亲代大鼠转Bt基因水稻暴露对其子代部分早期生理和神经发育指标的影响

研究亲代大鼠转Bt基因水稻(TT51大米)暴露对其子代部分早期生理和神经发育指标的影响。方法 亲代大鼠随机分为3组,每组雄性15只,雌性30只,分别给予按60%比例掺入市售大米、明恢63大米和TT51大米的饲料,连续喂养70d后同组雄雌大鼠交配并产生子代,孕期和哺乳期各组母鼠继续给予相应受试大米的饲料。亲代大鼠每周称量和记录体重及食物消耗量,同时观察动物生长发育状况,观察和记录亲代雌鼠生殖指标。仔鼠出生后记录0、4、7、14及21d体重,并观察仔鼠部分生理指标发育情况,同时进行听觉惊愕等神经发育指标的测定。断乳后,对各试验组部分仔鼠取脑等主要脏器进行病理检查。结果 TT51大米组与明恢63大米组和市售大米组比较,亲代大鼠一般毒性及生殖指标间差异均无统计学意义;子代部分生理发育指标和神经发育指标差异均无统计学意义;各试验组仔鼠脏器病理检查均未见有意义的变化。结论 未见亲代大鼠转Bt基因水稻暴露对其子代早期部分生理和神经发育指标有不良影响。     

转Bt基因大米暴露对亲代雌性大鼠免疫系统影响的研究

目的 研究转Bt基因大米(TT51)对亲代雌性大鼠免疫系统的影响.方法 试验分为转Bt基因大米组(TT51组)、亲本明恢63大米组(明恢63组)和市售大米组,各组大米按60％的比例掺入饲料进行全食物喂养.Wistar雌、雄大鼠喂养10周后进行交配繁殖,对亲代雌性大鼠于断乳后进行免疫毒性评价.指标包括血常规、全血淋巴细胞分型、脾细胞的NK活性检测、刀豆蛋白A诱导淋巴细胞转化试验、抗体生成细胞检测以及淋巴结的淋巴细胞分型.结果 脾淋巴细胞分型中,TT51组的Th细胞、T细胞比例与市售大米组比较差异有统计学意义(P＜0.01),明恢63组的B细胞、T细胞比例与市售大米组比较差异有统计学意义(P＜0.01);颈部淋巴结淋巴细胞分型中,TT51组的Th细胞比例与市售大米组比较差异有统计学意义(P＜0.01);各组其他功能性试验结果之间差异无统计学意义.结论 转Bt基因大米(TT51)对亲代雌性大鼠免疫系统功能未见不良影响.     

转人乳铁蛋白基因大米的慢性毒性研究

目的 观察转人乳铁蛋白(hLF)基因大米是否具有慢性毒性作用.方法 初断乳的180只SD大鼠按性别、体重随机分为3组:转基因hLF基因大米组、亲本大米对照组和AIN-93对照组,分别饲喂相应饲料12个月.观察大鼠的体重、进食量、血常规、血生化情况,实验末期处死动物,称量脏器重量并对脏器进行病理学检查.结果 转hLF基因大米组血常规(LYM％、GRN％)、血生化(ALT、AST、GLU)在个别时间点上与亲本对照组或AIN-93对照组存在显著差异(P＜0.05);其他观察指标与两个对照组均无显著差异.结论 现有实验结果不能证实转hLF基因大米对大鼠有慢性毒性作用.     

杭菊花乙醇提取物对大鼠生殖发育毒性研究

目的研究杭菊花乙醇提取物(CME)经过亲代、宫内、哺乳期和断乳后持续暴露对子代的影响。方法设对照组和CME低、中和高剂量组,CME掺入饲料,剂量分别为0、1、3、9 g/kg BW;参照OECD TG 443开展一代延长试验,每组孕鼠20只及其子鼠每组40只(雌雄各半),子鼠断乳后持续给予CME 13周,测定生长发育、生殖发育、血象、血生化指标,做组织病理学检查。结果 CME高、中剂量组子鼠睁眼时间明显迟于对照组;低剂量组子代雌性大鼠出生后(PND)56～112天体质量明显高于对照组,子代雌性大鼠CME高、低剂量组红细胞计数(RBC)和血红蛋白浓度(HGB)均降低,CME高剂量组谷丙转氨酶(ALT)升高,高、中剂量组谷草转氨酶(AST)、血磷(P)升高,CME各剂量组血糖(GLU)均降低、乳酸脱氢酶(LDH)均升高;子代雄性大鼠CME高、低剂量组血清钾(K~+)降低;子代雌雄大鼠CME高剂量组脾脏/体质量系数均高于对照组;以上均差异有统计学意义(F=2.818～42.75,P0.05)。结论低剂量CME促进子代雌性大鼠体质量生长发育,降低子代雌性大鼠的血糖,影响RBC、HGB和LDH;高、中剂量CME影响子代大鼠发育和子代雌性大鼠的肝功能,高剂量CME影响子代雌雄大鼠脾脏/体质量系数。     

转cry2A*基因大米T2A-1慢性毒性试验研究

目的通过掺入饲料的方式连续给予SD大鼠转cry2A~*基因大米T2A-1 52周,为其食用安全性提供基础毒理学数据。方法 144只无特定病原体(SPF级)SD大鼠按体质量随机分为三个组,每组雌雄各半。根据大米营养成分测定结果,将T2A-1大米及其亲本明恢63大米均按最大比例掺入饲料中,成长期和维持期分别为60.75%、66.75%,同时设置AIN-93配方饲料组作为营养对照。连续喂饲52周;试验期间观察并记录一般状况、体质量、摄食量等,并开展血液、血生化、尿液常规检测;试验结束时处死动物进行病理学检查等。结果转基因和亲本大米的主要营养成分含量相近。52周试验周期中,各组大鼠一般状况均良好,死亡率和肿瘤发生率组间差异无统计学意义(P0.05)。与非转基因组比较,转基因组大鼠体质量、进食量、食物利用率差异无统计学意义(P0.05);血液、血生化、尿液检测未发现有毒理学意义的改变;各组组织病理学检查均未发现有意义的病理学改变。结论在本试验条件下,转cry2A~*基因大米连续喂饲SD大鼠52周,未发现其对实验动物产生不良的影响。     

重组人乳铁蛋白对子代大鼠免疫功能影响的一代繁殖毒性扩展试验

目的研究转基因牛乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白(rh LF)对子代大鼠免疫功能的影响。方法参照一代繁殖毒性扩展试验指南设计试验,将Wister大鼠分为对照组(酪蛋白)、重组人乳铁蛋白组,每组30只雌鼠、15只雄鼠;按照蛋白占比为20%的比重掺入饲料进行全食物喂养。雌/雄大鼠喂养相应饲料两周后进行交配,各组雌鼠在交配期、妊娠期和哺乳期继续给予相应饲料,子代大鼠从断乳到处死继续给予相应饲料。子代大鼠分别在PND0(出生后0天)、PND21(出生后21天)和PND56(出生后56天)进行免疫功能评价。结果重组人乳铁蛋白组与对照组比较,重组人乳铁蛋白组子代大鼠血常规、血生化和淋巴细胞分型结果未见明显改变;溶血空斑试验(PFC)、淋巴细胞增殖试验及自然杀伤细胞(NK细胞)活性试验指标结果均差异无统计学意义(P0.05)。结论在本研究的试验条件下,重组人乳铁蛋白对子代大鼠免疫功能未见不良影响。     

海带多糖干预对慢性电离辐射损伤后雄性大鼠生殖功能的影响

目的：探讨海带多糖(LJP) 干预对受到慢性局部电离辐射损伤的雄性大鼠生殖功能的影响。方法：将Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和LJP 组;LJP 组给予LJP,其余各组以等量生理盐水灌胃;除对照组外,各组在适应性饲养7d 后进行60Coγ射线局部照射,每周5 次,4 周20 次,总剂量2.3Gy/ 只。分别于停止照射后第1、7、14 天观察其交配能力;处死大鼠,测定其体质量与睾丸脏器系数、血清性激素(LH、FSH、T、E2)水平、精子数量及其存活率。结果：LJP 组与模型组比较,脏器系数提高,性激素分泌水平得到改善,精子数量及其存活率提高,交配能力增强。结论：LJP 对慢性局部电离辐射造成大鼠生殖功能的损伤有一定保护作用,对雄性大鼠生殖功能的自然恢复具有促进作用。     

芹菜素的急性毒性、遗传毒性及亚慢性毒性试验研究

目的 研究芹菜素的安全性,为其合理开发利用提供科学依据.方法 根据《食品安全性毒理学评价程序和方法》,进行了芹菜素急性毒性试验、小鼠骨髓微核实验、Ames试验、小鼠精子畸变试验、大鼠90天喂养试验.结果 芹菜素大鼠急性毒性的MTD大于8 g/kg BW,遗传毒性试验结果为阴性,未见芹菜素对大鼠体重、摄食量、食物利用率、血常规、血生化、尿常规有生物学意义的影响.芹菜素对大鼠脏器无明显影响.结论 芹菜素属实际无毒物,无遗传毒性,芹菜素的大鼠90天喂养实验的NOAEL为8 g/kg BW.     

转Bt玉米暴露对亲代及子代大鼠免疫细胞分型及细胞因子的影响

为研究转苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因抗虫玉米长期食用对大鼠免疫的影响,以其亲本非转基因玉米饲料及商业饲料为对照,分别采用流式细胞术及液相芯片法检测喂养90 d后亲代及子代刚断乳大鼠外周血、脾脏免疫细胞分型及相关血清细胞因子的表达。结果发现,转Bt基因抗虫玉米饲料组亲代大鼠外周血和脾脏及子代脾脏各淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+、TCRαβ~+、TCRγδ~+)的细胞数量比例及亲代血清中10种细胞因子表达水平均与非转基因玉米饲料组无显著差异(P0.05);子代外周血B淋巴细胞数量比例显著增高,巨噬细胞炎症蛋白-1α、单核细胞趋化因子-1β、白细胞介素-5表达水平明显降低(P0.05)。结果表明:转Bt基因抗虫玉米暴露90 d对亲代大鼠免疫系统影响不大;对子代刚断乳大鼠的细胞免疫及体液免疫有一定的影响。     

大豆异黄酮对不同发育期雌性大鼠生殖系统毒性作用的研究

为研究不同发育期雌性大鼠暴露于大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)对生殖系统的影响,并确定敏感期及有害作用剂量,在孕鼠妊娠第12～18天灌胃给予SIF(胎儿期暴露),母鼠分别在仔鼠出生后第5～10天和第15～20天灌胃给予SIF(新生儿期暴露和婴儿期暴露),仔鼠在出生后第25～30天灌胃给予SIF(青春前期暴露)。SIF的剂量分别为0(对照)、10、50、100、150、200mg/kgBW。观察雌性仔鼠生殖系统发育指标的近期和远期(出生后70d)改变。对近期的影响:(1)胎儿期暴露:100、150、200mg/kgBWSIF组肛殖距(anogenital distance,AGD)显著增大,200mg/kgBWSIF组阴门开张时间(Vaginal opening,VO)提前,150、200mg/kgBWSIF组出生后第14天的卵巢/体重比显著增加;(2)新生儿期暴露:150、200mg/kgBWSIF组出生后第11天的子宫/体重比和卵巢/体重比显著增加,200mg/kgBWSIF组动情周期延长;(3)婴儿期和青春前期暴露于SIF对生殖系统发育各指标无明显影响。对远期的影响:胎儿期、新生儿期、婴儿期和青春前期暴露于SIF对出生后70天的各指标亦无明显影响。150mg/kgBWSIF可对仔代雌性大鼠表现出明显的不良作用,胎儿期和新生儿期是大豆异黄酮生殖毒性的两个敏感期。     

长白山有机灵芝破壁孢子粉的毒理学安全性评价

目的对长白山有机灵芝破壁孢子粉作为保健食品进行毒性实验研究。方法采用小鼠急性毒性试验、遗传毒性试验,以及大鼠30 d喂养实验来评价长白山有机灵芝破壁孢子粉的毒理学安全性。结果样品给药后,ICR种雌、雄小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于20.00 g/kg·bw,属于无毒级;遗传毒性试验结果中Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验均表现为阴性;大鼠30 d喂养实验中,动物生长发育良好,各剂量组体重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量和系数以及病理组织学等指标均未见毒性作用。结论长白山有机灵芝破壁孢子粉均未见明显毒副作用,具有服用安全性。     

牡蛎低聚肽对CTX诱导的PADAM大鼠性功能及生殖功能的干预作用

目的:探讨不同剂量的牡蛎低聚肽(OOP)对男性雄激素部分缺乏综合征(PADAM)大鼠性功能和生殖功能的干预作用。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、PADAM组(PC)、PADAM+低、中和高剂量OOP组(PLO、PMO、PHO)5组。除NC组外,其余大鼠在利用环磷酰胺诱导PADAM形成的同时补充不同剂量的OOP,6周后测定血清睾酮(TT)、游离睾酮(FT)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和睾丸雄激素受体(AR)含量、捕捉潜伏期、交配潜伏期、捕捉次数、交配次数以及附睾中的精子数量、活率和活力。结果:与NC组相比,PC组血清TT、FT、LH含量、交配次数以及精子数量、活率和活力均显著降低(P<0.05),捕捉潜伏期和交配潜伏期显著延长(P<0.05)。与PC组相比,PLO组捕捉潜伏期显著缩短(P<0.01)、捕捉和交配次数显著增多(P<0.01);除PMO组精子数量无显著性增加外(P>0.05),PMO和PHO组血清TT、FT、FSH、LH和睾丸AR含量以及捕捉和交配次数、精子数量、活率和活力显著增加(P<0.05),捕捉和交配潜伏期显著缩短(P<0.05),且PMO和PHO组血清TT、FSH含量和交配次数以及PHO组血清LH和睾丸AR含量显著高于PLO组(P<0.05)。结论:补充牡蛎低聚肽能够通过改善HPG轴有效防止CTX引起的PADAM的形成,显著改善性功能和生殖功能,并具有一定的剂量效应,以中、高剂量的效果最佳。     

糙米酵素红曲酒的小鼠口服毒理学安全性评价

目的:研究糙米酵素红曲酒的引用安全性.方法:依据《保健食品检验与评价技术规范》,对糙米酵素红曲酒进行了急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验、小鼠30d喂养试验.结果:糙米酵素红曲酒对雌雄小鼠的急性经口的最大耐受剂量(MTD)均大于20g/kg体重;小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验均为阴性;小鼠30d喂养试验中,试验动物生长情况良好,体重检查、血清检查、脏体比结果与对照组相比,均无明显差异.结论:糙米酵素红曲酒属实际无毒物质,未显示有遗传毒性,初步估计其未观察到损害作用的剂量(NOAEL)为20g/kg体重.     

Real-time PCR method for detection of the transgenic rice event TT51-1

The insect-resistant transgenic rice event TT51-1 (synonym BT63) has been found illicitly planted and distributed for years although it has never been approved for commercial cultivation in any country up to now. The purpose of this study was to establish a detection method that is specific for this transformation event. The event-specific PCR method produces an amplicon of 120 basepairs (bp) based on the revealed 3′ junction sequence with a limit of detection (LOD) and a limit of quantification (LOQ) being approximately 5 and 10 initial template copies, respectively. Two mixed rice samples with known TT51-1 contents were used to verify the developed real-time PCR system, from which the expected results were observed.     

人参茎叶总皂苷对幼年雄性大鼠生殖系统的影响及作用机制

目的：研究人参茎叶总皂苷对幼年雄性大鼠生殖系统的影响及作用机制。方法：将40 只SD幼年大鼠分为对照组及人参茎叶总皂苷低、中、高剂量给药组,灌胃两周后处死,用放射免疫法检测大鼠血清中睾酮的含量,用酶联免疫试剂盒测量大鼠血清中双氢睾酮、促黄体激素和促卵泡素的含量,称量大鼠的睾丸质量,计算体质量增加量、睾丸脏器系数和精子密度。用高效液相色谱仪对比分析高剂量组大鼠血清和对照组血清中成分的差异。将高剂量组大鼠血清和人参茎叶总皂苷溶液,按0%（对照组）、5%、10%、15%的体积分数分别加到培养的大鼠睾丸间质细胞中,用台盼蓝染色法和噻唑蓝法检测细胞存活率和活力,用放免法检测睾丸间质细胞培养液中睾酮的含量,用大鼠环磷酸腺苷酶联免疫试剂盒检测睾丸间质细胞内环磷酸腺苷的变化。用SPSS软件分析各组间差异。结果：人参茎叶总皂苷能剂量依赖性地显著降低幼年大鼠的血清睾酮水平（P＜0.01）、双氢睾酮（P＜0.01）水平和精子密度（P＜0.01）。与对照组相比,高剂量组大鼠血清中含有5 种成分是对照组中所没有的,并且人参茎叶总皂苷给药组的睾丸质量（P＜0.05）和体质量增加量（P＜0.01）显著降低,血清促黄体激素（P＜0.01）、促卵泡素（P＜0.01）和睾丸脏器系数显著上升（P＜0.05）。人参茎叶总皂苷及其含药血清能抑制睾丸间质细胞内内环磷酸腺苷水平和睾酮的合成。结论：人参茎叶总皂苷可能通过抑制蛋白激酶A途径降低大鼠血清中睾酮的生成,从而抑制睾丸发育和精子生成,影响雄性幼鼠生殖系统的发育。     

大鼠繁殖试验评价牛初乳对生殖发育的影响

目的通过繁殖试验观察牛初乳对亲代大鼠生殖及F1代仔鼠发育状况的影响,评价牛初乳的生殖发育安全性。方法选用4周龄SD大鼠,牛初乳组在交配前期、宫内暴露期、哺乳期和仔鼠性成熟期(受孕前11周至仔鼠性成熟),用含10%牛初乳的饲料喂饲亲代和子代大鼠,对照组饲喂普通饲料,检测亲代体重、摄食量、动情周期、繁殖力指数、怀孕指数、孕周、每窝活产数、激素水平、生殖器官及精子质量;子代出生体重及身长、性别比、4日生存率、阴道开口时间、包皮分离时间等。采用两独立样本t检验的统计方法对均数进行比较,使用SPSS 13.0统计分析软件处理数据。结果与对照组相比,牛初乳对亲代的动情周期、繁殖力指数、怀孕指数、孕周、每窝活产数、子代性别比、出生身长、4日生存率均无显著影响,但亲代雄鼠左侧储精囊脏体比降低,精子总数提高(P<0.05),且牛初乳组亲代雌、雄大鼠血液中的促黄体生成素(LH)显著降低(P<0.05),雌鼠血液中催乳素(PRL)和孕酮(P)均显著低于对照组(P<0.05)。结论一代繁殖试验未发现牛初乳对生殖发育能力有显著影响,仅见亲代储精囊、精子总数和激素水平改变,其长远影响需二代繁殖试验进一步验证。     

Significance of incorporating measures of sperm production and function into rat toxicology studies

The rat is the preferred species for reproductive toxicity testing. The inclusion of measures of rat sperm quality, such as motility and morphology, into reproductive test protocols often increases the sensitivity of the test to detect effects, and provides the toxicologist and risk assessor with valuable information about the nature of the reproductive toxicity of the test substance. Technical advances in computer-aided sperm analysis have made it possible to evaluate motion characteristics of rat spermatozoa. This technology can provide an objective means of classifying the motion of rat spermatozoa as progressive or non-progressive, as required in test protocols. More specific tests of rat sperm function are being applied for the purpose of evaluating modes and mechanisms of toxicant action. Computer-aided sperm analysis can be used to evaluate sperm motion during cultures that support sperm capacitation and to identify hyperactivated spermatozoa. Under the same culture conditions, acrosome-specific stains can be used to identify effects of toxicants on the acrosome reaction. These approaches, in combination with in vitro fertilization in rats, can pinpoint sperm functional deficits and thereby assist the toxicologist in addressing hypotheses regarding the cellular-molecular bases of toxicant-induced male infertility.