紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究

应用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解紫花芸豆清蛋白,并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(1 kDa、1～3 kDa、3～5 kDa和5 kDa);评价水解物和其膜分离组分的抗氧化活性(DPPH自由基清除率、还原力、羟自由基抑制率、亚铁离子螯合能力和ABTS自由基清除率)。结果表明,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶均能显著提高紫花芸豆清蛋白的抗氧化活性。其中ABTS自由基清除率、羟自由基和亚铁离子螯合能力提高较大,但是碱性蛋白酶降低了芸豆清蛋白的还原力。经过超滤膜分离后,不同分子量大小的各组分均具有一定的抗氧化活性,但是各组分的抗氧化能力不同, 1 kDa以下组分具有更佳的抗氧化活性,可进一步分离并鉴定获得单一抗氧化肽段,从而用于功能食品和保健品的开发。     

双酶法制备红豆多肽的工艺优化及其抗氧化活性

为更好利用红豆蛋白资源,研究酶解制备红豆多肽的工艺方法,该试验以红豆蛋白为原料,选取碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶共5种蛋白酶进行水解,以蛋白水解度为指标筛选出作用较佳的复合酶。在单因素试验的基础上,利用正交试验优化红豆蛋白多肽的制备工艺,以DPPH自由基、·OH、O2-·、ABTS+自由基清除率为测定指标,评价红豆蛋白的抗氧化活性。结果表明：5种蛋白酶中,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解制备红豆多肽效果较佳,经过工艺优化后最佳水解工艺为酶活比6∶4,反应pH值7.5,反应温度52℃,底物浓度5%,加酶量800 U/g,反应时间5 h,且抗氧化活性测定结果表明红豆多肽具有一定的抗氧化活性。     

绿咖啡豆提取物的抗氧化性研究

本文通过5种体系对绿咖啡豆提取物的抗氧化活性进行了综合评价,包括总抗氧化能力、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、铁离子还原能力和金属离子螯合能力等。结果表明:绿咖啡豆提取物在一定的浓度范围内具有很强的总抗氧化能力,极显著高于BHT和VC(p<0.01),具有较强的DPPH自由基(IC50(0.072±0.003)mg/mL)和ABTS自由基(IC50(0.22±0.01)mg/mL)清除活性,较强的铁离子还原能力,但不具备金属离子螯合能力。绿咖啡豆提取物具有较强的抗氧化活性,是一种潜在的天然抗氧化剂。     

鸡蛋清蛋白酶解肽的抗氧化活性

分别采用胃蛋白酶和碱性蛋白酶对鸡蛋清蛋白进行单酶和双酶水解,筛选得到水解度较高的鸡蛋清蛋白酶解产物Ⅰ(P-A)H,并对上述酶解产物依次进行超滤和树脂分离,得到高活性的组分ⅠF2。通过总还原力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基(·OH)抗氧化评价体系,分析酶解产物Ⅰ(P-A)H和组分ⅠF2的抗氧化能力。结果表明:Ⅰ(P-A)H具有较强的总还原力和DPPH清除力以及显著的·OH清除能力;组分ⅠF2与酶解产物Ⅰ(P-A)H的抗氧化活性相比,其活性显著性提高。     

不同等级荞麦粉抗氧化性研究

以中国固阳荞麦和加拿大温莎荞麦籽粒为材料,采用石磨法磨制荞麦粉,以出粉率不同收集全粉(90%)、普粉(75%)、精粉(60%)和营养粉(40%)4个等级粉,采用甲醇提取荞麦粉抗氧化物质,分析其抗氧化活性。结果表明,荞麦营养粉的总酚、总黄酮含量最高,精粉最低。固阳荞麦营养粉的总酚和总黄酮含量分别为(3.80±0.05)和(5.49±0.20)mg/g,加拿大温莎荞麦营养粉的总酚和总黄酮含量分别为(4.10±0.09)、(5.45±0.05)mg/g。荞麦营养粉的总抗氧化能力显著高于全粉,全粉显著高于精粉。荞麦各等级粉对DPPH·、·OH及ABTS+·均具有一定的清除能力,清除作用大小为营养粉全粉普粉精粉。固阳荞麦营养粉具有更高的亚铁离子螯合能力,加拿大温莎营养粉和全粉的亚铁离子螯合能力显著高于普粉和精粉。荞麦粉总抗氧化能力、DPPH·清除率、·OH清除率、ABTS+·清除率、亚铁离子螯合能力与总酚、总黄酮含量呈高度正相关。     

基于陶瓷膜过滤工艺制备甘蔗红糖的多酚组成以及抗氧化研究

为研究基于陶瓷膜过滤工艺制备甘蔗红糖的多酚成分、含量以及抗氧化能力,对广西南宁市扶绥县甘蔗双高基地6个品种甘蔗制备的红糖进行研究。通过测定红糖提取液总酚、总黄酮含量以及单体酚组成,以DPPH和ABTS自由基清除能力以及亚铁离子和铜离子螯合能力为指标对红糖提取物抗氧化能力进行评价。结果表明,不同品种红糖的总酚、总黄酮含量以及抗氧化活性存在显著差异;其中红糖总酚含量范围为2846.21~4073.48 μg/g,总黄酮含量范围为1999.24~2438.63 μg/g,在单体酚分析中,没食子酸是红糖优势酚酸;在抗氧化活性测定中,红糖活性提取液的DPPH、ABTS自由基清除能力以及铜离子螯合能力均大于对照组,表现出较高的抗氧化活性,其中D（GUC23-2）在DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验、螯合亚铁离子实验中表现出最好效果;结合相关性分析发现,多酚含量与抗氧化活性具有较高相关性,因此可以初步认为多酚种类以及含量是甄别不同品种红糖抗氧化活性的主要因素。综上所述,甘蔗品种的差异性是引起红糖多酚类物质种类以及含量差异的主要因素,而多酚类物质含量以及组成的差异是造成不同品种红糖抗氧化活性差异的主要原因。     

复合酶解牦牛乳酪蛋白工艺优化及抗氧化性的研究

为了优化牦牛乳酪蛋白酶解工艺,研究其产物抗氧化活性,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适条件下酶解牦牛乳酪蛋白,以水解度(DH)、DPPH·自由基清除率和超氧阴离子清除率为评价指标,筛选出2种效果最优的单酶进行复配,采用单因素试验及L9(34)正交试验确定最优酶解工艺。结果表明:中性蛋白酶和胰蛋白酶比例为1:2效果最佳,最佳酶解工艺条件为底物浓度5%(w/v),温度42.5℃,p H值7.5,复合酶添加量3%,作用时间150 min,酶解产物抗氧化活性最高,DPPH·自由基清除率达到了64.26%±0.18%,超氧阴离子清除率达到40.34%±0.92%。     

不同分子质量鲍鱼外套膜酶解物抗氧化活性研究

研究鲍鱼外套膜酶解物(AMH)及其不同分子质量组分的抗氧化活性。采用中性蛋白酶水解鲍鱼外套膜制得AMH,通过超滤得到分子质量分别为小于1kDa和1～3,3～5,5～10kDa的4种酶解物组分;考察AMH和不同分子质量组分的体外抗氧化活性。结果表明:AMH清除DPPH自由基、OH自由基和亚铁离子螯合能力的IC50值分别为11.76,12.07,4.04mg/mL;经过超滤分离后,其抗氧化活性明显增强,且1～3kDa分子质量范围组分的清除DPPH自由基和OH自由基能力最强,3～5kDa分子质量范围组分的亚铁离子螯合能力最强。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。     

不同品种石榴花色苷、总多酚含量及抗氧化活性比较研究

石榴中含有丰富的花色苷和多酚类物质,具有良好的抗氧化活性。以5个石榴品种(大叶天红蛋、大红酸、净皮甜、御石榴和喀什红子酸石榴)为实验材料,分析其总花色苷、总多酚含量,并用DPPH、FRAP、ABTS、螯合亚铁离子法测定抗氧化活性,比较不同石榴品种总花色苷、总多酚含量及抗氧化活性。结果表明:不同石榴品种总花色苷含量范围为3.54～13.89mg/100g,总多酚含量范围为38.89～68.28mg/100g;清除DPPH自由基范围为24.30%～45.73%;FRAP法测得的还原力范围为0.38～0.78;清除ABTS+.能力范围为58.02%～83.40%;螯合亚铁离子能力范围为14.73%～70.60%。相对而言,喀什红子酸石榴抗氧化活性较好,其次为御石榴。     

5种天然多酚类化合物抗氧化活性的比较

文中以VC、BHT和EDTA为对照,通过总抗氧化能力、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、铁离子还原能力和金属离子螯合能力等5种体系对咖啡酸、芦丁、白藜芦醇、根皮素和根皮苷等天然多酚类化合物的抗氧化活性进行了综合评价。结果表明:咖啡酸的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力[IC50(0.023±0.004)mg/mL]和铁离子还原能力均为最高,在浓度为0.1 mg/mL时总抗氧化能力达到(1.873±0.022)mg VC eq/mg;白藜芦醇的ABTS自由基清除能力最强[IC50(0.056±0.006)mg/mL],极显著高于阳性对照BHT和VC(P<0.01);芦丁的金属离子螯合能力最强,白藜芦醇次之,其他多酚类化合物不具备金属离子螯合能力。咖啡酸、芦丁、白藜芦醇、根皮素和根皮苷均具有较强的抗氧化活性,是潜在的天然抗氧化剂。     

咖啡酸体外抗氧化活性的研究

咖啡酸是一种天然的酚类化合物,属于羟基肉桂酸类,它广泛存在于水果和蔬菜中,具有良好的生物活性。本文通过多种体系对咖啡酸的抗氧化活性进行综合评价,包括总抗氧化能力、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、铁离子还原能力和金属离子螯合能力等。结果表明:咖啡酸具有很强的总抗氧化能力,极显著高于BHT和VC(P0.01);具有较强的DPPH自由基(IC500.023 mg/m L±0.004 mg/m L)和ABTS自由基(IC500.18 mg/m L±0.006 mg/m L)清除活性;具有较强的铁离子还原能力并极显著高于BHT(P0.01)。咖啡酸几乎不具备金属离子螯合能力。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的工艺研究

试验研究了采用中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化性肽的最佳工艺。将螺旋藻破壁离心后,用中性蛋白酶水解,以·OH清除率、DPPH·清除率和总还原力为评价指标,在单因素试验基础上,进行了正交试验,确定了最佳酶解工艺条件。试验结果表明,中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:酶解温度为60℃、[E]/[S]为3%、p H为7.3,时间为4 h。此条件下螺旋藻中性蛋白酶的水解物的·OH的清除率是92.790%、DPPH·的清除率为18.941%,代表总还原力大小的吸光度为1.507。     

酶解拟黑多刺蚁制备抗氧化活性肽

分别采用Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰酶水解拟黑多刺蚁,利用超氧自由基、DPPH自由基、羟基自由基清除能力、还原力、铁离子螯合能力、亚油酸自氧化抑制能力6个指标衡量水解物的抗氧化能力,并结合水解度(DH)、蛋白质利用率、多肽含量等理化指标筛选最适蛋白酶。结果表明,酶解物具有良好的体外抗氧化活性,其抗氧化活性与抗氧化肽的剂量呈正相关,其中Alcalase2.4L水解能力、酶解液抗氧化能力最强。还研究了热处理、超声、均质等预处理方式对水解能力、抗氧化能力的影响,发现均质对酶解产物的影响最大。     

玉米蛋白水解物对Caco-2细胞的抗氧化作用研究

试验以挤压膨化蒸煮后的玉米蛋白粉为原料,经双酶(复合蛋白酶-碱性蛋白酶)顺次水解后,得到抗氧化活性良好的玉米蛋白水解物;模拟体外胃肠消化情况,分析其经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用后消化液的抗氧化活性变化。结果表明,经胃肠消化后,抗氧化活性明显增强,亚铁离子螯合能力提高81.52%,·DPPH自由基清除率提高12.63%;将玉米蛋白水解物直接作用Caco-2细胞,通过200μmol/L H_2O_2作用细胞4 h,研究作用后细胞内的ROS含量。试验结果表明, Caco-2细胞经玉米蛋白水解物作用150 min后,细胞内活性氧含量均降低,当玉米蛋白水解物蛋白浓度为5μg/mL时,细胞内ROS荧光值从32 235降低到11 168.5,明显清除了细胞内ROS含量。     

丝瓜花不同溶剂提取物抗氧化活性及其酚类成分分析

以无水乙醇、70%乙醇、40%乙醇和水分别对丝瓜花进行提取,并测定各提取物中总酚、总黄酮含量,采用DPPH·清除能力、超氧化物自由基清除能力、FRAP抗氧化能力和亚铁离子螯合能力等方法评价其抗氧化活性,通过HPLC分析其中酚类成分。结果表明,70%和40%乙醇提取物总酚及总黄酮含量较高,而且DPPH·清除活性、FRAP还原力最强,40%乙醇提取物、水提物分别具有最强的超氧阴离子自由基清除活性和亚铁离子螯合能力。总酚含量与DPPH·清除活性之间存在较强的相关性(R²=0.8688)。HPLC分析检出提取物中9种酚类化合物,其中含量最高的为杨梅素。试验结果说明,70%乙醇、40%乙醇可能是丝瓜花抗氧化性物质提取的较好溶剂。结果表明丝瓜花是一种较好的抗氧剂资源。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

不同分子质量米糠多肽的抗氧化活性

采用截留分子质量为10000、3000D超滤膜对碱性蛋白酶水解米糠蛋白的水解液进行分离,获得不同分子质量(Mw)的米糠多肽混合物组分,以6种抗氧化活性指标对米糠多肽混合物组分的抗氧化活性进行评价。结果表明:米糠多肽的抗氧化活性与蛋白分子质量大小密切相关。Mw>10kD的米糠多肽对.OH的清除能力最强,属于活性氧自由基清除的抗氧化机制;Mw3～10kD的米糠多肽对Fe3+螯合能力最强,属于金属离子螯合的抗氧化机制;Mw<3kD的米糠多肽对O-2.的清除能力、DPPH自由基的清除能力、ABTS+.清除能力和Fe3+还原能力最强,属于电子转移(SET)的抗氧化机制。不同分子质量的米糠多肽抗氧化活性随多肽质量浓度的增加而增加。     

辣木叶乙醇提取物的抗氧化活性研究

确定辣木叶中总抗氧化物质的最佳提取条件,并评价其体外抗氧化活性。在单因素试验结果的基础上,以DPPH自由基清除率为评价指标,通过采用正交试验研究乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间4个因素对辣木叶抗氧化物质抗氧化活性的影响。结果表明:最佳提取条件为提取温度为90℃、料液比为1:30、乙醇体积分数为60%、提取时间为1.5 h,在此条件下,辣木叶中多酚含量为69.36±0.58 mg/g,黄酮含量为53.72±0.48 mg/g,DPPH自由基清除率为57.83±0.14%。辣木叶抗氧化物质粗提物对DPPH、ABTS和·OH自由基具有具有较好的清除效果,还原能力较弱,其EC50值分别为86、31和140μg/m L,对DPPH、ABTS和·OH自由基清除率分别达到相同质量浓度BHT的98.26%、99.04%和96.63%,并与辣木叶粗提物质量浓度存在一定的量效关系。