三氧化二砷对耐伊马替尼K562细胞株增殖、凋亡和bcr/abl基因表达的影响

目的观察三氧化二砷（ATO）对耐伊马替尼K562（K562G）细胞增殖、凋亡和bcr/abl融合基因（bcr/abl基因）表达的影响。方法用不同浓度的伊马替尼（STI571）（0.25、2.50、10.00μmol.L-1）、ATO（1.0、5.0、10.0μmol.L-1）以及两者联合作用于K562G细胞,用MTT比色法测定药物对K562G细胞生长抑制率的影响、PI单染色法流式细胞仪检测K562G细胞凋亡率、荧光定量PCR检测K562G细胞bcr/abl基因的表达水平。结果 STI571作用于K562G细胞的细胞生长抑制率、细胞凋亡率和bcr/abl基因水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。与对照组比较,ATO作用于K562G细胞的细胞生长抑制率和细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）,bcr/abl基因表达水平明显降低（P〈0.05）;细胞抑制率呈剂量依赖性,细胞凋亡率以中浓度5.0μmol.L-1时最明显。ATO＋STI571联合用药作用于K562G细胞的细胞生长抑制率和细胞凋亡率与对照组以及单用ATO组比较差异有统计学意义（均P〈0.05）,细胞抑制率呈剂量依赖性,细胞凋亡率以中浓度ATO（5.0μmol.L-1）＋STI571（2.50μmol.L-1）时最明显,bcr/abl基因水平降低比单用ATO组更明显（P〈0.05）。结论 K562G对≤10.0μmol.L-1浓度的STI571耐药;ATO能明显抑制K562G细胞生长和诱导K562G细胞凋亡,使K562G细胞bcr/abl基因表达水平降低;ATO与STI571联合用药作用于K562G细胞时,细胞抑制率和细胞凋亡率比单用ATO效果好,bcr/abl基因表达水平降低更明显,两者有协同作用。     

ET-1对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：观察内皮素-1（ET-1）对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用。方法将高血压大鼠和正常血压大鼠按加入 ET-1浓度的不同各分为6组：10％胎牛血清（对照组）；10％胎牛血清＋20μmol·L－1 ET-1（20μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋40μmol·L－1 ET-1（40μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋60μmol·L－1 ET-1（60μmol·L－1组）；10％胎牛血清＋80μmol·L－1 ET-1（80μmol·L－1组）及10％胎牛血清＋100μmol·L－1 ET-1（100μmol·L－1组）。使用细胞计数试剂盒计数各组细胞个数；采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷（[3 H]-TdR）掺入法测定各组血管平滑肌细胞的 DNA 的合成量作为细胞增殖的指标。结果ET-1刺激高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞增生。高血压大鼠20、40、60、80及100μmol·L－1各组脑血管平滑肌细胞数量及 DNA 合成量较对照组均增加，以80 mol·L－1组细胞数量及 DNA 合成量增加最为明显（均 P ＜0．05）。正常血压鼠各组脑血管平滑肌细胞数量变化及 DNA 合成量增加不明显（P ＞0．05）。结论ET-1可明显促进高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖，提示 ET-1可能促进高血压诱发的脑血管重构。     

ERK通路抑制剂对白蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路抑制剂对人血清白蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞细胞外基质（ECM）合成的影响.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞按是否加入干预剂分为4组：A组（空白对照组）、B组、C组和D组.A组不加入任何干预剂.B组加入人血清白蛋白5 g·L-1.C组加入ERK1/2信号通路的特异抑制剂PD98059 10 μmol·L-1.D组加入ERK1/2信号通路的特异抑制剂PD98059 10 μmol·L-1 预处理45 min.预处理后,再加入人血清白蛋白5 g·L-1.各组细胞均放置水套式CO2培养箱培养0、12、24和48 h.培养0、12、24和48 h后收取细胞,用于MMP-9、TIMP-1和col-ⅣmRNA及蛋白的检测.应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测4组0、12、24和48 h时MMP-9、TIMP-1和col-ⅣmRNA表达水平.ELISA法检测4组0、12、24和48 h时MMP-9、TIMP-1和col-Ⅳ蛋白表达水平.结果 B组、D组12、24 h时MMP-9、TIMP-1和col-Ⅳ mRNA及蛋白表达水平均显著高于A组（均P＜0.01）,48 h时MMP-9、TIMP-1和col-Ⅳ mRNA及蛋白表达水平均显著低于A组（均P＜0.01）;D组12、24和48 h时MMP-9、TIMP-1和col-Ⅳ mRNA及蛋白表达水平均显著低于B组（均P＜0.01）,MMP-9、TIMP-1和col-Ⅳ mRNA及蛋白表达水平均显著高于0 h（均P＜0.01）.结论人血清白蛋白可能通过ERK通路作用于HK-2细胞,促进ECM的合成和抑制ECM的降解,诱导ECM积聚,从而参与肾小管间质纤维化.     

熊果酸对顺铂耐药人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨熊果酸对体外培养的顺铂耐药人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响。方法将熊果酸作用于体外培养的顺铂耐药人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,采用MTT法检测不同浓度的熊果酸（0、10、20、40、50、60、80μmol.L-1）对SKOV3/DDP细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术检测SKOV3/DDP的细胞凋亡和细胞周期。结果不同浓度的熊果酸对体外培养的SKOV3/DDP细胞均有明显的抑制增殖作用,并呈剂量、时间依赖效应（均P〈0.05）,熊果酸（60μmol.L-1）作用于SKOV3/DDP细胞48 h后,达到最大细胞凋亡率（31.22±1.98）%;熊果酸可影响SKOV3/DDP细胞增殖周期中的G0/G1期,使细胞在此期停滞,诱导其发生凋亡。结论熊果酸对体外培养的顺铂耐药人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

剥夺钙和血清对培养的骨髓基质细胞的影响

目的 探讨剥夺钙和血清对培养的骨髓基质细胞（BMSCs）的影响.方法 将传至第2代的BMSCs用DMEM培养液和无钙DMEM培养液按不同比例配制成细胞悬液,细胞浓度为2＆#215;104 mL-1,再根据是否加10%FBS分为6组：无10%FBS正常钙组（1组）、10%FBS正常钙组（2组,正常对照组）、10%FBS1/3正常钙组（3组）、10%FBS1/6正常钙组（4组）、10%FBS无钙组（5组）和无10%FBS无钙组（6组）.培养后4 h,1-7 d用CCK-8试剂盒检测BMSCs细胞增殖数.无10%FBS无钙组、无10%FBS正常钙组、10%FBS无钙组和10%FBS正常钙组在培养后0、4、12、24和48 h,0、1、3、5和7 d 时在倒置相差显微镜下观察贴壁生长BMSCs细胞形态的变化.结果 1组、6组培养后4 h,1-7 d 时细胞增殖数均明显低于2组（均P＜0.01）,3组培养后4 h,3-5 d时细胞增殖数明显低于2组（P＜0.05或P＜0.01）;4组培养后4 h,1、3和5 d时细胞增殖数均显著低于2组（均P＜0.01）,培养后7 d时细胞增殖数显著高于2组（P＜0.01）;5组培养后4 h,1-3、5 d时细胞增殖数均显著低于2组（均P＜0.01）.10%FBS无钙组、10%FBS正常钙组细胞形态正常,继续贴壁生长、增殖,细胞密度增加;无10%FBS无钙组、无10%FBS正常钙组细胞培养后4 h时开始贴壁细胞变小,培养后1、3 d时大量细胞漂浮、死亡,仅有极少数细胞保持贴壁.结论剥夺钙和血清均对细胞生存不利,低钙浓度对于BMSCs有短期抑制生存作用,但BMSCs能适应低钙环境,恢复活力和增殖.BMSCs适应低钙的意义与机制有待进一步探讨.     

IFN α-2b对白血病K562细胞增殖及FAK mRNA表达的影响

目的:研究重组人干扰素(IFN α-2b)对人慢性粒细胞白血病急变期细胞系K562细胞增殖及黏着斑激酶(FAK)mRNA表达的影响。方法:应用MTT法检测IFN α-2K562细胞的抑制率,采用RT-PCR技术检测各IFN α-2b浓度组对K562细胞FAK mRNA表达水平的影响。结果:增加IFN α-2b浓度及延长反应时间,除48 h和72 h外,抑制K562细胞增殖的比率逐渐升高;IFN α-2b作用48 h,浓度1万U/mL对抑制细胞增长的比率最高;随着IFN α-2b浓度增加,K562细胞的FAK mRNA表达增高,其中1万U/mL IFN α-2b实验组FAK mRNA表达水平最高,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:白血病K562细胞可能存在FAK mRNA异常表达,IFN α-2b可能通过上调正常FAK mRNA的表达水平抑制K562细胞增殖。     

安罗替尼对肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的 研究安罗替尼对肺癌A549细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法 采用不同浓度的安罗替尼作用于肺癌A549细胞，利用CCK8法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测A549细胞凋亡情况；通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 安罗替尼处理后，CCK8结果显示A549细胞的增殖能力降低（P＜0.05）；划痕实验表明A549细胞迁移率降低（P＜0.05）；Transwell实验观察到穿过Transwell小室膜的A549细胞数减少（P＜0.05），侵袭能力受抑制；凋亡双染法发现A549细胞凋亡比例增高（P＜0.05）。结论 安罗替尼能够抑制肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭，促进肺癌A549细胞凋亡。     

PUMA 对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：研究外源性 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备 PUMA 基因并插入 pcDNA 3．1（－）质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后 PUMA 蛋白的表达并用 MTT 法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照（SGC-7901）组,空载质粒转染胃癌细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组及重组 PUMA 质粒实验（SGC-7901-pcD-NA3．1-PUMA）组]。结果PUMA 经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 PUMA 表达比较差异无统计学意义（P ＞0．05,相对表达量分别为0．24±0．01和0．23±0．01）,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较 PUMA 表达明显增高（P ＜0．05,相对表达量为0．39±0．01）。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3．1和 SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组的 A 值分别为0．43±0．04、0．46±0．04和0．32±0．03,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较明显下降（均 P ＜0．01）,SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3．1组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论外源性人类 PUMA 基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。     

XIAP在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义

目的探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在成人急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达及其临床意义。方法选取63例ALL患者,仞治者37例[B-ALL,29例,T-ALL8例;ph（＋）-ALL12例,ph（-）-ALL25例]为初治组,血液学完全缓解（CR）者15例（CR组）,复发者11例（复发组）。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测ALL骨髓标本XIAP基因表达水平,以20例非恶性血液病患者骨髓标本为对照组。结果初治组XIAP基因表达水平高于CR组和对照组（P〈0．05）,与复发组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B-ALL患者XIAP表达水平与TAI上比较差异无统计学意义（P〉0．05）;ph（＋）-ALL患者XIAP表达水平高于ph（-）-ALL（P〈0．05）;初治组XIAP高表达者较低表达者CR率明显下降（P〈0．05）。结论ALL患者XIAP基因高表达,提示XIAP可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了ALL的发生发展,为ALL的治疗提供了新思路。XIAP高表达可能是急性淋巴细胞白血病预后不良的指标之一。     

PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

吗啡对 SH-SY5Y 细胞中 HSP70蛋白的调控作用

目的：观察吗啡对人神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞中热休克蛋白70（HSP70）的调控作用。方法将维甲酸诱导分化的 SH-SY5Y 细胞随机分为4组：正常对照组（Con 组）,给予 PBS 作用48 h;吗啡组（Mor 组）,给予吗啡10μmol 作用48 h;吗啡＋纳络酮组（Mor＋Nal 组）,给予纳洛酮100μmol 作用30 min,之后给予吗啡10μmol 作用48 h;纳络酮组（Nal 组）,给予纳洛酮100μmol 作用48 h。采用免疫印迹方法检测各组 HSP70蛋白表达水平。结果与 Con 组比较,Mor 组 SH-SY5Y 细胞中 HSP70蛋白表达水平显著升高（P ＜0．001）;与 Mor 组比较,Mor＋Nal 组、Nal 组 SH-SY5Y 细胞中 HSP70蛋白表达水平均明显抑制（P ＜0．01或 P ＜0．001）。结论吗啡对 HSP70蛋白表达具有促进作用。     

重组人BMP-2对人肝癌SSMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法以人肝癌SMMC-7721细胞株为研究对象,取对数期生长的SMMC-7721细胞随机分为4组：rhBMP-2200、400、600ug·L。组和对照组。rhBMP-2200、400、600ug·L。组分别加入rhBMP-2200、400、600ug·L-1,对照组加入2mLRPMI1640培养基。分别于12、24、48h后,用细胞划痕法检测细胞体外迁移能力,Transwell小室测定法检测细胞体外侵袭能力。结果rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞迁移率与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,且rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞穿膜数与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24hSMMC-7721细胞迁移率、细胞穿膜数与48h比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,浓度与时间无交互作用。结论BMP-2可增加入肝癌SMMC-7721细胞的侵袭和迁移能力,且呈时间-浓度依赖性;阻滞BMP-2的表达可能成为抑制肝癌转移的一个潜在靶点。     

重组人促红细胞生成素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制研究

目的 探讨重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rh-EPO）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制.方法 将人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞进行培养.传至5～6代,细胞生长状态稳定后,收集人乳腺癌 MDA-MB-231细胞用于MTT实验.采用MTT法检测 5 组（阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组）MDA-MB-231细胞增殖的情况.用10 μmol·L-1p38MAPK抑制剂SB203580、ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125和NF-κB 抑制剂PDTC预处理人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞后,用MTT法检测经100、200、300和400 U·mL-1的rh-EPO（PDTC＋EPO 组、SB203580＋EPO 组、SP600125＋EPO组和U0126＋EPO组）诱导后细胞增殖的情况.结果 阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72 h PI值分别为：1.000 0±1.000 0、1.231 8±0.133 0、1.323 9±0.136 0、1.351 7±0.146 0和1.423 1±0.084 0;96 h PI值分别为：1.000 0±1.000 0、1.352 5±0.036 0、1.359 7±0.112 0、1.387 2±0.063 0和1.410 8±0.060 0.rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72、96 h PI值与阴性对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.PDTC＋EPO 组、SB203580＋EPO 组72、96 h PI值均较EPO组明显降低（均P＜0.05）,SP600125＋EPO组、U0126＋EPO组72、96 h PI值与EPO组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.结论 rh-EPO可能是通过NF-κB、MAPK传导通路发挥效应,促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖.     

SGX523对舌鳞癌 Tca8113细胞增殖与 c-Met 表达的影响

目的：体外观察 SGX523对舌鳞癌细胞株 Tca8113中 c-Met 的表达情况及细胞增殖的影响。方法实验分为2组：对照组（Tca8113＋DMSO）；SGX 组（Tca8113＋不同浓度范围30～600 nmol· L－1的 SGX523）。采用Western blotting 检测不同浓度的 SGX523作用下的 Tca8113细胞中 c-Met、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和 AKT的表达情况，MTT 法检测不同浓度的 SGX523对 Tca8113细胞作用24、48、72 h 后细胞增殖的抑制率。结果与对照组相比，SGX 组在相同时段的 Tca8113细胞的增殖抑制率明显增加（P ＜0．01），表明 SGX523对 Tca8113细胞的增殖抑制作用具有浓度依赖性。在相同浓度（100 nmol·L－1）SGX523作用下，24、48、72 h 的半数抑制率 IC50分别为（60．31±7．11）、（26．71±4．54）、（7．87±4．92）nmol·L－1，组间比较差异有统计学意义（P ＜0．01），表明SGX523对 Tca8113细胞的增殖抑制作用有时间依赖性。对照组细胞抑制率在24、48、72 h 差异均无统计学意义（均 P ＞0．05）。Western blotting 法检测结果显示不同浓度 SGX523的 SGX 组 c-Met、MAPK 和 AKT 蛋白表达都明显下调，与对照组比较差异有统计学意义（均 P ＜0．05），且不同浓度 SGX523的 SGX 组间比较差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论SGX523具有以浓度和时间依赖性方式抑制 Tca8113细胞增殖和下调 c-Met 蛋白表达作用，是一种有前景的舌鳞癌治疗的药物。     

丙泊酚对急性肺损伤大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及 PI3K／Akt 通路的影响

目的：探讨丙泊酚的肺保护作用及其可能作用机制。方法采用尾静脉注射内毒素建立急性肺损伤模型,丙泊酚和 LY294002同样经过尾静脉给药。将 Wistar 大鼠随机分入实验对照组（C 组）、脂多糖组（L 组）、脂多糖＋丙泊酚组（LP 组）和 LY294002组（LY 组）。每组16只,且每组随机选取8只进行肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）的分离。给药前及开始后第3、6和12 h 测定动脉血氧分压（PaO2）,实验结束后观察肺湿／干重（W／D）比值、肺组织病理学检查并进行肺损伤轻重程度评分,同时观察各组大鼠 ATⅡ Akt 活性、Bax 蛋白表达及凋亡率。结果实验前各组 PaO2无明显差异,注射 LPS 后 L 组 PaO2持续下降,和 C 组相比其 PaO2显著降低（P ＜0．05）。实验结束后 L组和 C 组相比其 W／D 比值、肺组织病理学检查评分、ATⅡBax 蛋白表达及凋亡率显著升高（P ＜0．05）,而 ATⅡAkt 活性显著降低（P ＜0．05）。而 LP 组和 L 组相比 W／D 比值、肺组织病理学检查评分、ATⅡBax 蛋白表达及凋亡率显著降低（P ＜0．05）,而 PaO2和 ATⅡAkt 活性显著升高（P ＜0．05）。而 LY 组加入 LY294002后明显抑制丙泊酚以上保护作用。结论丙泊酚具有肺保护作用,且该作用可能与其通过激活 PI3K／Akt 通路而抑制 ATⅡ的过度凋亡作用相关。     

PTEN/NF-κB/Caspase信号通路对K562/ADM细胞阿霉素耐药逆转机制的研究

目的:探讨PTEN/Akt/NF-κB信号通路对阿霉素耐药慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADM细胞耐药逆转的分子作用机制。方法:将携带有野生型PTEN基因及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)或空载体(Ad-GFP)腺病毒转染K562/ADM细胞,在转染3d内联合应用不同浓度阿霉素(ADM),观察PTEN基因对阿霉素的协同抑制作用,根据IC50计算药物逆转倍数。通过MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测转染效率、细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、NF-κB、I-κB、P53基因水平变化,Western blot检测PTEN、Akt、p-Akt、P65蛋白质水平变化。结果:Ad-PTEN-GFP转染与阿霉素联合作用后,K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性增加,细胞增殖明显受抑,凋亡率明显高于Ad-GFP与阿霉素联合作用组,耐药逆转倍数为3.8倍。与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562/ADM细胞3d后PTEN蛋白表达明显增加,p-Akt与P65蛋白表达明显下调,NF-κB mRNA表达水平下调,I-κB mRNA无明显改变,P53 mRNA表达轻度升高、Caspase-3/7活性增强。PTEN mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平负相关(r=-0.968,P<0.05),NF-κB蛋白活性与Caspase-3/7活性负相关(r=-0.986,P<0.05)。结论:野生型PTEN可能通过抑制PI3K/NF-κB/Caspase信号传导通路,逆转K562/ADM细胞的多药耐药。     

氟比洛芬酯术后镇痛对老年患者胃癌根治术后T 细胞亚群及细胞因子的影响

目的：探讨氟比洛芬酯术后静脉镇痛对老年胃癌根治术患者T细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）及细胞因子（IL-6、IL-10）的影响。方法将60例行胃癌根治术的老年患者按随机数字表法分为氟比洛芬酯组（A组）、芬太尼组（B组）和对照组（C组）,每组20例。术后均采用龙怡电子镇痛泵行PCIA。A组：PCIA氟比洛芬酯300mg＋托烷司琼2mg＋生理盐水稀释至100mL;B组：PCIA芬太尼1mg＋托烷司琼2mg＋生理盐水稀释至100mL;C组：生理盐水100mL。分别于麻醉诱导前（T0）、术后24h（T1）、术后48h（T2）、术后72h（T3）使用流式细胞仪测定T细胞亚群的水平。采用酶联免疫吸附实验测定术前、术毕,术后12、24h血浆白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）水平。观察3组患者T0、T1、T2、T3各时间点T细胞亚群的变化,术前、术毕,术后12、24h各时间点IL-6、IL-10的变化及手术时间、麻醉时间、术中出血量、术中输液量及尿量的变化;对A、B组术后6、12、24及48h进行VAS及Ramsay镇静评分,并记录不良反应发生率。结果3组患者手术时间、麻醉时间、术中出血量、输液量及尿量等比较均无统计学意义（均P＞0．05）。B组恶心呕吐、头晕、皮肤瘙痒、嗜睡发生率明显高于A组（均P＜0．05）;呼吸抑制发生率2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。3组患者T1时CD3＋、CD4＋及CD4＋／CD8＋均较T0低（均P＜0．05）;T2时B、C2组CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋仍明显低于T0及A组（均P＜0．05）;A组基本恢复T0水平。T3时A、B2组已恢复到术前水平,C组较术前仍低但与A、B2组比较差异均无统计学意义（均P＞0．05）。3组各时间点CD8＋的变化比较差异无统计学意义（均P＞0．05）。3组患者术前IL-6及IL-10比较差异均无统计学意义（均P＞0．05）。与术前比较：3组患者术毕、术后12、24h的IL-6及IL-10明显升高（均P＜0．05）;C组术毕、术后12、24h的IL-6明显高于A、B组,IL-10明显低于A、B组（均P＜0．05）;术后12hB组IL-6明显高于A组,术后12、24hB组IL-10明显低于A组（均P＜0．05）。结论氟比洛芬酯和芬太尼术后镇痛均能提供良好的镇痛效果,但氟比洛芬酯对机体免疫抑制轻、恢复快,能较好地平衡细胞因子,对机体免疫功能有一定的保护作用。     

miR-381-3p靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法 RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1 mRNA的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic 质粒、miR-control质粒、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞，基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因，双荧光素酶报告检测靶向关系，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹分析检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴细胞瘤2（B-celllymphoma，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein， Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartic acid protease 3，Caspase-3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、p70s6激酶(The p70s6 kinase，p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果 miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达（P < 0.01），而SP1高表达（P < 0.01）；miR-381-3p与SP1 3’UTR区存在结合位点，且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达；过表达miR-381-3p后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01）、Ki67和PCNA蛋白表达明显下调（P < 0.01），细胞凋亡率明显降升高（P < 0.01）、Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调（P < 0.01），mTOR和p70s6k磷酸化明显减少（P < 0.01）；而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01），细胞凋亡率明显增加（P < 0.01），增殖标记蛋白Ki67表达明显下调（P < 0.01），凋亡标记蛋白Cleaved caspase-3表达明显上调（P < 0.01），而SP1蛋白表达无明显变化。结论 miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

布地奈德对慢性鼻-鼻窦炎术后鼻黏膜组织重塑及转化生长因子β1表达的影响

目的：观察布地奈德对不伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎（CRSsNP）术后黏膜组织重塑及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法30例行鼻内镜手术的 CRSsNP 患者术后按随机数字表法分为2组,20例术后应用布地奈德喷鼻（激素组）,10例术后未使用糖皮质激素（对照组）。术后第3个月复查时取筛区黏膜标本。所有标本分别进行 HE 染色、Masson 三色（Masson trichrome,MT）胶原染色及苦味酸-天狼星红染色,观察黏膜上皮损伤、基底膜增厚、细胞外基质（ECM）胶原沉积及成分等情况;免疫组织化学检测黏膜中 TGF-β1的表达情况。结果激素组上皮细胞损伤比对照组明显减轻（P ＜0．05）,基底膜厚度减少[（7．62±2．83）μm 比（12．17±4．34）μm,P ＜0．01];激素组黏膜固有层内蓝色胶原所占面积百分比为（7．41±1．93）％,明显少于对照组的（18．54±6．37）％,（P ＜0．01）,沉积的胶原以Ⅰ型胶原为主,Ⅲ型、Ⅳ型胶原较少;激素组鼻黏膜 TGF-β1表达较对照组明显减少（138．78±5．24比165．58±7．62,P ＜0．01）。结论及时应用布地奈德能在一定程度上抑制 CRSsNP 术后鼻黏膜组织重塑,降低 TGF-β1的表达可能是其中机制之一。     

肿瘤抑制基因 PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的：观察肿瘤抑制基因 PTEN 对人气道平滑肌细胞（HASMCs）迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN 腺病毒转染体外培养的 HASMCs（Ad-PTEN 组）,并与携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒空载体（Ad-GFP组）和空白对照（MOCK）组对比,采用 MTS 测定细胞增殖、Transwell 法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测 PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK 蛋白的表达。结果Ad-PTEN 组的吸光度（A）值和每单位面积迁移的细胞数显著低于 Ad-GFP 及 MOCK 组（均 P ＜0．05）,Ad-GFP 和 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,提示过表达 PTEN 基因能抑制 HASMCs 的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN 组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而 Ad-GFP、MOCK 组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与 Ad-GFP 及 MOCK 组比较,Ad-PTEN 组 p-Akt 表达水平和 FAK 蛋白的磷酸化水平显著下调（均 P ＜0．05）,Ad-GFP及 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,说明过表达 PTEN 能下调 Akt 蛋白和 FAK 蛋白的磷酸化水平。结论过表达 PTEN 可能通过下调 p-Akt 及 p-FAK 的表达,抑制 HASMCs 的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。