枸杞多糖流变学特性研究

流变学特性是多糖的重要性质,它间接反映了多糖的结构变化。采用黏度计测定了枸杞多糖的黏度,研究了多糖浓度、温度、热处理时间、pH 值、NaOH、抗氧化剂VC、氧化剂H2O2 以及金属离子对枸杞多糖黏度的影响。实验结果表明,多糖浓度、温度、热处理时间、pH 值、NaOH、抗氧化剂VC、氧化剂H2O2 以及金属离子对枸杞多糖黏度都有不同程度的影响。     

枸杞不同生长期多糖的理化特性及结构分析

以不同生长期的枸杞为试材,检测其生长过程中的理化特性,并对枸杞多糖进行纯化、分析结构。用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法、气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用仪、傅里叶红外光谱仪、综合热力分析仪和扫描电子显微镜对不同生长期枸杞多糖的分子质量、单糖组成、糖链结构、热特性进行测定和表面形态的观察。HPLC结果显示:不同生长时期枸杞多糖均为小分子多糖;GC-MS结果显示:枸杞多糖主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖组成。傅里叶红外光谱结果表明:纯化后的枸杞多糖的结构中有β-吡喃环,且为酸性多糖。热分析得知各个生长期的多糖热特性相似又各有差异,整体可看作有2次质量损失,先是水分脱出造成,然后是多糖结构裂解。扫描电子显微镜的观察结果表明多糖结构在各个时期不同,由最初的致密片层逐步变化至松散山峰状直至完全崩塌。     

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察

目的：研究灵芝肽(Ganoderma lucidum peptides,GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法：HepG2细胞用含不同浓度GLP培养基培养12、24、36、48、60h,GLP分为5个浓度梯度,分别为0.25、0.5、1、2、4mg/ml,采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞生长抑制作用,用可见光显微镜、荧光显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：MTT法显示灵芝肽能显著抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且存在浓度及时间依赖性。镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变：细胞染色质浓缩,细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成;LSCM观察到胞内钙离子浓度明显增加。结论：0.25～4.0mg/ml的GLP体外可显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,存在量效关系和时效关系,能诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并且提示细胞内钙离子浓度的升高可能是细胞凋亡的机制之一。     

枸杞多糖对小鼠肠道上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量、分布及对IL-2水平影响

为了研究枸杞多糖(LBP)对肠黏膜屏障结构的影响,给10只C57BL/J健康小鼠连续灌服枸杞多糖7d后,显微镜观察小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、杯状细胞(GC)数量和分布变化及测定肠黏膜白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平。结果表明,应用枸杞多糖小鼠的肠黏膜IEL数量和GC的数量明显增加,且有向肠内层移动趋势,同时肠黏膜IL-2水平升高。证实枸杞多糖在一定程度上可促进小鼠小肠黏膜屏障结构趋于完整并提高其免疫功能。     

枸杞硒多糖的合成及对人体肝癌HepG2细胞增殖的体外抑制作用评价

根据有机硒化合物的合成方法,本文以枸杞多糖和亚硒酸钠为原料,采用响应面法优化枸杞硒多糖的工艺条件。利用原子荧光、体外化学反应等分析技术测定了枸杞硒多糖中的硒含量,并用MTT法对枸杞硒多糖抑制人体肝癌细胞增殖的活性进行了初步评价。结果表明:制备枸杞硒多糖的最优条件是按照LBP为1 g计算,加入0.62 g Na₂SeO₃,用1% HNO₃充分溶解,再加入BaCl₂ 1 g,74 ℃反应9 h。在此条件下,枸杞硒多糖中的硒含量为648.65 μg/g。活性结果显示,枸杞多糖和枸杞硒多糖对HepG2细胞均有一定的抑制作用,所有枸杞硒多糖的抑制作用明显优于枸杞多糖,并且硒含量最高的Se-LBP₄组对肿瘤细胞HepG2的抑制效果最佳,抑制率为38.15%。枸杞硒多糖抑制HepG2增殖能力与其硒的含量呈正相关,有望作为食品、保健食品和医药的原料进一步开发。     

黑枸杞提取物对HBV的抑制作用及抗氧化能力测定

目的:研究黑枸杞提取物对抗乙肝病毒的作用并检测其抗氧化活性。方法:体外培养HepG22.2.15细胞,MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,双抗体夹心法检测HepG22.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。测定黑枸杞不同浓度提取物的还原能力和对羟自由基、DPPH自由基的清除能力。结果:MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞无明显细胞毒作用。与阴性对照组比较,黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达有抑制作用(p<0.05)。且随着黑枸杞提取物浓度的增加,其还原能力与清除羟自由基、DPPH自由基的能力逐渐增强。结论:黑枸杞提取物对乙肝病毒有抑制作用,并且有着良好的抗氧化能力。     

食物蛋白源降血脂肽的研究进展

目的:研究黑枸杞提取物对抗乙肝病毒的作用并检测其抗氧化活性。方法:体外培养HepG22.2.15细胞,MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,双抗体夹心法检测HepG22.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。测定黑枸杞不同浓度提取物的还原能力和对羟自由基、DPPH自由基的清除能力。结果:MTT法检测黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞无明显细胞毒作用。与阴性对照组比较,黑枸杞提取物对HepG22.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达有抑制作用(p<0.05)。且随着黑枸杞提取物浓度的增加,其还原能力与清除羟自由基、DPPH自由基的能力逐渐增强。结论:黑枸杞提取物对乙肝病毒有抑制作用,并且有着良好的抗氧化能力。     

苯乳酸对单增李斯特菌的细胞膜完整性和通透性的影响

苯乳酸(D-(+)-3-Phenyllactic acid,PLA)是近年来在多种发酵食品中发现的天然高效抑菌小分子。本文采用流式细胞术、荧光显微镜、扫描电子显微镜等方法,研究了苯乳酸对食源性致病菌单增李斯特菌(L. monocytogenes 10403s)细胞膜通透性和完整性的影响。结果表明,苯乳酸最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)作用于该菌1 h后,细胞的通透率达到最高。通过流式细胞仪观察发现,通透细胞数占细胞总数的90.6%,且细胞膜的完整性随着作用时间的延长破坏程度越明显,且在作用1 h后,达到91.9%的破坏率。荧光显微镜直观地展现了细胞的损伤比例。在苯乳酸与L.monocytogenes 10403s作用1、3和6 h后,扫描电镜观察细胞形态有不同程度的皱缩、变形、细胞表面出现一定的孔洞,作用6 h后的细菌出现断裂、抱团和粘连现象。苯乳酸能够影响L.monocytogenes 10403s的细胞膜的通透性和完整性,为其在食品保鲜领域良好的应用提供一定的理论基础。     

鸡腿菇多糖WCP3a的抗氧化活性与空间结构的关系

研究鸡腿菇多糖WCP3a的体外抗氧化活性与空间结构的关系。邻苯三酚自氧化法检测结果表明,在实验质量浓度范围内,鸡腿菇多糖WCP3a对超氧阴离子自由基(O2－ ·)有一定的清除作用,并且当多糖质量浓度为0.6mg/mL时对O2－ ·的清除效果最明显;刚果红实验和原子力显微镜技术检测结果表明,鸡腿菇多糖WCP3a为单股螺旋结构;用不同浓度NaOH溶液处理WCP3a,产生不同空间构象的多糖样品WCP3a-0.2和WCP3a-0.4,检测两者清除O2－ ·的能力,与WCP3a对比发现,WCP3a-0.2和WCP3a-0.4对O2－ ·的清除效果均优于WCP3a,且WCP3a-0.4的清除能力最强;原子力显微镜观测结果发现,NaOH碱性环境使缠绕成股的多糖分子逐渐解聚,且不同浓度NaOH溶液对多糖裂解程度不同。鸡腿菇多糖WCP3a的体外抗氧化活性与其空间结构关系更密切。     

鼠李糖乳杆菌胞外多糖S2的原子力显微镜观察

胞外多糖S2是从鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）KF5的发酵乳中分离纯化得到的高分子质量组分。采用原子力显微镜（atomic force microscopy,AFM）对胞外多糖S2在水溶液中的表观形貌进行观察。结果表明：不同质量浓度的胞外多糖S2经AFM成像,得到了不同形貌多糖分子聚集行为的图像。随着胞外多糖S2质量浓度的降低,多糖分子之间的作用力减弱,外貌发生从膜状、岛屿状、网格状到单链/双链结构的变化。当胞外多糖S2质量浓度为50 ng/mL时,多糖分子间形成网状结构,说明胞外多糖S2具有多分支的化学结构。当胞外多糖S2质量浓度为10 ng/mL时,多糖分子在水溶液中呈柔性链,形成无规卷曲的构象,进一步验证了由高分子稀溶液理论推断的无规卷曲构象的结论。     

枸杞多糖的硒化及其对人宫颈癌细胞的抑制作用

在硝酸催化作用下,利用亚硒酸钠对枸杞多糖进行分子修饰,合成硒化枸杞多糖,反应条件为硝酸体积分数0.5%,70℃反应10h,透析24h。采用体外抗肿瘤实验测定硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长的抑制作用。结果显示硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞具有一定的抑制作用,与未硒化的枸杞多糖相比有显著性差异,且呈一定的剂量依赖性。     

枸杞果多糖对哮喘小鼠炎症损伤影响及作用机制

目的 探究枸杞果多糖对Ⅴ级卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型炎症损伤影响及其作用机制.方法 以OVA诱导的哮喘小鼠为模型,并进行枸杞果多糖干预.肺组织苏木素-伊红(HE)染色、流式细胞术检测肺组织嗜酸性粒细胞水平反映炎症细胞浸润程度;肺组织马松(masson)染色检测肺组织纤维化程度,过碘酸-雪夫(PAS)染色检测支...     

微波消解-离子色谱法测定枸杞多糖的含量及组成

目的 建立微波消解-离子色谱法测定枸杞多糖含量及组成的方法.方法 分别考察了三氟乙酸浓度、微波消解温度及微波消解时间对枸杞多糖消解效率的影响,优化了离子色谱法检测枸杞多糖的色谱条件,并对所建立的方法进行方法学评价.结果 枸杞多糖最佳消解条件为温度120℃、时间20 min、三氟乙酸浓度3 mol/L;经方法学评价,9种...     

醋酸催化下枸杞多糖的硒化修饰及抗肿瘤活性

制备硒化枸杞多糖,初步了解其结构及体外抗肿瘤活性。利用亚硒酸钠对枸杞多糖进行修饰,通过将无机硒转化为有机硒,为得到高含硒量的枸杞多糖进行探索,找出最佳反应条件为:2mL冰醋酸作为催化试剂,硒化试剂硒酸钠用量为2g,室温下反应时间48h。通过紫外光谱、红外光谱分析,并进行了体外抗肿瘤的初步试验研究。结果:确定了硒化枸杞多糖的分子结构中存在亚硒酸基团,人宫颈癌细胞抑制率可达到26.1%。硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞存在一定的抑制作用。     

枸杞子多糖不同组分的双向免疫调节机制研究进展

枸杞子多糖是枸杞中的主要功能成分，具有良好的免疫调节活性。现有研究大多关注枸杞子多糖的免疫促进功能，对其免疫抑制机制缺乏深入探索。因此，本文从肠黏膜保护、肠道菌群变化、免疫细胞和神经内分泌系统等方面，针对枸杞子多糖不同组分的免疫增强/抑制机制展开综述，为其在抗病毒治疗、抗肿瘤治疗、多种疫苗开发、动物饲料免疫增强配方和抗过敏药物/食品中的应用提供参考。     

枸杞多糖促进大鼠肝癌组织细胞的凋亡

为探究枸杞多糖对肝癌模型大鼠癌组织细胞凋亡的干预效果及作用机制。选取45只SD健康雄性大鼠,5只作为正常组,其余40只建立肝癌模型,分为模型组、药物对照组、低、高浓度组,并分别进行干预。观察各组大鼠细胞增殖、凋亡、周期分布情况,检测PTEN、p-Akt、m TOR、Bcl-2、Bax、caspase3表达。研究结果显示,高浓度组G1期细胞比例为57.59%,高于模型组、药物对照组、低浓度组(p<0.05)。高浓度组大鼠增殖率为8.53%,凋亡率为47.68%,均优于模型组、药物对照组和低浓度组。高浓度组大鼠PTEN相对表达量为0.98,p-Akt、m TOR相对表达量分别为1.05、1.11,高浓度组大鼠Bcl-2、caspase3相对表达量分别为1.26、1.19,Bax相对表达量为0.98,干预效果均优于药物对照组和低浓度组(p<0.05)。实验结果表明,在枸杞多糖的干预下,肝癌大鼠癌组织肿瘤细胞增殖、凋亡及周期分布受到明显调控,PTEN、p-Akt、m TOR、Bcl-2、caspase3、Bax表达受到明显的调控,说明枸杞多糖能够阻滞肝癌组织细胞周期分布,抑制肝癌组织细胞增殖,促进细胞凋亡,为肝癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

三相萃取法纯化枸杞多糖

利用三相萃取法可避开多糖的醇沉过程,达到短时间内分离多糖的同时,也可一定程度的分离子水提液中的蛋白质和黄酮的原理,本文采用此法分离枸杞多糖,考察了叔丁醇-(NH₄)₂SO₄-水提液体系的三相萃取性质,研究了提取液中(NH₄)₂SO₄的添加量、叔丁醇添加量、萃取液pH、温度对枸杞提取液多糖、蛋白质、黄酮的萃取率的影响,并通过正交试验优化了多糖的萃取条件,研究发现:多糖最佳萃取条件是:10 mL提取液中(NH₄)₂SO₄添加量为30%(w/v)、叔丁醇添加量为10 mL、温度为35 ℃、pH为6,此时多糖的萃取率可达95.31%,蛋白质萃取率可达83.45%,黄酮萃取率可达50.66%。通过多糖的红外光谱、抗氧化活性实验可发现三相萃取法所得多糖与乙醇沉淀法所得多糖的化学结构,抗氧化活性均无太大差异。因此,该体系是一种可行的高效分离纯化枸杞多糖的绿色方法。     

枸杞多糖诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的形态学研究

采用热水法提取药材枸杞子中的枸杞多糖。本研究通过MTT 实验发现3.125～200mg/L 质量浓度范围内的枸杞多糖能显著抑制宫颈癌Hela 细胞的增殖;采用荧光显微镜、透射电镜和激光共聚焦扫描显微镜观察发现经枸杞多糖处理过的Hela 细胞呈现出典型的凋亡特征;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法进一步证实经枸杞多糖处理过的Hela 细胞呈现凋亡特征。结果提示枸杞多糖是一种潜在的抗癌复合物,其关键作用机制是诱导癌细胞凋亡。     

白花蛇舌草对HepG2人肝癌细胞Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的：研究白花蛇舌草对HepG2人肝癌细胞Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法：MTT检测白花蛇舌草提取液（EHD）对HeDG2细胞增殖的抑制作用和免疫组化SP法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白表达。结果：EHD在一定浓度和时间内能抑制HepG2细胞的生长,并具有剂量和时间依赖性;EHD（160mg／m;_）作用HepG2细胞48h后,Bcl-2的表达水平下降,而CaspaseJ的表达水平升高。结论：EHD（160mg／mL）对HepG2细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,婪机制可能与相关基因BcL2、 Casnase-3的袁主太调控有美．