利用造纸污泥产纤维素酶及产酶条件的优化

以预处理后的造纸污泥为研究对象,检测污泥的组分,利用预处理后造纸污泥,培养里氏木霉生产纤维素酶。研究了碳源浓度、通气量、pH值、摇床转速、温度对里氏木霉产酶的影响,优化产酶条件。结果表明,里氏木霉在优化后的产酶条件下,即碳源浓度40g/L、通气量120L/天、pH值4~6、摇床转速180 r/min、第一天30℃、第二天开始28℃培养时间7天,发酵培养所得粗酶液中纤维素酶和木聚糖酶酶活较优化前的有明显的提高。优化后的滤纸酶活、羧甲基纤维素酶酶活、木聚糖酶酶活分别为87.53U/m L、121.66U/m L、202.45U/m L。     

里氏木霉产纤维素酶的条件优化及酶学性质研究

本文对里氏木霉产纤维素酶发酵培养条件及对其所产纤维素酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,里氏木霉发酵产酶的最佳培养基为:麦麸1.8%、硝酸钠1.3%、碳酸钙0.3%、氯化钠0.2%、磷酸二氢钾0.3%;里氏木霉所产纤维素酶的最适反应条件为:pH 4.0、50℃,金属离子Fe2+、Co2+、Mn2+、Ca2+对酶活有促进作用,而Fe3+、Ag+对酶有抑制作用。经培养基优化后,发酵液上清中的最终酶活为116.64U/mL,是优化前的3.5倍。     

粗壮脉纹胞菌复合多菌种发酵茶粕产纤维素酶的研究

用粗壮脉纹胞菌分别复合东方伊莎酵母、里氏木霉、绿色木霉、乳酸杆菌固态发酵已去除茶皂素的茶粕,通过测定发酵产物中3种纤维素酶：外切葡聚糖酶（C1）、内切葡聚糖酶（Cx）、β-葡萄糖苷酶（β-G）及总酶滤纸酶（filter paper activity,FPA）的酶活力来探讨其分解粗纤维素的协同作用。粗壮脉纹胞菌和绿色木霉混合发酵产生的C1酶酶活力较粗壮脉纹胞菌单菌发酵提高了51.09%,粗壮脉纹胞菌和绿色木霉复合发酵较单菌发酵延长了其纤维素酶分泌的周期,96 h时FPA酶活力达到2.782 U/g;粗壮脉纹胞菌复合里氏木霉、绿色木霉混合发酵组在发酵10 d后对茶粕粗纤维的最终降解率分别达到了64.19%和61.59%;接种量对单菌和混合菌发酵产纤维素酶影响总体趋势是随着接种量增加酶活力提高,但粗壮脉纹胞菌单菌发酵纤维素酶酶活力在接种量超过9 mL/100 g后开始下降。表明粗壮脉纹胞菌复合里氏木霉、绿色木霉混合发酵降解纤维素具有协同作用。     

内切葡聚糖酶基因cel7b 在里氏木霉中的同源表达

用里氏木霉（Trichoderma reesei ）作为宿主同源表达内切葡聚糖酶基因。运用聚合酶链反应（PCR）技术从里氏木霉cDNA中扩增得到内切葡聚糖酶基因cel7b序列,并将其连接到载体p18-m2上构建重组质粒,将重组质粒转化到里氏木霉菌株中,通过筛选获得表达内切葡聚糖酶的重组里氏木霉工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测显示,发酵液中重组内切葡聚糖酶的分子质量约48 ku。摇瓶发酵结果显示,内切葡聚糖酶在重组里氏木霉中得到分泌表达,发酵液中的内切葡聚糖酶和滤纸酶活分别达到了726 U/mL和28.7 U/mL,分别为出发菌株酶活的2.9倍和1.1倍。玉米芯进行糖化试验结果显示,重组里氏木霉所产酶液糖化玉米芯的酶解得率为81.4%,比出发菌株提高了6.3%。     

一株侧耳木霉的鉴定及其产木聚糖酶研究

以分离自平菇栽培污染菌包的一株菌株ZJ-03为研究对象,采用形态学观察和分子生物学相结合的方法对其进行鉴定,并对其定性、产木聚糖酶活力和木聚糖酶生产低聚木糖进行了研究。结果发现,菌株ZJ-03的形态与侧耳木霉(Trichoderma pleuroticola)形态相似,系统进化树分析发现ZJ-03与T.pleuroticola ICMP:2080亲缘关系较近,聚为一类,将该菌株归属为侧耳木霉。菌株ZJ-03可产木聚糖酶,活性在3000 IU/g以上;木聚糖酶可产低聚木糖,占总糖含量72.0%。该结果可为进一步研究侧耳木霉产木聚糖酶用于生产低聚木糖的可行性奠定基础。     

黑曲霉液体深层发酵产纤维二糖酶的研究

纤维二糖酶（cellobiase）是纤维素酶系中的重要组分之一,目前由里氏木霉（Trichoderma reesei）生产的纤维素酶制剂中纤维二糖酶的活力明显偏低,限制了纤维素的糖化效率。本文采用一个黑曲霉菌株（Aspergillus niger ZU-04）,在液态发酵条件下生产纤维二糖酶,对主要的发酵工艺参数进行了研究,结果表明,培养基中添加1.0%的麸皮对纤维二糖酶的形成有明显的促进作用;葡萄糖、玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%、0.3%;变温培养缩短了产酶周期,培养4d,酶活力达到最高,为6.23IU/mL。采用黑曲霉纤维二糖酶与里氏木霉纤维素酶协同水解酸预处理后的玉米芯,当纤维素酶用量为20IU/g底物时,纤维二糖酶活力和滤纸酶活力比例为0.43,2d酶解得率达到91.1%。     

以豆渣为基质高产纤维素酶菌株的选育

以豆渣为培养基,通过对里氏木霉Rut C-30进行紫外诱变,经水解圈法初筛和摇瓶发酵复筛,选育出适合在豆渣中生长,并且产纤维素酶和半纤维素酶活力较高的菌株LX0121。菌株产纤维素酶（FPA）和半纤维素酶活力的变化规律基本一致,在28℃摇床培养4d达到酶活高峰期,酶活分别为5.87U/mL和125.6U/mL。      

真菌融合子R201纤维素酶的纯化及性质研究

采用两株真菌康宁木霉3.2774和白腐真菌5.776融合产生的融合菌株R201对秸秆进行液态发酵,发酵粗酶液经硫酸铵盐析,SephadexG-100柱层析2次后酶活可提纯8.89倍。经SDS-PAGE测得3种纤维素酶的分子量约为66.3、52.7ku和37.0ku。酶作用的最适温度为50℃,最适pH值为5.0,在40℃以下,pH值4～6之间酶活较稳定。浓度为5mmol/L的Fe2 对酶反应有明显促进作用。     

木聚糖酶的定向制备及其在制浆造纸工业中的应用

里氏木霉以7g/L木聚糖为碳源制备低纤维素酶活木聚糖酶,木聚糖酶活、CMC酶活和木聚糖酶与CMC酶的酶活比在培养2天时分别为95.11U/mL、0.258IU/mL和368.6;延长产酶时间到第4天,酶活比提高到1401.1.当木聚糖酶用于漂白预处理,且其用量为5IU/g时,可使漂白纸浆白度由76.5%SBD提高至82.0%SBD,而卡伯值由4.31降至2.13;当木聚糖酶用于废纸脱墨且其用量为3IU/g时,与对照浆相比,脱墨浆白度提高了2.8%SBD、尘埃度下降了71.5%,同时在酶用量为1～9IU/g范围内,脱墨浆的裂断长、耐破指数和撕裂指数均比原浆有所提高.     

响应面法优化里氏木霉Rut C-30产纤维素酶液体培养基

该试验在单因素对里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30产纤维素酶的液体培养基优化的基础上,以滤纸酶活为响应值,采用响应面法确定其最佳培养基。首先通过Plackett-Burman(PB)设计筛选出影响滤纸酶活的显著因素,结晶纤维素和麸皮;通过最陡爬坡试验逼近最大酶活力区域;最后通过Central Composite Design(CCD)设计及响应面分析确定产酶最佳培养基,其中影响酶活的显著性因素结晶纤维素41.8g,麸皮19.1g。经过优化,滤纸酶活力最高为8.21U/mL,比单因素优化结果7.03U/mL提高了16.78%,同时测得CMC酶活为63.64IU/mL,木聚糖酶活为27.4IU/mL,葡萄糖苷酶酶活0.96IU/mL。     

里氏木霉以稻草和麸皮为基质产木聚糖酶的研究

以稻草和麸皮为主要基质,对里氏木霉RutC-30产木聚糖酶的固体发酵条件进行研究。试验表明:固态发酵培养基中添加麸皮不利于产木聚糖酶,最适氮源为(NH4)2SO4,干料与水分的比例为1∶3·5,并分析了无机盐对里氏木霉RutC-30产木聚糖酶的影响:MgSO4·7H2O>MnSO4·H2O>ZnSO4·H2O>FeSO4·7H2O。酶粗酶液的最适作用pH为4·8,最适反应温度为55℃。     

绿色木霉与黑曲霉固态混菌发酵生产纤维素酶、木聚糖酶和纤维二糖酶复合酶方法的研究

以绿色木霉（Trichoderma viride）和黑曲霉（Aspergillus niger）诱变菌株为生产菌种,先用绿色木霉菌株在玉米芯等农林废弃物上进行培养,一段时间后再接入黑曲霉进行混菌培养生产纤维素酶、木聚糖酶和纤维二糖酶复合酶。结果表明其复合酶各酶最大活性条件为：绿色木霉液体种子接种量为80%,黑曲霉麸曲种子的孢子自绿色木霉接种后第6天接入。纤维素酶、木聚糖酶和纤维二糖酶第10天酶活分别为211IU/g、8038IU/g、355IU/g。     

白腐真菌产木聚糖酶的筛选及其发酵条件研究

从白腐真菌中筛选产木聚糖酶菌株,并研究其产酶条件.从保存的白腐真菌中筛选出了一株产木聚糖酶活较高的菌株.通过单因素和正交试验对该菌株的发酵条件进行了研究.结果表明,5%麸皮和玉米芯(1∶1)为最佳碳源,0.5%蛋白胨为最佳氮源,接种量为每50mL发酵液接4块菌丝块,发酵时间为8.5d,pH值为5.4.优化后的发酵条件显著提高了该菌株产木聚糖酶酶活力.     

康氏木霉ZJ4摇瓶发酵产纤维素酶的研究

本文以稻草为主要碳源，对几种真菌产纤维素酶的能力进行了比较研究，发现康氏木霉ZJ4产酶能力最强。研究了康氏木霉ZJ4发酵产纤维素酶的发酵条件，结果表明：康氏木霉ZJ4发酵产纤维素酶的培养基组成为（g／L）：稻草40，麦麸20，大麦粉16．5，（NH4）2SO410，装液量30mL，起始pH5．0。产酶条件为：培养温度28℃，转速200r／min，当培养时间为144h，纤维素酶活达到最高值。     

里氏木霉与黑曲霉共同培养固态发酵生产饲用酶的研究

介绍了里氏木霉与黑曲霉共生用固态发酵工艺生产饲料用酶的方法。借助同时糖化与发酵的概念，在里氏木霉生长繁殖进入旺盛时期适时接入黑曲霉。而黑曲霉与里氏木霉共生，不仅有益于酶系的改善，而且黑曲霉的生长繁殖消耗了纤维素酶促水解所生成的葡萄糖等，有益于纤维素酶的合成。与此同时生成适量的酸性蛋白酶、果胶酶及糖化酶，提出了原料的利用价值。研究结果表明，影响酶活力的关键因素是培养基的水分及接种的时间，纤维素的量与结构亦是一个重要的因素。     

里氏木霉液体发酵纤维素酶的研究

里氏木霉突变株ＲＭ－２７是一种高产纤维素酶生产菌。本文对里氏木霉ＲＭ－２７摇瓶发酵产酶条件及小型自动发酵罐工艺条件等进行了系统的研究。试验结果表明，在通风量０．２－０．６ｖｖｍ，搅拌转速为２５０－４００ｒｐｍ、发酵温度２９℃及控制发酵液ｐＨ在５．０－５．５的条件下，在２５Ｌ发酵罐上发酵１０４小时左右，其滤纸酶活和羧甲基纤维素酶活分别为３１．８和５１６０ｍｇ葡萄糖／ｍｌ，发酵滤液用硫酸铵盐析沉淀得固     

不同碳源诱导康氏木霉产纤维素酶的研究

以不同碳源发酵培养康氏木霉,定时测定粗酶液的纤维素酶活:结合mRNA分析,提取诱导培养的菌体总RNA,进行RT-PCR扩增纤维素酶系的主要基因.结果显示,以微晶纤维素为碳源直接诱导培养康氏木霉3d,纤维素酶活力最高,CMC酶活达到17.58U/mL,P-NPC酶活达到11.39 U/mL,FPA酶活达到1.68U/mL;菌体的RNA进行RT-PCR能够较为稳定的扩增出纤维素酶系的主要基因CBH Ⅰ、CBH Ⅱ、EG Ⅰ、BG Ⅰ,推测结构相对完整的纤维类物质微晶纤维素对康氏木霉产纤维素酶诱导活性较高.表明纤维素酶合成的调节发生于预翻译水平,加入诱导物后引起纤维素酶基因转录表达,酶合成和表达调节是协同发生的.     

稀土离子对绿色木霉产纤维素酶的影响

研究了ErCl3和NdCl_3对绿色木霉产纤维素酶的影响。实验结果表明:在绿色木霉生长过程中加入ErCl_3和NdCl_3后,纤维素酶酶活力明显提高。当Er Cl3浓度为10-7 mol/L到10~(-1) mol/L时,羧甲基纤维素酶和滤纸酶活力均有提高,其中ErCl3浓度为10-2 mol/L时,羧甲基纤维素酶活提高率为673.9%,滤纸酶活提高率为651.3%,2种纤维素酶酶活力提高率均优于其他报道。当NdCl_3浓度为10-8 mol/L到10~(-1) mol/L时,羧甲基纤维素酶和滤纸酶活力都有提高。ErCl_3浓度为10-3 mol/L到10~(-1) mol/L时,对羧甲基纤维素酶和滤纸酶活力的作用较明显。当NdCl_3浓度为10~(-1) mol/L时羧甲基纤维素酶活力提高率为462.08%,滤纸酶活力提高率为453.36%。而NdCl_3、Er Cl3对发酵粗酶液纤维素酶活力也具有直接作用,作用与浓度有关,低浓度激活,高浓度抑制。其中NdCl_3对粗酶液中羧甲基纤维素酶活力提高率为55.88%,滤纸酶活力提高率为58.18%;ErCl_3对羧甲基纤维素酶活力提高率为62.79%,对滤纸酶活力提高率为60.58%。稀土离子对粗酶液中纤维素酶的激活作用较微弱,强度远不及对绿色木霉产纤维素酶过程的影响。因此,推测稀土NdCl_3和Er Cl3主要作用位点是绿色木霉合成纤维素酶的生物过程,而对纤维素酶酶蛋白本身的作用也有,但较弱。遗传稳定性研究表明,该菌株遗传性能稳定。     

以水稻秸秆为基质里氏木霉产酶条件优化

以里氏木霉(Trichoderma reesei)为研究对象,对水稻秸秆进行糖化试验。通过单因素试验及响应面法优化里氏木霉产酶培养基及产酶条件。结果表明,里氏木霉产酶最佳培养基为：水稻秸秆15.0 g/L、(NH₄)₂SO₄ 2.0 g/L、KH₂PO₄ 3.0 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、吐温-80 0.5 mL/L、微量元素液10.0 mL/L、FeSO₄·7H₂O 0.005 g/L。此优化条件下,菌株的滤纸酶酶活为0.612 PFU/mL,提高了52.6%。最佳发酵条件为：发酵温度29℃,初始pH 6、接种量5.0%、转速150 r/min、发酵时间8 d。在此优化条件下,滤纸酶酶活为1.12 PFU/mL,提高了83.2%。     

里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的条件优化

为提高纤维素酶酶解秸秆产糖效果,以碱性双氧水处理过的玉米秸秆为发酵基质,进行里氏木霉与黑曲霉混合发酵的研究。通过单因素试验确定黑曲霉延迟接种时间、里氏木霉与黑曲霉接种比例 、发酵时间和固液比4个因素的最优水平。在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计对混合发酵产酶条件进行优化,获得最佳产酶条件：黑曲霉延迟接种时间 36h,里氏木霉与黑曲霉接种比例 5:1、发酵时间7d、固液比2:50(m/V)、吐温-80体积分数0.4%、pH 5.0和装液量50mL/250mL。此时,滤纸酶力(FPA)可达1.224 IU/mL,β-葡萄糖苷酶活力(β-GA)可达0.315 IU/mL。采用高效液相色谱法,对最佳条件下的纤维素酶酶解秸秆的水解液进行检测。结果表明,两菌株混合发酵较单菌株发酵的纤维素酶系更加完整,且降解木质纤维素类原料产可发酵性糖的能力增强。