糖6%,牛肉膏1%,蛋白胨1%,K2HPO4 0.15%,亚硒酸钠35μg/L;最佳培养条件:初始pH为4.0,温度32℃,装液量60mL/250mL摇瓶,转速200r/min,10%(v/v)接种量,培养48h。富硒酵母的硒总含量达23mg/L以上,是出发菌株的1.92倍。     

富硒乳酸菌的筛选和体外活性的研究

为筛选富硒乳酸菌,利用其将无机硒转化为有机硒,用于开发富硒产品,实验以现存的15株乳酸菌为实验材料,将质量浓度为20 μg/mL的硒加入MRS培养基中,检测菌体OD值筛选富硒菌;通过测定生长曲线和检测培养基中硒含量不同时的菌体密度来确定富硒菌合适的加硒时间和富硒浓度;使用3, 3’-二氨基联苯胺（3, 3’-DAB）比色法测定菌株富硒量;通过检测菌体抗氧化活性和耐胆盐、耐人工胃液的能力来评估富硒乳酸菌的体外活性以及在人体肠道内的生存能力。结果表明,从15株菌中筛出9株富硒菌,适宜的加硒时间为2 h,加硒浓度为40 μg/mL,硒转化率最高的菌株是JX5,高达81.80%。9株菌富硒之后对自由基DPPH和ABTS的清除效果和耐胆盐和人工胃液的能力均呈现升高趋势,其中,菌株JX5在富硒之后对自由基DPPH和ABTS的清除率和耐胆盐和人工胃液的能力均显著升高,说明乳酸菌将无机硒转化为有机硒之后可提高菌体的体外活性。     

富硒乳酸菌的筛选及鉴定

对5 种15 株乳酸菌的生长曲线进行了测定,并对亚硒酸钠添加质量浓度、耐硒和富硒能力进行比较,筛选出了富硒优势乳酸菌,并进行了生理生化和分子鉴定。结果表明：适宜的加硒时间为培养后的第6小时,培养时间为24 h。通过对9 株菌株比较,确定了较适宜的亚硒酸钠添加质量浓度为6 μg/mL。最终筛选出BC-25为富硒优势菌株,富硒量425.79 μg/g,硒转化率达27.00%,经16S rDNA分析鉴定其为植物乳杆菌（Lactobacillus plantaru）。     

乳酸菌BN1005富硒发酵条件优化

该试验采用单因素试验和响应面试验优化了乳酸菌BN1005富硒发酵条件。结果表明,乳酸菌BN1005富硒的最优培养基组成为葡萄糖39.0 g/L,复合有机氮源15.0 g/L,柠檬酸三铵1.5 g/L,吐温-80 1.08 g/L,K2HPO4 2.0 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L,MnSO4·4H2O 0.05 g/L,CaCO3 15.0 g/L,NaCl 3.0 g/L;培养条件为接种量10%,装液量60 mL/250 mL,恒温37 ℃、100 r/min振荡培养36 h,亚硒酸钠5.0 mg/L,亚硒酸钠添加时间8 h。在此优化条件下,乳酸菌BN1005富硒率从7.22%提高至53.81%;富硒量由305.9 μg/g提升至607.52 μg/g。     

发酵香肠益生型乳酸菌发酵剂的筛选

从主要自然发酵肉制品中分离、纯化得到77株耐酸耐胆汁的乳酸菌,并进一步对分离菌株进行了耐高酸(pH2.5)、0.3%胆盐的生长实验.25株在pH值2.5,培养3 h后表现出较高存活性,21株经低酸预处理后在0.3%胆盐存在的情况下生长良好.最后运用API 50CHL对筛选菌株进行了鉴定.这些菌株可作为进一步筛选发酵香肠优良乳酸菌种的出发菌株,以便筛选品质优良的益生性乳酸菌,作为新型发酵香肠发酵剂.     

富硒冬虫夏草发酵工艺优化

采用冬虫夏草作为富硒的载体,啤酒糟为基质,进行富硒冬虫夏草液态深层发酵试验,研究冬虫夏草对无机硒的生物转化能力.利用正交试验设计,对富硒冬虫夏草液态深层发酵条件如摇床转速、接种量、pH等进行了优化.结果表明,冬虫夏草能在含有低质量浓度亚硒酸钠（10～25mg/L）的培养基中生长,并在菌丝体内富集硒,最佳发酵工艺为摇床频率180r/min、培养10d的条件下,装液量50mL/250mL,pH值为7.0,接种量15％,温度20℃,亚硒酸钠质量浓度25 mg/L,啤酒糟质量浓度20 mg/L.在此优化的发酵条件下,富硒冬虫夏草菌丝体总富硒量为5808.20 μg/L.     

常压室温等离子体诱变选育富硒纳豆芽孢杆菌

纳豆芽孢杆菌可以转化亚硒酸钠为有机硒。对一株纳豆芽孢杆菌的生长曲线进行测定,确定了亚硒酸钠适宜的添加时间和添加量。以纳豆芽孢杆菌BSN424为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,根据耐硒和富硒能力筛选,经连续传代培养后筛选出了富硒纳豆芽孢杆菌。结果表明,适宜加硒时间为培养后3 h,培养时间为24 h,培养基适宜硒质量浓度为6μg/mL,常压室温等离子体诱变系统功率为100 W,诱变时间为25 s。诱变后筛选得到一株具有较高富硒能力的诱变菌株BN-44,经摇瓶发酵后的富硒量为1136.43μg/g,相比出发菌株的742.12μg/g提高了53.13%。研究表明常压室温等离子体诱变育种能有效地对纳豆芽孢杆菌BSN424进行诱变,旨在为有机硒生物转化法中寻找益生菌富硒载体及其诱变育种提供一定依据。     

不同红曲菌菌株耐硒能力和富硒能力的初步研究

为比较不同红曲菌菌株的耐硒能力和富硒能力，以5株红曲菌菌株为研究对象，通过接种于亚硒酸钠浓度为0、10、20、50、100、200μg/mL的PDA培养基中培养，测量其生长曲线和菌丝体中硒含量和总硒产量。结果显示：不同亚硒酸钠浓度对红曲菌菌株生长的影响与硒的富集均存在差异，其中耐硒能力最强的菌株为紫色红曲菌CICC 5046，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板上培养15 d后菌落直径可达(53.8±1.5)mm；富硒能力最强的菌株为红色红曲菌M7，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板(25 mL培养基)上培养15 d后总硒产量达到最高，为(124.43±2.01)μg；而当PDA培养基中亚硒酸钠浓度为200μg/mL时，红色红曲菌M7菌丝体中的硒含量达到最高，为(3120.59±193.63)μg/g。因此，不同红曲菌对亚硒酸钠的耐受能力和富集能力均不同，这种差异性可能与菌株的基因型或其抗氧化能力有关。     

富硒益生菌的筛选及其富硒条件的优化

为了获得能耐受较高亚硒酸钠质量浓度和具有富硒能力的益生菌菌株,对7株酵母菌和12株乳酸菌进行了筛选。结果表明,所有菌株均能在亚硒酸钠质量浓度为20~80μg/m L的平板上生长,乳酸菌YQRS菌株和酵母菌FJYJM3菌株具有较高的耐受性和富硒能力。对它们进行发酵条件的优化,表明YQRS菌株在亚硒酸钠添加量为15μg/m L、添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最好,菌体生物量为2.66 g/L,总硒含量能达到2 300.26μg/L。而FJYJM3菌株在亚硒酸钠添加量为20μg/m L,添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最显著,生物量能达到4.86 g/L,总硒含量能达到5 790.99μg/L。     

耐盐乳酸菌的筛选及其诱变育种与耐受性研究

为缓解红酸汤工业化生产中主要原料辣椒脱盐工序带来的营养风味流失及水污染问题,从传统发酵辣椒制品中筛选出1株耐盐乳酸菌L-14,经鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),在80 g/L NaCl条件下培养24 h活菌数达(8.20±0.118) lg CFU/mL,产酸量为(7.770±0.033) g/L。对其进行二轮紫外诱变以提高其耐盐产酸性,并比较突变菌株与原始菌株在耐酸、耐胆盐、耐人工模拟胃肠液、耐盐(NaCl)等耐受能力,得到1株突变菌株L14U2-3,在80 g/L NaCl条件下培养24 h产酸量为(8.989±0.095) g/L,较原始菌株提高15.69%,且连续传代10代产酸量无显著差异。突变菌株L14U2-3较原始菌株L-14,在pH 2.0时培养3 h存活率提高4.09%;在3 g/L胆盐下处理24 h活菌数提高5.32%;经胃肠液处理后,2株菌活菌数分别为(6.73±0.10)、(6.68±0.11) lg CFU/mL,无区别;在80 g/L NaCl下培养24 h菌株L14U2-3的活菌数为(8.89±0.003) lg CFU/...     

4株乳酸菌对模拟胃肠环境的耐受性及生长特性研究

对4株来源于自然发酵肉制品中的乳酸菌进行耐酸耐胆盐性能的测定,选取在pH3.0和含0.3 g/100 mL胆盐的MRS培养基中存活率均超过50%的2株菌（M12、M23）,进一步研究其在模拟胃肠液中的耐受性及MRS培养基中的生长特性。结果表明,这2株乳酸菌对人工模拟胃肠道环境有较好的耐受性,经过人工模拟胃液处理2 h后,存活率均＞50%,经人工模拟肠液处理10 h后仍可存活;这2株菌具有较强的增殖及产酸能力,24 h内均已进入稳定生长期,随着菌体数目的增加,培养基pH值快速降低,在肉制品的发酵温度范围内均能较好地生长。因此,这2株菌可作为潜在的益生菌菌株应用于肉制品的发酵。     

乳酸菌富硒能力及其体外生物活性评估

从13株乳酸菌中筛选出耐硒较好的菌株,对其富硒能力及生物活性进行研究。通过测定OD值及菌体显色观察,确定菌株的最适耐硒质量浓度;通过3,3’-二氨基联苯胺(3,3’-DAB)比色法测定菌株富硒量;对富硒菌株在抗氧化活性、胆盐耐受以及体外抗菌活性的变化进行探究;通过电镜扫描结合EDX能谱分析,观察富硒乳酸菌细胞表面结构,分析其化学成分。试验结果表明:13株中有8株菌具有较好的耐硒能力;WY1,WY2适宜的富硒质量浓度为60μg/mL,WY5,WY8,WY9,WY10,WY12富硒质量浓度为80μg/mL,WY3富硒质量浓度为100μg/mL;WY12的富硒率最高,为79.19%±3.01%;其它依次为WY3(78.72%±1.07%)、WY10(73.42%±1.61%)、WY9(67.65%±3.24%)、WY1(64.27%±3.31%)、WY8(61.49%±4.49%)、WY2(56.29%±3.01%)和WY5(34.98%±1.46%);富硒菌在1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)自由基清除率以及还原力上均有显著提高,胆盐耐受力也有所增强;此外,富硒菌株对于大肠杆菌以及鼠伤寒沙门氏菌具有较强的抑制作用。电镜扫描结合EDX分析证实,富硒菌菌体表面吸附有纳米硒微粒。结论:乳酸菌能够富集并转化无机硒,且富硒菌株体外生物活性有一定提高。     

氮离子注入蛹虫草选育高效富硒菌株的研究

为了更好地开发蛹虫草资源,对蛹虫草菌株富集微量元素硒的培养条件进行了优化,选择最佳参数的低能离子束注入蛹虫草,通过石墨炉原子吸收光谱法检测注入前后菌丝体中硒元素的含量。结果表明：蛹虫草发酵富硒的最优培养条件为蛋白胨质量浓度3 g/100 mL、葡萄糖质量浓度3 g/100 mL、亚硒酸钠质量浓度为8 μg/mL、pH值为7,此时,富硒率为21.58%。离子束最佳注入参数为：注入离子为N+,注入能量10 keV,注入剂量1.82×1015 ions/cm2,选育出富集微量元素硒较高的10 株菌株,最高富硒率为30.97%,比出发菌株提高了近42%。     

优良乳酸菌的筛选及其耐药性研究

从传统发酵食品分离的乳酸菌中筛选出发酵特性较好,耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其耐药性。结果表明,60株乳酸菌中有28株乳酸菌的凝乳时间在10h-24h之间,p H在3.85-4.78,产酸速率中等;其中有10株乳酸菌在p H3.0和0.3%胆盐的环境中培养3h的OD值均分别大于0.61和0.42,并显著高于其他菌株(P0.05);对阿莫西林、头孢唑啉均为敏感,对阿米卡星、卡那霉素均为耐药。菌株A59、A14的凝乳特性较好,耐酸耐胆盐能力较强,对抗生素较为敏感。     

富硒乳酸菌筛选及其富硒工艺初探

首先对含有嗜酸乳杆菌(La),保加利亚乳杆菌(Lb),嗜热链球菌(St)的分离样品进行分离,纯化,筛选出纯菌种,然后分别进行富硒试验,通过抗性筛选和三角瓶发酵培养获得富硒能力优良的菌株和富硒条件。试验结果表明,嗜酸乳杆菌(La)富硒能力最强,其富硒条件初步确定为:选用番茄汁液体培养基,亚硒酸钠添加量为18μg/mL,pH6.6,37℃,培养24h,富硒能力为62.22%。     

鸡腿菇菌丝深层培养富硒的研究

通过正交试验,从4株鸡腿菇菌株中筛选出1株具有较高生物量和较强富硒能力的鸡腿菇菌株CcⅢ,并探讨了其耐硒和富硒特性。结果表明,CcⅢ菌株具有一定的耐硒能力和很强的富硒能力,其固态培养最大耐硒浓度为10μg/mL,液态培养最大耐硒浓度为4μg/mL。在硒浓度2μg/mL时,菌丝体生物量为4.11 g/L,富硒量246.74μg/g,富硒率为50.57%,有机化程度高达92.95%。     

富硒短小芽孢杆菌D1-019的筛选与鉴定

将无机硒耐受性筛选和“红硒法”筛选相结合,经过4 轮筛选,从前期分离的119 株来源于鸭食的菌株中,筛选到1 株富硒菌株D1-019。基于菌落形态观察、革兰氏染色、16S rDNA序列分析和系统发育树分析,D1-019菌株被鉴定为益生菌短小芽孢杆菌。采用正交试验设计方法,获得的最佳富硒条件为培养基初始pH 5,30 ℃培养48 h,培养6 h时加入质量浓度为20 μg/mL的亚硒酸钠。在该富硒条件下,短小芽孢杆菌D1-019对培养基中亚硒酸钠的转化率为100%,菌体有机硒含量为（1 327±113）mg/kg,优于已报道富硒微生物。结果表明,短小芽孢杆菌D1-019有潜力开发成为一个可应用于食品领域的新富硒益生菌源。     

发酵黑木耳酱菜益生乳酸菌菌株的筛选

以从四川泡菜母液中自行分离筛选的8株乳酸菌株为试验菌株,通过考察菌种生长速度,耐胃酸、耐胆盐、耐食盐性能,对辣椒、大蒜、生姜、花椒浸提液耐受能力,以及发酵木耳性能等指标,研究得到生长速度快,耐受人体胃肠道极端环境,在高浓度香辛料条件下正常生长,发酵木耳性能较好的4株乳酸菌株。以Z3、Z4、Z8、Z11作为木耳酱菜发酵的备选菌株,活化培养48 h后酸度值分别为1.6×10-2°T,1.85×10-2°T,2.0×10-2°T和2.1×10-2°T;4株备选菌株在pH1.5,0.3%牛胆盐、8%NaCl等模拟人体胃肠道和实际生产极端环境中耐受性良好;4株备选菌株在15%鲜姜、15%鲜蒜、6%辣椒、3%花椒等高浓度香辛料环境中生长良好;在木耳酱菜发酵过程中,木耳粒度越大越有利于乳酸菌发酵,4株备选菌株在30℃条件下静置发酵整片状木耳4 d,发酵液pH值分别达3.35,3.22,3.28和3.45。本试验结果为进一步开发黑木耳酱菜产品提供理论依据。