榆干离褶伞溶栓酶对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护机制研究

目的:研究榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,LU)溶栓酶对氧化应激所致损伤血管内皮细胞的保护机制研究。方法:以过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性来分析细胞损伤程度;ELISA方法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;硝酸还原酶法测定细胞NO含量;Western印记法检测NF-κB p65、iNOS和eNOS蛋白表达。结果:LU溶栓酶预处理后显著提高细胞存活率,抑制过氧化氢所致的LDH、TNF-α和NO水平的升高,同时抑制NF-κB、p-NF-κB、iNOS和eNOS的表达。结论:LU溶栓酶对血管内皮细胞的保护作用是通过下调NF-κB信号通路来实现的。     

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。     

珍龙醒脑胶囊对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的研究珍龙醒脑胶囊对谷氨酸(L-glutamic acid,Glu)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法利用Glu诱导PC12细胞损伤,采用MTT法测定细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、一氧化氮(NO)含量、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察珍龙醒脑胶囊对PC12细胞损伤的修复保护作用。结果珍龙醒脑胶囊可减少由谷氨酸造成的细胞损伤,提高细胞存活率,降低NO和MDA含量,减少LDH漏出量,增加SOD的活性。结论珍龙醒脑胶囊对Glu诱导的PC12细胞损伤有显著的保护作用,其保护作用可能与珍龙醒脑胶囊抑制细胞凋亡、调节氧化应激反应相关。     

大黄酸对正常和氧化损伤内皮细胞的增殖和氧化保护作用

目的：观察大黄酸对正常和氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响。方法：建立H2O2氧化损伤模型,采用不同浓度的大黄酸对内皮细胞进行处理,检测内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力和超氧化物歧化酶(SOD) 活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活力的变化;采用流式细胞术研究内皮细胞的凋亡情况,探讨大黄酸对内皮细胞的保护作用。结果：大黄酸浓度在16μmol/L以下时,对HUVEC的增殖无显著性影响;浓度在2μmol/L以上时,减轻HUVEC受到氧化损伤的程度,对氧化性损伤具有保护作用;同时降低了LDH释放率,下调了MDA含量,提高了NO含量和NOS、SOD、GSH-Px的酶活力,显著减少了细胞凋亡率。结论：HUVEC经2～16μmol/L大黄酸处理,可以有效减轻H2O2对其造成的氧化损伤,维持正常的生理形态。     

金银花黄酮对过氧化氢诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5～250 mg/mL范围的金银花黄酮可显著促进RAW264.7细胞的增殖(P0.05)。金银花黄酮各剂量组显著提高了细胞及细胞培养液中总抗氧化能力(P0.05),显著提高了SOD、GSH-Px、CAT活性及GSH含量(P0.05);显著降低了细胞及细胞培养液中MDA含量(P0.05);显著降低了细胞中LDH活性并提高了细胞培养液中LDH活性(P0.05)。金银花黄酮促进RAW264.7细胞的增殖,并且对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞损伤有良好的保护作用,存在剂量依赖效应。本研究为金银花功能性食品及保健品的开发提供理论依据。     

黑灵芝多糖对丙烯酰胺诱导小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究黑灵芝多糖对丙烯酰胺（acrylamide,AA）所致的小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建AA诱导小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）-6氧化损伤型,采用噻唑蓝比色法检测黑灵芝多糖对IEC-6氧化损伤的保护作用;同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以及测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平。结果：与正常对照组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与模型（AA）组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖溶液能够明显减轻AA对细胞的毒害作用,提高细胞生存率,降低细胞培养液中LDH的释放;降低MDA含量,提高细胞SOD和GSH-Px活性。结论：黑灵芝多糖可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH-Px活性从而有效地减弱AA诱导的小肠上皮细胞氧化损伤。     

绿豆皮牡荆素对H2O2损伤HUVEC细胞的预防和治疗作用

目的：研究绿豆皮牡荆素对过氧化氢（H2O2）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：H2O2诱导建立HUVEC细胞损伤模型，设置空白组、绿豆皮牡荆素低、中、高剂量组、VC对照组，噻唑蓝和试剂盒法分别测定细胞存活率、目标成分(MDA、 GSH、SOD、 LDH、GSH- Px)。结果：最佳H2O2损伤浓度为900 μmol/L此时细胞存活率为51.32% ；剂量组浓度为60、80、100 μg/ mL时，细胞存活率分别为110.61、122.30、131.68%，不同剂量组均能显著降低细胞及培养液中MDA含量，增加 GSH含量，提高SOD、GSH- Px活性；能显著提高细胞中LDH活性，降低培养液中LDH活性；绿豆皮牡荆素质量浓度为100 μg /mL时，细胞保护能力与同浓度下VC相当。结论：绿豆皮牡荆素能促进HUVEC细胞增殖，抑制自由基生成，增强抗氧化酶活性，降低细胞氧化损伤程度，且存在剂量依赖关系。     

虾青素保护活性氧所致线粒体损伤的作用

目的研究虾青素保护活性氧(ROS)所致线粒体氧化损伤的作用。方法观察虾青素对过氧化氢系统氧化损伤线粒体中丙二醛(MDA)、一氧化氮、谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)与ATP酶(ATPase)活性的影响,探讨虾青素保护线粒体氧化损伤的作用。结果过氧化氢损伤后,线粒体中MDA和NO含量升高,GSH含量降低,SOD和ATPase活性降低。虾青素(1.0×10-7,1.0×10-6,1.0×10-5 mol/L)能显著降低H2O2引起的线粒体MDA和NO含量升高,抑制GSH减少,提高SOD和ATPase活性。结论虾青素在一定浓度范围内对活性氧所致的线粒体氧化损伤有保护作用。     

虾青素保护活性氧所致线粒体损伤的作用

目的 研究虾青素保护活性氧(ROS)所致线粒体氧化损伤的作用.方法 观察虾青素对过氧化氢系统氧化损伤线粒体中内二醛(MDA)、一氧化氮、谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)与ATP酶(ATPase)活性的影响,探讨虾青素保护线粒体氧化损伤的作用.结果 过氧化氢损伤后,线粒体中MDA和NO含量升高,GSH含量降低,SOD和ATPase活性降低.虾青素(1.0×10-7,1.0×10-6,1.0×10-5mol/L)能显著降低H2O2引起的线粒体MDA和NO含量升高,抑制GSH减少,提高SOD和ATPase活性.结论 虾青素在一定浓度范围内对活性氧所致的线粒体氧化损伤有保护作用.     

番茄红素对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用研究

目的:探讨番茄红素(Lycopene)对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素预处理后,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态,测定细胞培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC);DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平。结果:番茄红素能明显提高鱼藤酮损伤PC12细胞存活率(p<0.05),恢复细胞增殖;明显减轻了细胞损伤的形态的改变,降低LDH的释放、MDA和ROS含量(p<0.05),提高PC12细胞内SOD活性、GSH含量、T-AOC能力(p<0.05)。结论:番茄红素拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与抗氧化,清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关。     

陈皮酚类化合物调控AHR和NF-κB通路抗苯并芘诱导的肺上皮细胞损伤

本文研究了苯并芘(Bap)诱发肺上皮细胞炎性损伤的作用机制及陈皮中的酚类化合物的抗炎活性及作用机制。通过从陈皮中分离出来酚类化合物并用于抗Bap诱导的人肺上皮II型细胞(A549)损伤的活性研究,检测Bap对细胞炎症因子、NF-κB、芳基烃受体(AHR)通路相关蛋白表达的影响及陈皮酚类化合物对Bap造成损伤的保护作用。本文从陈皮中分离得到6个酚类化合物,研究表明,其中aspidin BB可降低3.74%由Bap诱导的A549细胞凋亡。aspidin BB可抑制Bap诱导的NO及炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)分泌,分别降低了49.22%、26.79%、37.86%和42.94%。Westernblotting结果显示,aspidinBB可抑制Bap诱导的AHR和NF-κB相关蛋白的激活,增强A549细胞的抗炎作用。因此得出陈皮酚类化合物aspidin BB可通过减少Bap诱导的炎性因子分泌,调控AHR、NF-κB通路发挥抗炎及抗氧化损伤的功能。     

火龙果皮发酵物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的缓解作用

本文研究了火龙果皮发酵物(Fermented Hylocereus undulatus peel, FHP)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症的缓解作用及机制。通过干酪乳杆菌CICC20280发酵火龙果皮,制备FHP。采用50、100、200、400、800μg/m LFHP处理RAW264.7细胞,噻唑蓝比色法确定FHP细胞毒性。在此基础上,将细胞分为对照组、LPS组及FHP处理组,格里斯试剂法、DCFH-DA荧光法和ELISA分别检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10)含量;RT-PCR检测NF-κB通路的信号转导元件TLR4/My D88/NF-κB及下游炎性因子的表达。结果显示:FHP作用RAW264.7细胞的安全浓度≤400μg/m L。与LPS组相比,FHP呈剂量依赖性地显著(p0.05)抑制细胞分泌NO、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6,平均抑制率76.40%、提高IL-10浓度,提高率达173.72%,同时极显著(p0.01)下调TLR4、My D88、NF-κB及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。综上可知:FHP对LPS诱导RAW264.7细胞炎症具有缓解作用,其抗炎活性通过抑制促炎介质并提高抑炎因子的水平实现,机制与沉默NF-κB通路的信号转导功能有关。     

黑灵芝多糖对氧化应激所致心肌细胞损伤的影响

目的：研究黑灵芝多糖(PSG-1)对氧化应激所致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的影响。方法：采用过氧化氢(H2O2)作用于心肌细胞,建立氧化应激损伤模型,观察细胞搏动频率,MTT 法测定细胞存活率;比色法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞内的活性(ROS),蛋白印迹检测细胞SOD 的蛋白表达。结果：PSG-1 预处理可减少MDA 含量,ROS 产生及LDH 的漏出,增加心肌细胞搏动频率、细胞存活率和SOD 活性及蛋白表达并且呈剂量依赖性。结论：PSG-1 对心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能与降低MDA、ROS 的含量,增强SOD 活性及蛋白的表达有关。     

虎杖苷对四氧嘧啶诱导的大鼠胰岛细胞损伤的保护作用

目的:研究虎杖苷(Polydatin)对四氧嘧啶(Alloxan)诱导的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞损伤的保护作用。方法:利用细胞增殖实验分别检测四氧嘧啶或虎杖苷对INS-1细胞增殖的影响,确定给药浓度;实验分为空白组、模型组(18 mmol/L四氧嘧啶)和不同浓度虎杖苷保护组(分别给予25、50 μg/mL虎杖苷,同时给予18 mmol/L四氧嘧啶),检测细胞存活率、LDH释放、胰岛素分泌、凋亡相关Caspase-3和Caspase-9的活性、活性氧簇ROS、一氧化氮NO、丙二醛MDA的含量及抗氧化相关超氧化物歧化酶SOD、还原型谷胱甘肽GSH水平。结果:10~30 mmol/L四氧嘧啶处理使INS-1细胞存活率显著降低(P<0.05),18 mmol/L四氧嘧啶处理细胞贴壁数目减少,LDH释放升高,胰岛素分泌量降低,凋亡相关Caspase-3和Caspase-9的活性显著升高(P<0.05),氧化应激相关ROS、NO和MDA含量显著提高(P<0.05),抗氧化相关SOD和GSH水平显著降低(P<0.05)。5~100 μg/mL虎杖苷对INS-1细胞无毒性作用,相较于模型组,25和50 μg/mL虎杖苷能显著提高四氧嘧啶诱导INS-1细胞存活率,改善细胞形态,降低LDH活性,增加胰岛素分泌量,抑制凋亡相关Caspase-3和Caspase-9酶活性,抑制四氧嘧啶诱导的氧化损伤,提高抗氧化相关酶活力(P<0.05)。结论:虎杖苷对四氧嘧啶诱导的INS-1细胞损伤有显著保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激及凋亡有关。     

红小豆多酚对小鼠视网膜光损伤的保护作用及其机制研究

研究红小豆多酚对光诱导的视网膜损伤的保护作用及其作用机制。采用红小豆多酚连续8周灌胃小鼠并强光照射以建立小鼠视网膜光损伤模型，利用视网膜电图和光学相干断层成像对视网膜生理指标进行检测，并测定视网膜组织的抗氧化能力和炎症相关指标含量。结果表明：红小豆干预小鼠后视网膜b波振幅和ONL厚度均显著高于模型组（P<0.01）。红小豆多酚通过增加SOD、CAT和GSH-px酶活性提高T-AOC活性以降低MDA含量。红小豆多酚抑制炎症因子IL-1β、TNF-α、MCP-1和NO的释放，还可降低VEGF含量以避免视网膜组织血管增生来降低细胞炎性浸润。红小豆多酚通过调节Nrf2-HO-1途径调控抗氧化能力，下调氧化应激反应，减轻NF-κB途径参与的炎症反应来保护视网膜。红小豆多酚对光诱导的视网膜损伤具有保护作用。     

蔓越莓抑制UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的研究

研究蔓越莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(Ha Ca T)光损伤的保护作用。用3个不同剂量的蔓越莓果汁预处理Ha Ca T细胞6 h,采用60 m J/cm~2强度UVB照射细胞;然后用MTT法检测细胞的生存率,吸取细胞上清液采用比色法检测丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性变化,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察检测细胞凋亡状况。UVB辐射对Ha Ca T细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐射模型组Ha Ca T细胞活性下降了29.54%,SOD和GSH-Px活性极显著降低(P0.01);相比于模型组,蔓越莓各剂量组可显著提高UVB照射后Ha Ca T细胞的活力(P0.05或P0.01),提高SOD和GSH-Px活性(P0.01),减少MDA和ROS含量(P0.05或P0.01),并且降低LDH活性和增加Hyp含量(P0.01),呈剂量依赖关系,从而降低UVB所导致的细胞损伤及凋亡率升高。蔓越莓可以明显减少UVB诱导Ha Ca T细胞的氧化损伤和凋亡,具有显著的光保护功效,其作用机制与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基以及促进胶原蛋白合成有关。     

茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯抑制中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤研究

目的研究茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(HaCaT)光损伤的保护作用。方法用不同浓度的EGCG对HaCaT细胞进行预处理6 h,采用60 m J/cm2的剂量照射细胞,用MTT法检测细胞生存率,吸取细胞上清液检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性和丙二醛(MDA)含量变化,用荧光法检测细胞内ROS含量。结果 UVB辐射对Ha Ca T细胞造成严重损伤,与对照组相比,细胞活性下降21.63%;与UVB辐射模型组相比,EGCG尤其高剂量可提高UVB照射后HaCaT细胞的存活率5.89%,显著提高SOD、GSH–Px活性(P0.01),降低LDH活性(P0.01),减少自由基ROS和MDA含量(P0.01)。结论 EGCG可以减少UVB诱导HaCaT细胞的损伤和凋亡,具有光保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力和加速清除氧自由基有关。     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

鲜马奶粉的体内抗氧化活性

研究鲜马奶粉对D-半乳糖诱导的氧化损伤小鼠体内抗氧化作用。小鼠随机分为6组—空白对照组(灌胃生理盐水),D-半乳糖氧化损伤模型组(80 mg/kg D.Gal),阳性对照组(Vc,1 g/kg),鲜马奶粉低、中、高剂量组(40、80、120 mg/kg)。45 d后,测定小鼠肝脏、脾脏及血清中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)、蛋白质(考马斯亮蓝染色法)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧物歧化酶(SOD)含量及观察小鼠体重变化趋势。结果显示:与模型组比较,鲜马奶粉可拮抗小鼠消瘦,增强血清、肝脏及脾脏中SOD和GSH的活性、减少MDA、MPO、XOD、NO、NOS的含量。鲜马奶粉具有阻止氧化损伤的作用,其机制可能与抑制自由基产生,增加体内抗氧化酶的活性,提高机体抗氧化能力有关。