血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸(T_3)酶联免疫检测试剂盒

以T_3抗体包被微孔,经处理的T_3生物素化,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),四甲基联苯胺(TM)为底物,建立了T_3生物素-亲合素酶联免疫分析(T4-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.2ng/mL,批内变异因数<8.3％,批间变异因数<10.5％,回收率为98.3％～107.3％,正常参考值范围为1.4～3.8ng/mL,本试剂盒具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

血清游离3，5，3’-三碘甲腺原氨酸（FT3）酶联免疫试剂盒研制

三碘甲腺原氨酸是人体中随血流循环的一种甲状腺激素,在血液中,它几乎全部(>99.5％)结合于载体蛋白,但只有游离三碘甲腺原氨酸(0.3％)具有生物学活性。而且与总三碘甲腺原氨酸浓度水平相比,游离三碘甲腺原氨酸浓度水平不受载体蛋白浓度的影响,可对临床状态显示可靠的相关性。本法采用T_3抗体包被酶标板微孔、生物素化T_3,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),以配     

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

本工作以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）、二株识别人促甲状腺激素（hTSH）高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素-亲合素酶联免疫分析（sTSH-BA-ELISA）试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.02mIU/L,批内变异系数<7.8％,批间变异系数<9.6％,回收率为93.3％～1078％,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素（如 FSH,HCG,LH）无明显的交叉反应性。正常参考值范围为0.3～4.1。本方法所制备的试剂盒与同位素研究所53室的     

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),T₃抗体包被微孔,T₃生物素化,四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T₃）生物素-亲合素酶联免疫分析(T₃-BA-EL1SA)方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2 μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1％～8.3％和6.5％～10.5％,回收率为98.1％～107.2％;高浓度T₃血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

滤纸干血-人促甲状腺激素(TSH)酶联免疫检测试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),二株识别人促甲状腺激素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血一人促甲状腺激素生物素-亲合素酶联免疫分析试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异因数<15％,批间变异因数<20％,回收率为90.1％～103.3％,复查阈值大于20mIU/L。本法所制备的试剂盒与同位素所53室滤纸干血-TSH-IRMA(磁颗粒)试剂盒相关性为y=1.01x 0.34,相关系数为r=0.873,本试剂盒无放射性、操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH) 酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA 0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 ,适用于临床检测和科研应用     

游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用^131I和^188Re标记亲和素，测定其与生物素结合的能力，并与未标记的亲和素、罗丹明标记的新和素进行比较，测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量；探讨用生物素－亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明，未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、^188Re－亲和素和^131I－亲和素，它们与生物素的结合能力依次下降，与生物素半解吸量分别为21．9，19．5，25．7和47．9μg；放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明－亲和素。由此推测，有可能用亲和素－生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。     

超灵敏血清TSH TR-IFMA方法的建立

超灵敏血清TSH免疫分析是甲亢诊断的首选指标。本工作从5种抗TSH　McAb中筛选出3种任意二者之间相互配对的McAb;1种用于包被微池,另2种用于生物素化（作为检测抗体）。将样品与生物素化McAb在微池中进行温育,样品中的TSH与固相McAb和生物素化的McAb发生免疫反应,形成固相McAb-TSH-McAb-生物素免疫复合物。分离后,加入SA-Eu3 与免疫复合物中的生物素反应,Eu3 的浓度通过解离-荧光增强过程进行测量,荧光强度与血清TSH浓度呈正相关。本工作建立的血清TSH TR-IFMA的分析灵敏度约为0.003 mIU/L,功能灵敏     

亲和素-生物素系统的153Sm标记及其生物学分布动力学的研究

选用＾１５３Ｓｍ对生物素进行放射性标记,然后利用亲和素和链霉亲和素与生物素的高亲合力特性,再对亲和素和链霉亲和素进行＾１５３Ｓｍ的标记,观察到大鼠和小鼠体内的血清除率和生物学分布,并与＾１５３ＳｍＣｌ３和＾１５３Ｓｍ－ＤＴＰＡ的生物学分布进行比较。结果表明,＾１５３Ｓｍ标记的亲和素血素除迅速,肝肾放射性摄取高;＾１５３Ｓｍ标记的链霉亲和素血清除缓慢,肝、脾、肾等脏器和血液中滞留量高;而＾１５３Ｓｍ     

竞争性蛋白结合分析法(胃蛋白酶法)测定血清总甲状腺素

近年来血清总T_4竞争性蛋白结合分析法(简称CPBA)由于应用酶水解法来代替乙醇提取T_4,使操作更加简便。本文作者对国内目前应用的血清总T_4CPBA药盒作某些技术改进,临床104例测定结果如下:(均值±标准差、微克/100毫升),正常51例为8.60±2.39、甲亢21例21.88±5.30、甲低11例3.84±1.54,口服避孕药者21例13.23±3.53,后三组均值与正常组均值对比均存在显著差别(P<0.01)。通过83例CPBA与RIA相关性研究,甲减组,正常组其相关性较好,而甲亢组则较差。最后,作者就标记T_4的放射化学纯度,建立第二参考标准血清以及T_4标准溶液的稳定性等问题进行了重点讨论。     

两种TTA整合型配基的合成及其Eu^3 络合物荧光性能的研究

噻吩甲酰三氟丙酮（TTA）是稀土离子络合物研究中较为常用的β-二酮类配体。 Ci Yunxiang等研究发现,氯磺化的TTA（即CTTA）与BSA联结后,BSA-CTTA复合物中CTTA-Eu3 的荧光强度比水解后的CTTA-Eu3 提高了1000～10 000倍,络合物稳定性也明显升高。将2个β-二酮单体整合到同一分子,合成了2种新的配基TRIAZINE-TTA和BCTOT（1,10-双（8’-氯磺基噻吩基）-4,4,5,5,6,6,7,7,-全氟-1,3,8,10-葵四酮）,用BCTOT标记BSA和链亲合素（SA）。BCTOT与Eu3 络合物的荧光寿命约为320μs,最大荧光激发波长约345nm,     

~3H标记喜树碱、10-羟基喜树碱和石吊兰素的制备

本文用氚溶剂交换法制备了氚标记喜树碱(Ⅰ),10-羟基喜树碱(Ⅱ)和石吊兰素(Ⅲ)。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分别与CF_3COOH/T_2O_2,DMSO/T_2O或(CH_3COOH/T_2O加热各得到氚标记的Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ。     

SA-gal在肿瘤放免治疗中清除作用的实验研究

研究半乳糖化链霉亲和素（Streptavidin-gal,SA－gal)和亲和素（Avidin,Av）在大肠癌预定位放免像中对血中标记生物素化单抗的“消除”作用。从荷瘤鼠的尾静脉内注射^131I标记的生物素化单抗（^131I-bt-McAb)预定位于肿瘤靶位,24h后2组实验组分别给予SA－gal和Av,再过6h分别行体内分布测定和显像。对照组未给予清除剂。结果表明,SA－gal、Av使用后6h,血中^131I-bt-McAb水平都明显降低,肿瘤／血比值明显提高（对照组、Av清除组、SA－gal清除组的肿瘤／血比值分别为0．42、2．09、5．23,3组之间P＜0．05）;与Av相比,SA－gal清除作用更强,而且在体内脏器分布上,其非特异性摄取也明显地较Av少。实验结果提示,SA－gal和Av作为清除剂在肿瘤预定位放免治疗中能有效地加快血中标记单抗的清除,使肿瘤靶／非靶比值得以明显地提高;两者相比,SA－gal优于Av。     

鸟亲和素的结构改造和核素标记

采用ＮａＩＯ４氧经鸟亲和素的寡糖链产生醛基后，与章胺偶联，紫我证明每个Ａｖ联了５－６个章胺基团。用丁二酸酐同Ａｖ上的赖氨酸残基酰基化反应，得到ｓｕｃ－Ａｖ等电点显著低于Ａｖ的等电点。＾１２５Ｉ标记的各种Ａｖ衍生物和生物素的结合能力明显不同。     

光化学制备用于链亲和素固定的胺基磁性纳米凝胶的研究

本工作提出制备胺基磁性纳米凝胶的一种改进方法。在含有烯丙基胺的Fe304水分散液中,运用紫外光辐照引发烯丙基胺原位聚合,一步法制备了聚烯丙基胺磁性纳米凝胶（Polyallylamine magnetic nanogels,PAA,MNGs）。透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）和光子相关光谱（Photo correlation spectroscope,PCS）表征了PAA-MNG的形貌和粒径分布;热重分析（Thermogravimetric analysis,TGA）确定了磁性成分的含量,振动样品磁强计（Vibrating sample magnetometer,VSM）测试表明其呈现超顺磁性。利用表面的伯胺基,PAA-MNGs可以方便地偶联蛋白等生物大分子。链亲和素（Streptavidin,SA）经1-乙基3-（3-二甲氨基）碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化后可以共价固定在PAA—MNGs上,得到链亲和索包覆的纳米磁球（Streptavidin—coated magnetic nanoparticles,SA—MNPs）。使用探针生物素对硝基苯酯（Biotin P—nitrophenyl ester,BNPE）通过光谱检测证实了SA-MNPs的生物素结合能力。表明PAA—MNGs适合于作为载体偶联蛋白等生物大分子,并可能用于生物技术领域的诸多方面。     

固相微球放免分离剂的研制

采用丙烯酰胺丙烯酸为单体的共聚反应,生成带有羧基官能团的载体微球;用化学偶联法,使微球的羧基与抗体的氨基共价结合,形成牢固而稳定的固相抗体微球;用1-乙基-3-(3-二甲基丙氨基)碳二亚胺为联接剂,制备出T_3。T_4固相一抗及固相二抗。对该固相抗体微球的悬浮性、牢固性、沉淀的结实性以及高温下的稳定性等做了测定。在放射免疫分析中,使用固相微球分离剂,具有非特异结合低(2～3％),批内变异<5％,批间变异<15％,且操作简便、迅速、稳定等优点,是一种先进的分离技术。     

固相微球放免分离剂的研制

采用丙烯酰胺丙烯酸为单体的共聚反应,生成带有羧基官能团的载体微球;用化学偶联法,使微球的羧基与抗体的氨基共价结合,形成牢固而稳定的固相抗体微球;用1-乙基-3(3-二甲基丙氨基)碳二亚胺为联接剂,制备出T_3,T_4固相一抗及固相二抗。对该团相抗体微球的悬浮性、牢固性、沉淀的结实性以及高温下的稳定性等做了测定。在放射免疫分析中,使用固相微球分离剂,具有非特异结合低(2～3％),批内变异<5％,批间变异<15％,且操作简便、迅速、稳定等优点,是一种先进的分离技术。     

固相亲和素制备技术及初步鉴定

将亲和素（Ａｖ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）通过偶合试剂连接制成联接物，利用活化后ＢＳＡ的改性使联接物一步包被到疏水固上上形成更加易于定量的固相亲和素。实验鉴定证明，这种固相亲和素具有良好的生物活性，初步应用效果良好，可推广应用于生物素－亲和素系统的免疫分析。