抗T-2毒素单抗独特型抗体的制备及应用研究

目的研制T-2毒素标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验（EusA）。方法在研制了抗T-2毒素单抗的基础上，将抗体用无花果蛋白酶进行酶切，制备抗T-2毒素单抗F（ab’）：片段，并以F（ab＇）：片段作为免疫原免疫日本大耳白兔，研制出抗T-2毒素单抗独特型抗体。结果所研制的抗独特型抗体经过鉴定，是Ab2B型，与T-2毒素存在内影像关系。结论该抗体可以替代T-2毒素标准品应用于ELISA检测。     

绿色无毒黄曲霉毒素B_1免疫检测方法

建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法,并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1。通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体(11A9和1G3)制备F(ab’)2片段,并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体。最终得到两种抗独特型抗体,并对抗独特型抗体和AFB1进行相关性分析。通过实际样品添加回收,其批内回收率为115.60%~121.88%,变异系数在5%以内;而批间回收率为111.89%~126.98%,变异系数低于8%。分析结果准确可靠,表明此无毒绿色ELISA是一种安全可靠的AFB1分析方法。     

黄曲霉毒素B_1标准替代物的制备及其在花生样品检测中的应用

以抗黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体的F（ab＇）2片段为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法（ELISA）条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB1之间存在指数增长关系,且相关性系数R为0.999 8。以AFB1抗独特型抗体浓度与其相应的抑制率作标准曲线,ELISA法测定花生中AFB1添加回收率,范围在90.4%～100.2%之间。综上,AFB1抗独特型抗体可以作为AFB1无毒替代标准品。     

抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定

目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定。结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在"内影像"关系。结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测。     

抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴.方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab')<,2>片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清...     

抗黄曲霉毒素单链抗体基因的克隆与表达

为降低黄曲霉毒素抗体制备成本,在已有的能分泌抗黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系8F6的基础上,成功克隆得到了该单克隆抗体的重链（VH）和轻链可变区（VL）基因片段。通过重叠延伸PCR的方法将轻、重链可变区基因连接,并引入连接肽（Linker）编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体（ScFv）基因,并将该基因克隆到噬菌体表达载体pCANTAB 5E上,使单链抗体以噬菌体展示形式在大肠杆菌TG1中表达。间接竞争ELISA方法检测到该ScFv对黄曲霉毒素B1的抑制率（IC50）值为0.57ng/mL,表明该单链抗体与亲本鼠单抗有相同的抗原结合特异性,且具有很高灵敏度。     

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。     

总黄曲霉毒素ELISA定量检测方法的研制

为敏感、特异和快速地检测食品中总黄曲霉毒素的污染水平,在抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的基础上,研制了间接竞争ELISA检测方法,包被抗原为AFB1-BSA,包被量为0.0625μgml,抗体工作浓度为1:1.6×106。该方法对黄曲霉毒素B+G标准品的最低检出浓度为0.13ngml,对样品的最低检出量为1.50μgkg。校正曲线的线性范围为0.26～20.00ngml,线性方程y=-0.4463x+0.3532(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B+G50%的抑制浓度为2.08ngml;对玉米2个加标水平的平均回收率分别为94.56%和112.05%,对花生2个加标水平的平均回收率分别为87.50%和85.60%。该方法所用抗总黄曲霉毒素单克隆抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%、57.5%、104%和19%,与其它真菌毒素无交叉反应。     

食品安全快速检测试剂盒

江苏省微生物研究所有限责任公司是一家专门从事食品安全快速检测试剂盒研制开发的转制民营高科技企业 ,曾经承担过多项“八五”、“九五”、“十五”国家重大课题研究 ,现公司研制的主要产品有黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒、罂粟碱酶联免疫检测试剂盒、盐酸克伦特罗 (瘦肉精 )酶联免疫检测试剂盒。1　黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒该试剂盒是根据酶联免疫吸附法 (ELISA)原理研制而成的 ,符合国际上AOAC和国家质检总局颁布的有关黄曲霉毒素 ,B1分析方法标准 ,该试剂盒的生产已通过ISO 90 0 1:2 0 0 0版质量体系认证 ,同时 ,每批试剂盒的…     

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抗独特型抗体的研究进展

抗独特型抗体是针对抗体可变区的抗原决定簇（独特型）产生的特异性抗体，其中Ab2β是初始抗原在体内的“内影像”（intemal image），由于可模拟初始抗原而广泛应用于疫苗研究、肿瘤免疫、移植耐受、自身免疫病、食品安全等方面。对近年来抗独特型抗体的研究进展进行综述。     

抗微囊藻毒素单克隆抗体的研制

为研制抗微囊藻毒素(Microcystins,简称MC)的特异性单克隆抗体,用MC-KLH偶联物免疫6～8周龄雌性BalB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立稳定分泌抗MC的杂交瘤细胞株。将杂交瘤细胞注射入BalB/c小鼠腹腔,生产出抗MC的单克隆抗体。得到了抗微囊藻毒素单克隆抗体细胞株,命名为G5,抗体亚类为IgG2a,亲和力常数2.9×10-11mol/L,分子量150KD,加标回收率在81.5%～125.0%之间,与其他结构类似物的交叉反应率<1%。筛选出的抗微囊藻毒素单克隆抗体具有较好的特异性。     

高效特异的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白多克隆抗体的制备

为得到高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,通过用商品化的卵转铁蛋白(OVT)标品和自制纯化的OVT 免疫新西兰大白兔,用ELISA 及Western blotting 方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果表明获得的抗体效价均高达1:819200 以上,抗体特异性强。本实验所建立的方法可成功制备高效特异的抗卵转铁蛋白多克隆抗体,可为进一步研究提供实验材料。     

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7 的3 种磺胺嘧啶免疫抗原,并将其免疫BALB/c 小鼠,其中结合比为8.0 的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6),体内诱生法制备腹水。间接ELISA 测定腹水效价为1:1.28 × 106,建立间接竞争ELISA 标准曲线,其检测下限为10.4ng/mL,线性范围为14.8～421.5ng/mL,IC50 值为79.1ng/mL,与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为 0.3%、0.99%、4.5%,与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定,单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG 的2b 亚类。     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

鼠伤寒沙门氏菌特异性多克隆抗体的纯化方法

以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌的多克隆抗体。分别通过辛酸-硫酸铵沉淀法、磁珠偶联抗原吸附法纯化抗体,所制备的抗体效价为3.2×105,纯度较高,但交叉反应现象较严重。本实验以杂菌抗原反向吸附法纯化抗体,有效消除了抗体与杂菌的交叉反应,初步建立了一种高特异性多克隆抗体的纯化方法。     

抗赭曲霉毒素A多克隆抗体的制备

为了制备赭曲霉毒素A多克隆抗体,采用戊二醛法合成赭曲霉毒素A-BSA人工抗原,通过紫外扫描法鉴定半抗原与载体蛋白偶联效果.合成的人工抗原用弗氏佐剂乳化后免疫Balb/c小白鼠,4次免疫后眼球下缘采血,分离血清.试验结果表明,免疫后产生了抗赭曲霉毒素A-BSA的特异性多克隆抗体,抗体效价为1:8100,赭曲霉毒素A的最低...