PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取金银花中绿原酸的工艺优化

采用PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系优化金银花中绿原酸的提取工艺。以绿原酸萃取率为考察指标,在单因素试验基础上,确定PEG种类、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数和介质p H等关键影响因素,通过Box-Behnken试验筛选出绿原酸的最佳提取工艺条件。结果表明:PEG/(NH_4)_2SO_4双水相提取金银花中绿原酸的最佳工艺为:PEG4000质量分数28.7%、(NH_4)_2SO_4质量分数9.6%、介质pH 7。在此条件下,金银花中绿原酸萃取率为98.41%,该提取工艺环境友好,条件温和,提取率高,可为金银花资源的开发利用提供理论依据。     

双水相萃取分离红高粱色素工艺研究

以双水相法萃取分离红高粱色素,选取聚乙二醇(PEG)/(NH_4)_2SO_4组成的双水相体系从高粱粒中萃取红高粱色素,确定双水相的组成成分PEG/(NH_4)_2SO_4对色素的影响。采用单一变量法,分别测定PEG分子量、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数、水浴温度、粗提取液体积萃取红高粱色素的最佳值,按照方案进行响应面分析,得到萃取高粱色素的最佳条件:PEG2000质量为1.8 g,(NH_4)_2SO_4质量为1 g,水浴温度为30℃,粗提取液体积为1.0 mL,加蒸馏水定量到10 g时,红高粱色素的萃取率最高。     

双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究

通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%.     

芦丁在异丙醇/无机盐双水相体系中分配行为的研究

采用异丙醇与无机盐构建双水相体系,以芦丁在两相间的相比R、分配系数K、萃取率E为指标,考察了无机盐种类、无机盐质量分数、异丙醇质量分数以及芦丁浓度对其分配行为的影响。实验结果表明:不同种类无机盐所构建双水相体系萃取率高低顺序为:K_2HPO_4Na_2SO_4(NH_4)_2SO_4Na_2CO_3K_2CO_3;以K_2HPO_4和异丙醇构建的双水相体系中,萃取率随盐浓度以及异丙醇浓度的增加呈先升高后降低的趋势,萃取率随芦丁浓度的增加而升高,但高浓度对萃取率的提高贡献有限。以质量分数28%的异丙醇和质量分数28%的K_2HPO_4构建的双水体系配系数为13,萃取率达93.4%。     

双水相萃取法分离纯化金针菇子实体多糖

根据双水相萃取原理,探讨了乙醇-硫酸铵双水相体系对金针菇多糖的分配途径,并对该体系的双节线数据进行拟合,确定出拟合度高且参数较少的双节线方程:y=-5.83-64.76×0.95x,R~2=0.999 1。以金针菇多糖萃取率为指标,研究系线长度、硫酸铵质量分数、乙醇质量分数对金针菇多糖的萃取效果。结果表明:在乙醇质量分数为24%、(NH_4)_2SO_4质量分数为21%时,系线长度为47.36,多糖在下相的分配系数为10.57,多糖的萃取率可达92.24%。该法简单高效,可用于金针菇多糖的分离纯化。     

双水相法萃取黑曲霉C2J6脂肪酶条件的优化

为提高黑曲霉C2J6发酵液中脂肪酶的分离纯化效率,采用PEG2000/(NH_4)_2SO_4双水相法进行萃取。探讨PEG2000质量浓度、(NH_4)_2SO_4质量浓度、p H、Na Cl质量浓度对脂肪酶萃取的影响,利用Box-Behnken响应面法优化萃取条件。结果表明:在PEG2000质量浓度35%、(NH_4)_2SO_4质量浓度21.60%、p H 6.90的条件下,脂肪酶萃取率高达85.92%,酶活力47.53 U/mL,比粗酶活力提高了3.02倍。此法简捷、高效,为黑曲霉脂肪酶的进一步纯化奠定基础。     

双水相体系萃取啤酒酵母中乙醇脱氢酶工艺

研究构建聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系对乙醇脱氢酶(ADH)进行提取。探讨了PEG分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度、粗酶添加量对ADH纯化倍数的影响。结果表明,在(NH_4)_2SO_4浓度为18%、PEG800浓度为22%、粗酶添加量为5%所组成的双水相体系下,ADH的纯化倍数可达3.815。     

C_2H_5OH-(NH_4)_2SO_4双水相萃取太行菊总黄酮及其抑菌活性

试验优化了太行菊总黄酮(FFO:Flavonoids from Opisthopappus taihangensis)双水相萃取体系并研究其抑菌活性。超声波辅助C_2H_5OH-(NH_4)_2SO_4双水相萃取FFO,依据Design-Expert8.0(Box-Benhnken)试验设计原理,以总黄酮萃取率为响应值进行方差分析,获取多元二次线性回归方程;采用K-B纸片扩散法测定6种供试菌种的抑菌圈直径,对比MIC和MBC确定其抑菌活性。23 g/mL C_2H_5OH-17 g/mL (NH_4)_2SO_4双水相萃取体系下FFO萃取率最高。响应面试验方差分析表明,pH和NaCl的浓度对萃取率的影响差异显著;最优双水相萃取体系:pH7.76、粗提液质量分数是19.35%、NaCl质量分数为2.38%,萃取率Y极大值为96.68%(P=0.994);FFO对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,高剂量作用下抑菌率可达98.57%,MIC为1.56 mg/mL;对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用次之,对青霉和黑曲霉抑制作用最弱。     

三相萃取法提取玛咖多糖的工艺研究

以玛咖为实验原料,利用三相萃取法优化玛咖多糖的提取工艺,并对其抗氧化性进行研究。玛咖多糖提取工艺中,对(NH_4)_2SO_4添加量、叔丁醇添加量、萃取温度、水提次数等因素进行单因素实验,在此基础上进行响应面优化设计,得到最佳工艺条件为(NH_4)_2SO_4添加量30%、叔丁醇添加量10 mL、萃取温度37℃、水提次数1次,多糖提取率达到45.3%。玛咖多糖的抗氧化性研究发现,玛咖多糖对·OH自由基和DPPH·自由基的半数清除率值分别达到2.5 mg/mL和11.6 mg/mL,说明具有很较高的抗氧化性,三相萃取法工艺很好的保留玛咖多糖的活性。     

裂褶菌多糖发酵培养基优化及其活性研究

以胞内总多糖产量为响应值,采用单因素试验与Box-Behnken响应面法优化裂褶菌产多糖的液态深层发酵培养基配方,并研究其抑菌、抗氧化及保湿活性。结果表明,最佳培养基配方为葡萄糖20 g/L、酵母浸粉29.5 g/L、KH2PO4 0.6 g/L、抗坏血酸0.006 g/L、β-环糊精17 g/L、谷氨酰胺0.000 5 g/L、透明质酸0.05 g/L、羧甲基淀粉钠3 g/L,采用最优培养基摇瓶发酵11 d,总多糖产量达5.35 g/L,10 L发酵罐发酵6 d,总多糖产量达6.39 g/L。10.0 mg/mL的裂褶菌多糖（SPG）对大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为56.24%、33.75%、32.62%和42.51%;2.0 mg/mL的SPG对O2-·、·OH、DPPH·和ABTS自由基的清除率分别为84.58%、15.08%、18.61%、32.60%;在相对湿度（RH）为43%和81%的环境中放置8 h,保湿率均＞98%;表明SPG具有较强的抑菌、抗氧化和保湿活性。     

硫酸酯化裂褶菌多糖的制备及其抗氧化活性研究

采用水提醇沉法提取裂褶菌多糖,用磺酰化法对其进行硫酸酯化,经红外光谱定性分析,硫酸钡比浊法定量计算得出硫酸基的含量。采用邻二氮菲-Fe~(2+)氧化法测定裂褶菌多糖和裂褶菌硫酸酯对羟自由基的清除作用。结果表明:硫酸基含量为13.9%,硫酸基取代度(DS)为1.26时,硫酸酯化裂褶菌多糖的抗氧化活性比裂褶菌多糖增加2.6倍。硫酸酯化修饰能提高裂褶菌多糖的抗氧化活性。     

离子液体双水相萃取高效液相法检测青霉素G

建立了离子液体双水相萃取结合柱前衍生测定青霉素G的检测方法。由离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐[Bmim]BF_4和(NH_4)_2SO_4构成离子液体双水相体系萃取衍生后的青霉素G,并采用高效液相色谱对其进行检测。考察了离子液体与盐不同浓度组成对萃取效率的影响。结果表明,萃取率受[Bmim]BF_4和(NH_4)_2SO_4的浓度影响,当体系中[Bmim]BF_4的质量分数达到30%、(NH_4)_2SO_4的质量分数在24.72%-33.11%之间时,萃取率可达到93.21%±1.42%(n=6),定量下限(LOQ)为97μg/mL。这一体系能够有效地萃取并检测青霉素G,具有很高的灵敏度和萃取率。     

双水相萃取纤维素酶的研究

对PEG(聚乙二醇)/(NH_4)_2SO_4(硫酸铵)双水相提取纤维素酶进行了研究,考察了PEG分子量、PEG和(NH_4)_2SO_4质量分数、pH、温度等因素对纤维素酶分配系数和回收率的影响。结果表明:双水相最佳提取条件为PEG4000 20%,(NH_4)_2SO_425%,pH 4.5,温度45℃,在此条件下纤维素酶分配系数可达到23.94,回收率为91.68%。     

三相萃取法纯化枸杞多糖

利用三相萃取法可避开多糖的醇沉过程,达到短时间内分离多糖的同时,也可一定程度的分离子水提液中的蛋白质和黄酮的原理,本文采用此法分离枸杞多糖,考察了叔丁醇-(NH₄)₂SO₄-水提液体系的三相萃取性质,研究了提取液中(NH₄)₂SO₄的添加量、叔丁醇添加量、萃取液pH、温度对枸杞提取液多糖、蛋白质、黄酮的萃取率的影响,并通过正交试验优化了多糖的萃取条件,研究发现:多糖最佳萃取条件是:10 mL提取液中(NH₄)₂SO₄添加量为30%(w/v)、叔丁醇添加量为10 mL、温度为35 ℃、pH为6,此时多糖的萃取率可达95.31%,蛋白质萃取率可达83.45%,黄酮萃取率可达50.66%。通过多糖的红外光谱、抗氧化活性实验可发现三相萃取法所得多糖与乙醇沉淀法所得多糖的化学结构,抗氧化活性均无太大差异。因此,该体系是一种可行的高效分离纯化枸杞多糖的绿色方法。     

香菇多糖脱蛋白工艺及其抗氧化活性研究

采用低共溶剂(deep eutectic solvents,DES)-K2HPO4双水相体系(aqueous two-phase system,ATPS)将香菇多糖水提液中的多糖与蛋白质进行分离萃取,蛋白质富集于DES相,糖类富集于K2HPO4相。综合考察了DES物质的量比、K2HPO4浓度、DES的加入量以及萃取时间对蛋白质脱除率的影响,通过正交试验进一步优化试验条件,得出蛋白质脱除的最优工艺参数:以氯化胆碱/丙三醇(物质的量之比1∶2,2.6 mL)、K2HPO4(0.6 g/mL,3 mL)构建双水相体系,加入2 mL香菇多糖水提液,萃取30 min后,香菇多糖蛋白质的脱除率高达90.8%,香菇多糖回收率为98.0%。在此条件下得到的香菇多糖具有清除DPPH自由基的能力,说明脱蛋白后的香菇多糖具有一定的抗氧化性。     

木瓜蛋白酶在金属螯合亲和双水相中分配行为的研究

利用金属螯合双水相亲和分配技术对木瓜蛋白酶的萃取进行了研究。考察了不同无机盐和浓度、PEG的分子量和浓度、亲和配基的加入量、pH、酶添加量对木瓜蛋白酶分配的影响,对不含亲和配基的双水相和含亲和配基的双水相萃取木瓜蛋白酶的效果进行比较。优化的分配条件为:质量分数17%PEG 4 000,1%PEG-IDA-Cu~(2+),18%Na_2SO_4,pH 7.0,酶添加量为2 mg/g,在此条件下,木瓜蛋白酶的酶活性回收率可达到90%左右,蛋白分配比达到5.11。结果表明,PEG 4 000/Na_2SO_4系统比PEG 4 000/(NH_4)_2SO_4系统更有利于木瓜蛋白酶亲和分配;无机盐的浓度和亲和配基的加入量是影响木瓜蛋白酶分配的关键因素;与不含亲和配基的双水相系统相比,亲和配基的加入可以提高木瓜蛋白酶在PEG相的分配,酶活性回收率和蛋白分配比可分别提高10%和2.0左右,表明金属鳌合双水相分配技术分离木瓜蛋白酶是可行的,为该体系的放大试验或规模化生产奠定了相应的试验基础。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰及红外表征

通过对提取出的裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰获得硫酸化多糖,用红外光谱检测硫酸化的结果。邻苯三酚自氧化法对多糖和硫酸化多糖的抗氧化活性进行了比较。随着多糖溶液浓度的增加,胞外多糖和硫酸化胞外的抗氧化活性也增强.当多糖溶液浓度为500μg/m L时,硫酸化胞外多糖对氧自由基的清除率达到32.73%,提高了28.88%。     

茶树菇多糖的制备及其对活性氧自由基的清除作用

以茶树菇为原料,通过单因素试验和正交试验,研究了料水比(W/V)、浸提时间、沉淀的乙醇浓度和浸提温度4个因素对茶树菇多糖提取得率的影响;探讨了茶树菇多糖中蛋白质的脱除技术,同时采用生物化学法测定了茶树菇多糖对活性氧自由基O2-·、·OH和H2O2的清除能力.研究结果表明提取茶树菇多糖的最佳工艺条件为沉淀的乙醇浓度80%、料水比120、浸提时间180 min、浸提温度70℃.经红外光谱和紫外光谱分析,茶树菇多糖主要是吡喃多糖,无蛋白质特征吸收峰.茶树菇多糖具有较强的清除活性氧自由基的能力,当茶树菇多糖质量浓度达0.3 mg/mL时,对O2-·、·OH和H2O2的清除率分别为41.72%、31.56%和55.81%;当茶树菇多糖质量浓度增大时,对O2-·、·OH和H2O2的清除率增加,且两者呈一定的量效关系.     

响应面优化超声波辅助双水相提取牛蒡多糖及抗氧化分析

采用响应面法优化超声辅助双水相提取牛蒡多糖的工艺条件,比较超声法、热水法、超声波辅助双水相法和酶法提取对牛蒡粗多糖提取率、主要成分及抗氧化活性的影响。结果表明,选用质量比为3∶1的(NH4)2SO4/聚乙二醇(PEG) 6000作为最佳的双水相体系,超声波辅助双水相法提取牛蒡多糖的最佳工艺为料液比0. 04∶1(g∶mL),在49℃浸提2. 6 h后超声处理31 min,牛蒡多糖的得率达到(32. 35±0. 85)%。4种方法制备的牛蒡粗多糖都含有一定的多酚、黄酮、糖醛酸和少量的蛋白质,超声波辅助双水相法的提取率和多糖含量最高。红外光谱分析表明牛蒡多糖为吡喃型多糖。抗氧化试验表明,在一定的浓度范围内,不同方法制备的牛蒡多糖都具有较好的抗氧化性,且呈现良好的量效关系。其中,超声波辅助双水相法提取的多糖对DPPH·、·OH清除率和还原能力的IC_(50)值分别为0. 619 9、2. 900 8和1. 187 1 mg/mL,抗氧化能力优于其他3种样品,表明超声波辅助双水相技术能制备出具有较高生物活性的牛蒡多糖。