酶联免疫法检测乳与乳制品中的氟喹诺酮类药物

研究酶联免疫法检测乳及乳制品中氟喹诺酮类药物的残留,氟喹诺酮EIA微孔板含12个板条,每个板条8孔,用羊抗兔抗体IgG包被.特异性抗体(兔多克隆抗喹诺酮类抗体)、辣根过氧化物酶标记的诺氟沙星(酶结合物)、诺氟沙星标准品或样品被加入到微孔后,经过1小时孵育,特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗兔抗体IgG上,与此同时,游离的氟喹诺酮类(存在于标准品溶液或样品中)和酶结合物相互竞争与特异性抗体的结合位点结合(即竞争性酶联免疫检测).然后在洗涤过程中除去未结合的酶结合物试剂,加入色原底物(四甲基联苯胺TMB),结合的酶结合物将无色的底物转化为蓝色的产物.滴加终止液终止显色反应,颜色由蓝色变为黄色,在450nm波长下检测吸光度,吸光度值与样品中氟喹诺酮类浓度成反比.本方法单样检测时间为120分钟,具有简便、快速、灵敏等特点,适用于乳与乳制品中氟喹诺酮类残留的检测,该方法为半定量检测检测结果超出相应产品的质量标准,必要时,需用国家标准中规定的仲裁方法或仪器法进行验证.     

酶联免疫法检测乳与乳制品中的β-激动剂

β-受体激动剂类药物在动物饲养过程中具有促进动物生长和动物营养再分配的功效,但其易在动物体内及可食性组织中残留,影响动物源性食品安全并危害人体健康.β-受体激动剂类药物在我国和欧盟等国家和地区已被禁止用作动物促生长剂β-激动剂,本方法使用β-激动剂EIA微孔板含12个板条,每个板条8孔.用羊抗兔抗体IgG包被.特异性抗体(兔抗沙丁胺醇和兔抗克伦特罗)、辣根过氧化物酶标记的沙丁胺醇(酶结合物)和沙丁胺醇标准品或样品被加入到微孔后,经过1h孵育,特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗兔抗体IgG上,与此同时,游离的β-激动剂(存在于标准溶液或样品中)和酶结合物相互竞争与特异性抗体的结合位点结合(即竞争性酶联免疫检测).然后在洗涤过程中除去未结合的酶结合物试剂,加入色原底物(四甲基联苯胺TMB),结合的酶结合物将无色的底物转化为蓝色的产物.滴加终止液(硫酸)终止显色反应,颜色由蓝色变为黄色,在450nm波长下检测吸光度,吸光度值与样品中β-激动剂浓度成反比.本方法为半定量检测,乳及乳制品中β-激动剂灵敏度是0.06ng/mL(ppb),本方法为快速检测方法,检测结果超出标准,必要时,需用国家标准中规定的仲裁方法进行验证.     

酶联免疫法与乳及乳制品中抗生素残留的检测

对酶联免疫检测技术(ELISA)做了介绍,并对该技术在乳及乳制品抗生素残留检测的应用进行了评述.阐述了该项技术在乳及乳制品抗生素残留检测中的应用前景.     

酶联免疫法检测乳制品及谷物中赭曲霉毒素A

研究采用酶联免疫技术检测谷物及添加谷物的牛奶中赭曲霉毒素A的含量特异性抗体(鼠抗单克隆赭曲霉毒素A抗体),赭曲霉毒素A标记的酶结合物和赭曲霉毒素A标准品或样品加入到微孔后,特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗兔抗体IgG上,与此同时,游离的赭曲霉毒素A(在标准溶液或样品中)和酶结合物与特异性抗体竞争性结合.孵育后,在洗涤步骤中除去非结合(酶标记)试剂.加入色原底物(四甲基联苯胺),结合的酶结合物可将无色的色原转化成为有色的产物.加入硫酸,终止底物反应,在450nm波长检测吸光度值.本方法为快速检测方法,必要时,需用国家标准中规定的仲裁方法进行验证.     

庆大霉素酶联免疫检测法研究

本实验采用戊二醛方法合成庆大霉素的免疫原,利用凝胶电泳对免疫原进行鉴定。使用该免疫原免疫兔子,得到抗血清测出效价高于512000,对抗血清进行纯化测出检测限达0.1ng/ml,建立庆大霉素的免疫检测方法。     

乳与乳制品中L-羟脯氨酸检测技术的研究进展

近几年来由于一些企业为降低生产成本,常常会在乳与乳制品中掺假,这种行为严重影响了乳品加工企业的产品质量,同时也对消费者的身体健康造成了严重损害。在各种乳与乳制品掺假方法中,添加蛋白类掺假物如水解蛋白是比较常见的方法。L-羟脯氨酸是水解蛋白特有的氨基酸,而乳蛋白质中是不含L-羟脯氨酸的,因此检测乳与乳制品中是否含有L-羟脯氨酸是判断乳与乳制品是否掺假的一个重要手段之一。目前,针对L-羟脯氨酸的检测方法主要有分光光度法、液相色谱法、氨基酸分析仪法、液相色谱质谱法等。本文综述了近几年来国内外乳与乳制品中L-羟脯氨酸的检测技术及其研究进展,对上述几种检测方法各自的优缺点进行了详细的分析,同时对未来的L-羟脯氨酸检测技术发展进行了展望。     

乳与乳制品中锡质量浓度检测方法研究

针对锡器具乳与乳制品,建立相应的锡检测方法,为食品安全检测作检测依据。用微波消解处理乳与乳制品样品,原子荧光法测定锡;通过优化还原剂浓度、载流液等实验条件,能达到比较理想的检测乳与乳制品中锡的质量浓度。结果表明,在最优实验条件下,仪器的检出限为0.060μg/L;在0~200μg/L质量浓度范围中,锡的线性相关系数均大于0.999。采用锡标准溶液及不同种类样品进行了精密度测定,结果的相对标准偏差均小于10%,加标回收率在88.7%~115%之间,回收率的RSD皆小于10%。该方法切实可行、样品前处理简单、结果稳定性好,适用乳与乳制品中锡质量浓度的检测。     

乳与乳制品术语解释

1 牛乳或羊乳(Cow milk or Goatmilk) 母牛或母羊分娩之后,为了供给仔牛(或羊)营养而于乳腺生成分泌之物质。 2 初乳(Colostrum) 是指奶畜产犊(羔)后一周以内分泌的乳汁。 3 末乳(Late-Lactatio(?)milk) 产犊后八个月泌乳量显著减少,直到干     

乳与乳制品中甜蜜素检测方法的研究

使用毛细管色谱柱-气相色谱仪检测乳与乳制品中甜蜜素质量浓度。将样品称取后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白,提取上清液加入硫酸和亚硝酸钠冰浴衍生,用正己烷提取后,用气相色谱仪氢火焰离子化检测器检测。该方法检测甜蜜素回收率范围在82.37%~109.15%之间,相对标准偏差在2.43%~5.02%之间,最低检出限为0.004 g/kg。该方法检测结果准确可靠、重复性好,可进行乳与乳制品中甜蜜素质量浓度的检测。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫检测方法的建立

应用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体12D1建立了竞争间接ELISA方法,用于检测小麦、玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为20ng/mL,检测范围为20￣460ng/mL。用蒸馏水提取掺合DON(250￣4000ng/g)的小麦样品,回收率为82.1%￣96.6%,变异系数为0.6%￣7.1%。     

基于单克隆抗体的食品中乳酸链球菌素酶联免疫方法

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0.05μg/mL~5.4μg/mL(y=-0.12ln(x)+0.385,R~2=0.98)。该方法适用于热加工样品的检测,前处理简单,整个检测过程仅需60min,为乳酸链球菌素速测提供了有力的技术手段。     

一种喹诺酮类药物的酶联免疫快速检测试剂盒的研制

利用酶联免疫技术研制了一种快速检测鱼肉中的喹诺酮类药物试剂盒,经过测试,该试剂盒对鱼肉样本中氧氟沙星、环丙沙星、氨氟沙星等3种喹诺酮类药物的检测限为1μg/kg,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能够在4℃条件下保存12个月,37℃条件下保存7d。喹诺酮类药物单克隆抗体与氧氟沙星、环丙沙星、氨氟沙星的交叉反应率均为100%。该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

双抗体夹心ELISA法测定食物中牛奶过敏原蛋白成分

建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定食物中牛奶过敏原成分.通过提取牛奶过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗牛奶过敏原的多抗,免疫印迹法鉴定多抗与牛奶过敏原蛋白的反应,并建立双多抗央心ELISA法.结果表明,该法检测牛奶过敏原蛋白的最低检出限为25μg/L,标准曲线在25～1000μg/L范围内线性良好;同时对市场上食物标签标注含有牛奶、未舍牛奶成分以及标注不详共12种食品进行检测,结果10种食品检测结果与食物标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果一个呈现阳性,一个呈现阴性.这说明本方法对于未标注牛奶过敏原成份的食品检测具有一定的实际应用价值.     

酶联免疫吸附法快速检测畜禽产品中西马特罗药物残留

为建立高效的西马特罗(Cimaterol, CIM)检测方法,试验用以重氮化法合成的西马特罗完全抗原免疫新西兰大白兔,提取兔脾细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,设计兼并引物,扩增兔源抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过45 bp的连接肽(Linker)连接成VH-Linker-VL并大量扩增;利用噬菌体表面展示技术将单链抗体(ScFv)片段与噬菌体展示载体pCANTAB-5e连接,电转化至大肠杆菌TG1感受态细胞,得到兔源噬菌体ScFv抗体库。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)判断是否偶联成功,用紫外扫描(UV)及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。将富集的抗体库侵染对数期大肠杆菌进行抗体库滴度测定合成抗体库的质量进行鉴定,对抗体库进行三轮淘选,取最优的CIM-ScFv进行氨基酸序列分析。结果表明：CIM-BSA及CIM-OVA偶联比分别为8:1及10:1,CIM-BSA免疫原免疫新西兰大白兔,间接ELISA测得免疫血清校价为1:32000,免疫血清半数抑制浓度为9.77 ng/mL, 曲线的拟合度为0.997。抗西马特罗兔源噬菌体ScFv免疫库的插入率为92%,库容为1×10_¹⁰ pfu,多样性为83.3%,经过4轮淘选,获得一株与CIM有结合活性的噬菌体ScFv菌。以上结果表明西马特罗完全抗原的合成效果良好,可用于建立西马特罗检测方法,兔源噬菌体抗体库为快速获得CIM单链抗体奠定基础,为西马特罗快速检测提供新思路。     

检测乳粉中克罗诺杆菌属穆汀斯克罗诺杆菌的双抗夹心ELISA方法的研究

获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过17h增菌,全脂乳粉染菌样品中的穆汀斯克罗诺杆菌的检出限为0.1cfu/g。该方法为快速检测乳粉中穆汀斯克罗诺杆菌的污染奠定了基础。     

呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的研究

建立了呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测法。用活化酯法将卵清蛋白和半抗原连接成为包被原,对包被原和单克隆抗体的稀释倍数,封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗孵育时间和显色反应时间进行优化,同时通过灵敏度、特异性、精密度和准确度等指标进行方法学评价。结果显示,最佳条件为:包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为800倍和6 400倍,封闭液是1%脱脂乳,竞争时间是60 min,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗孵育时间是45 min,显色时间是15 min。通过建立的标准曲线计算得到线性方程是Y=-0.253X+1.336(R2=0.995),IC50是2.015 ng/m L,线性范围是0.131~30.911 ng/m L,空白猪肉添加回收率是84.8%~90.3%,批内和批间变异系数分别为3.3%~4.1%和4.6%~6.7%。此方法特异性强,准确性、精密度和重现性均良好,可用于动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的快速筛查。     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白（TBt）并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法（ELISA）用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16¹6μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。