直结肠癌相关抗原LEA分布的免疫光镜和电镜观察

本文主要应用免疫细胞化学技术对新研究成的直结肠癌细胞表面大分子抗原(LEA)在光、电镜下进行了较详细的定位观察。收集新鲜直结肠癌组织标本,冰冻切片后用常规ABC免疫酶标法染色,在光镜下观察,将CX1和CL187(人结肠癌培养细胞系)接种培养在置于培养皿内的盖玻片和载玻片表面,二、三天后分别用间接免疫荧光法和胶体金包埋前法免疫染色,前者在荧光镜下观察,后者以上升浓度的系列酒精脱水,EPON812原位包埋,经LKB超薄切片机切成8000A的切片,在日立H_600型透射电镜下观察。     

胰腺胰岛分泌细胞的免疫金标记

本实验应用豚鼠抗胰岛素抗体及胶体金探针对常规Epon812包坦后的大鼠胰腺组织胰岛素分泌细胞进行电镜免疫金染色,获得较满意的结果。材料与方法:取大鼠新鲜胰腺组织,常规透射电镜制样。半薄切片光镜下精确定位胰岛。超薄切片捞于不锈钢载网上。免疫金染色程序为:①8％高碘酸钠室温腐蚀20分钟;②0.01MPBS(含1％BSA)pH7.2洗涤3次,每次5分钟;③5％BSA孵育20分钟,以封闭非特异性结合位点;④豚鼠抗胰岛素抗体     

低强度氦氖激光对大鼠内皮细胞ICAM-1的影响

1　材料与方法采用健康Wistar大鼠腹部主动脉一小段 ,纵行剪开切成小片 ,入灭菌培养瓶中孵育后加入培养基培养出单层原代内皮细胞并传代。采用抗人第Ⅷ因子抗血清 (一抗 )和抗家兔IgG(二抗 )进行间接免疫荧光染色后 ,在荧光显微镜下可以观察到细胞核周围出现浅黄绿色荧光环 ,证     

对某些难浸透材料的一种简单可行的包埋方法

在制备电镜生物样品过程中,包埋剂的性能是一个十分重要的因素。选用不同的包埋剂浸透样品时,形成的包埋块的切割性能直接关系到超薄切片的成败。有些生物样品如藻类和植物的细胞具有较硬的细胞壁,有的组织则富含脂肪,还有某些样品需要用细胞化学的方法处理(如银染)。上述这类样品一般都不易浸透,影响着切片的质量。因此,选择适当的包埋剂是制做电镜样品中的一个必要条件。目前,国内常用的包埋剂主要是环氧树脂如国产618树脂,Epon812树脂,Spurr树脂和Ardldite 502树脂等。而我们实验室常用的是Epon812树脂混合剂和Spurr树脂混合剂这两种。Epon812树脂混合剂能较好地保存细胞的精细结构,有适当的反差,在电子束的轰击下相对稳定,并     

团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑垂体促性腺激素分泌细胞的超微结构及其在人工催产过程中的变化

以团头鲂为材料,对其脑垂体促性腺激素分泌细胞(GTH细胞)的超微结构及其在人工合成催产剂(LRH—A)作用下的变化进行观察和研究。取性腺IV的雌团头鲂50尾,注射LRH—A催熟9小时,再注射绒毛膜促性腺激素(HCG),每隔2—4小时取一次材,另取一些未经催产的鱼作为对照。样品经4％戊二醛和1％O_sO_4各固定2小时,丙酮梯度脱水,醋酸双氧铀块染,Epon 812环氧树脂包埋,LKB—V超薄切片机切片,日立H—600—2A型电镜观察。     

环氧树脂包埋电镜样品的条件探讨

本文通过对Epon812环氧树脂熟化(聚合)体系的应用和测试比较,报导了温度对Epon812环氧树脂熟化体系中的单体有影响,而对混合后的整个熟化体系几乎没有影响。极微量的水份对已混合的熟化体系的熟化交联有促进作用;已吸潮的单体置40～45℃烘箱3～5小时,其熟化性能可恢复到未吸潮状态。同时指出,通常应用于电镜包埋的Epon812熟化体系在45℃时即能达到完全熟化程度,这在免疫电镜应用过程中,对防止抗原生物活性的减少有一定的实用价值。     

团头鲂脑垂体GTH细胞钙调素免疫电镜定位

本实验运用电镜免疫胶体金技术对团头鲂脑垂体GTH细胞进行了钙调素(CaM)的超微结构定位。钙调素也称钙调蛋白(Calmodulin)是存在于所有真核生物体中的一种独特的功能蛋白,它在细胞的各种生命活动中起着举足轻重的作用。垂体促性腺激素细胞(GTH细胞)是调控生殖生理过程的关键细胞,因此研究其内CaM分布将有助于鱼类生殖生理的研究。将垂体从团头鲂脑颅中取出,戊二醛及四氧化锇双固定,梯度丙酮脱水,Epon 812环氧树脂包埋,LKB-V     

新发现的几个微生物超微结构

在用电镜系统地观察大量的细菌超薄切片标本中,偶然发现了几个新的超微结构。例如霍乱弧菌的多层外膜泡(multilayer outer-membrane);钩端螺旋体的各种球状体(various spheroid),以及支原体的细胞内出芽(intracellular budding)。材料和方法:一,材料:所用菌种分别由各类细菌专业实验室提供,于培养至既定时间取样。二,方法:从固体培养基上刮取菌苔,或从液体培养物中离心分离菌体。用戊二醛和四氧化饿固定,系列乙醇脱水,Epon812树脂包埋,LKB超薄切片机切片,乙酸双氧铀和柠檬酸铅染色,H-660透射电镜观察。     

日本脑炎病毒感染鼠脑神经元的超微结构研究

多种节肢动物传播的人类病毒性脑炎病毒能在鼠脑神经元内复制、增殖、并产生严重的细胞病变。本研究应用透射电镜观察日本脑炎病毒(JEV)感染小白鼠后,发病动物大脑海马回神经元的超微结构病变特征以及病毒在细胞内增殖的形态特点。7—8克小白鼠,脑内接种JEV(京卫研_1A_2株)病毒悬液,发病后经麻醉取大脑海马回部位脑组织,按常规固定、脱水、Epon812包埋、半薄切片经精确定位后制作超薄切片,Phiilps EM-400T电镜观察。     

~(60)Co照射后大鼠肝细胞化学变化的电镜观察

健康雄性大白鼠经~(60)Cor射线2000拉德一次全身照射,三天后取肝组织进行细胞化学反应,然后用Epon812包     

低温引起橡胶叶绿体变化及种间差异

原产于南美洲亚马逊河地区热带作物橡胶,在我区由于冬季寒潮的影响仅限于几个地区种植成功,然而在异常年份仍有受害的可能。因此选育抗寒品种是一项重要课题,本实验通过对几个不同抗寒种因低温引起叶绿体变化及差异的电镜观察,研究探讨其抗寒关系。材料与方法:由广西橡胶所选育并提供的桂研73—165,桂研93—114等品种和产于亚马逊河原种马研600。于12月上旬寒潮来前采回嫩绿枝条,分别在低温处理前和经4℃12小时回暖至25℃12小时处理后取茎表皮层组织,用3％戌二醛室温固定1小时,1％锇酸室温固定90分钟,丙酮逐级脱水,Epon812包埋,LKBⅢ超薄切片,铀和铅双染色,在DXA_4—10型电镜下观察。     

心律失常心内膜心肌活检的电镜观察

心内膜心肌活检术,自六十年代建立以来,已经成为研究心脏病理学的常用技术之一,国内亦陆续有所报道心律失常在临床上有很大一部份患者既无明显的心脏病变且不易查明病因,以往对这类病例电镜观察的报道亦较少。为了从超微结构病理方面探讨其诊断的可能性,本文进行了35例心内膜心肌活检的电镜观察。材料以国产心肌钳(上海第六注射器厂制造)于右心室采取,按常规进行双重固定,丙酮系列脱水,Epon 812 包埋,LKB     

免疫金法与ABC法在电镜包埋前染色之比较

包埋后免疫电镜术虽能精确定位抗原,但难度大。本文用胶体金标记法与ABC法对人鼻中线恶网瘤组织在树脂包埋前作抗人T细胞免疫染色,并对两种方法进行比较。简述如下:临床活检鼻中线恶网组织,经4％多聚甲醛加1％戊二醛4℃固定,振动切片(50μm),PBS冲洗,在预先硅化的载玻片上作免疫染色:鼠抗人T细胞McAb(Dako公司出品)孵育过夜;金标羊抗鼠抗体(10nm,军科院基础所出品)室温下孵育1小时,再将切片倾入小瓶,经1％锇酸后固定,常规脱水包埋及超薄切片,不作铀铅复     

热暴露大鼠脑组织超微结构改变

机体在热环境中的耐受能力有一定限度,超过限度就会发生中暑,中暑常常伴有谵妄和昏迷等神经系统症状,因此热暴露对脑组织的影响特别受到注意。光镜观察已经积累了许多材料,但是电镜观察尚未见有报导,为此选择大鼠脑组织神经细胞和毛细血管为对象观察超微结构改变。大鼠在干球温度38—40℃、湿球温度31—32℃的高温仓中受热致死,取5只作电镜观察,平均受热时间215分钟,平均最高体温41.7℃。死亡大鼠立即开颅取大脑与小脑皮质部份组织,以戊二醛固定,再以锇酸固定,Epon812包埋,半薄切片作Giemsa染色,超薄切片作铅铀染色。另有3只大鼠不受热,在室温条件作对照观察,活杀取材,处理相同。     

LambdaDNA诱导非细胞体系核重构过程的超微结构研究

非洲爪蟾未受精的卵细胞去胶膜后,经钙离子载体A23187活化及松胞素B处理,10,000G离心裂胞,除掉脂滴、卵黄颗粒、色素颗粒及卵核等,可得到可溶性胞质。在可溶性胞质中先加入ATP再生系统。将在65℃处理5分钟的Lambda DNA引入上述爪蟾卵非细胞体系,置22℃温育。以温育开始为零时,每隔一定时间取样固定做电镜观察,共取到温育4小时。取出的样品用戊二醛、锇酸双固定,Epon812包埋后做超薄切片,经醋酸双氧铀——柠檬酸铅染色,在JEM-100CX透射电镜下观察。同时按常规方法做冰冻蚀刻观察。     

细胞内病毒抗原定位的低温包埋及胶体金标记

本文报告使用低温包埋剂Lowicryl K4M对感染细胞进行低温包埋和制作超薄切片,用包被SPA或IgG的胶体金作为第二抗体,采用间接法对两种RNA病毒(脊髓灰质炎病毒和轮状病毒)和两种DNA病毒(单纯疱疹Ⅰ型病毒及SV_(40))在感染细胞中作了定位标记实验。将结果同常规环氧树脂Epon 812包埋的感染细胞包埋前穿透标记和包埋后超薄切片标记进行比较。常规包埋法对细胞超微结构保存良好,但由于高温聚合对病毒抗原活性破坏较大,不能获得理想的金标记结果。使用皂角甙(Saponin)改变细胞膜进行包埋前穿透标记,虽能获得特异性标记,但皂角甙对细胞膜结构破坏严重,不利于进行病毒与细胞相互作用关系的研究,且作用条件及时间不易掌握。以上缺点可通过使用低温包埋法得到解决。     

一株来自脑炎患者的类C型逆转录病毒形态学研究

在探讨神经系统疾病病毒病因的研究中,蓝祥英等从一例脑炎患者血细胞培养中获得一株可检出逆转录病毒样颗粒,称为CM_1的细胞株后,又将CM_1细胞株的无细胞滤液转化另一多发性硬化患者外周血淋巴细胞,而成CM_2细胞株。本文报告CM_2细胞株及其病毒的超微形态。材料和方法:培养传代的CM_2细胞以及加PHA和TPA激活的CM_2细胞分别离心成团,4％戊二醛固定,常规方法包埋,制备超薄切片,铀一铅双染色,JEM1200EX电镜观察。结果和讨论:培养传代的CM_2细胞以及经加PHA和TPA激活的细胞,大小约9—15微米,个别巨大细胞可达20微米以上。细胞核明显多形性,核内以常染色质为主,胞浆以丰富核蛋白体     

应用免疫胶体金技术在电镜水平定位脑胶质瘤中的铁蛋白抗原

铁蛋白是人体内最基本的铁贮存形式,在恶性疾病情况下,铁蛋白可同时是血清学标志物及肿瘤标志物,血清中铁蛋白浓度的升高主要是由于肿瘤细胞可以产生铁蛋白并释放到血循环中,关于肿瘤细胞可合成铁蛋白仅见于利用生化方法在肝癌细胞上的实验,本文应用免疫电镜定位脑胶质瘤中的铁蛋白,来探讨其在肿瘤细胞中的合成、转运和释放,以进一步证实血清中铁蛋白升高源于肿瘤本身。30例脑胶质瘤标本来自神经外科手术,组织经固定后进行Epon812包埋,制备1μm半薄切片用免疫     

十二指肠上皮细胞的亚显微结构

本文以健康家兔十二指肠为实验材料,在超薄切片透射电镜观察的基础上,采用冷冻蚀刻技术对十二指肠上皮细胞的亚显微结构及其膜表面特化结构,进行观察分析。实验方法取新鲜材料,经4％戊二醛和1％锇酸双固定后,为了提高样品的反差和较好地显示细胞的膜结构,将样品放入1％单宁酸浸泡60分钟,尔后再用丙酮逐级脱水,EPON812包埋,超薄切片后送H—500电镜观察。冷冻蚀刻样品,系用HFZ—1型冷冻蚀刻装置,按常规操作步骤制备复型膜。     

胎儿垂体前叶的超微结构

为了阐明人胚胎期垂体前叶细胞的发育状况。收集16～40周胎令的新鲜胎儿17例。将其前叶固定于4％戍二醛液内,1％锇酸后固定,Epon812包埋,超薄切片,JEM—100CXⅡ透射电镜观察。根据观察所见前叶细胞的超微结构特点,我们将胚胎期前叶细胞分成四种类型:未分化型细胞;分化中细胞,已分化细胞及退化中细胞。它们各自的形态结构是:1.未分化细胞、胞体较小,胞质少而电子密度低,细胞器极少,偶见小的线粒体或内质网。核内染色质多呈细沙粒状。核仁较少而小。2.分化中细胞,胞体增大呈多形性,随细胞类型不同,胞质电子密度不一,其共同特点是,细胞器发达,尤其是线粒体和内质网显著增多,粗