水稻端粒酶RNA候选序列的鉴定

端粒酶由端粒酶反转录蛋白和端粒酶RNA构成,端粒酶RNA中除模板序列保守外,其余区域的保守度极低,难以基于同源序列实施克隆。目前,植物中仅拟南芥端粒酶RNA得到了克隆。为了鉴定一条具水稻端粒酶RNA特征的候选序列,研究中进行了对模板序列单碱基T/A突变(5′-AAACCCTAA-3′)后的转基因愈伤组织端粒酶活性的比较,结果显示在缺乏dATP的端粒重复序列扩增法反应中,突变型的端粒酶活性明显高于未突变型;对体外延伸得到的端粒ssDNA进行测序分析,结果发现所测10条片段均含有突变特征序列;再对转基因植株进行端粒序列的检测,结果所测8个端粒序列中,有2个含有突变特征序列。因此,初步判断该候选序列为水稻端粒酶RNA基因。     

西兰花端粒酶分离与活性测定探究

植物端粒酶以自身的RNA亚基为模板，维持着染色体末端端粒的长度，从而使植物细胞可持续分裂。本研究以西兰花花蕾为材料，采用不同分子量、不同浓度的PEG分别提取端粒酶，根据PEG吸附蛋白质的原理，从具有端粒酶活性的组织中分离并富集端粒酶。结果显示：用PEG6000提取西兰花端粒酶，且用100μg的酶量进行酶促反应时测得的端粒酶活性最高。以此为参数，经改进的TRAP法成功检测到：用0．2g PEG6000／700μL洗脱液提取出的端粒酶活性很高。这些分离、检测技术为其它植物组织中端粒酶活性的检测和评价提供了新的途径，尤其对低活性的植物端粒酶检测具有重要意义，为深入研究端粒酶RNA的序列及结构奠定了基础。     

水稻愈伤组织端粒酶催化特征检测

端粒是位于染色体末端富含鸟嘌呤的双链DNA结构.端粒酶以自身的一段RNA为模板,按照碱基互补配对的方式产生端粒重复序列以延伸端粒长度,维持染色体的稳定.以水稻愈伤组织为实验材料,分离、提取端粒酶,并以不同3'端的寡核苷酸作为前导引物对体外水稻端粒酶催化特征及不同引物对酶活性的影响进行了探究.结果显示:S水稻愈伤组织端粒酶提取液在延伸前导引物时,以催化合成的TAGGGTT末端百分比含量最高,表明在催化延伸寡核苷酸的过程中,倾向于优先催化合成TAGGGTT端粒重复序列.尤其在前导引物3'末端为TT碱基和GT碱基最突出,其次是TA碱基, 而AG碱基和GG碱基不明显,推测水稻端粒酶模板RNA与前导引物的结合位点为一个碱基,偏好性为T>A>G.这些特征、特性对尚未克隆的水稻端粒酶RNA,以及对深入研究端粒末端结构及染色体遗传稳定性具有重要意义.     

水稻端粒酶RNA模板基因序列鉴定体系的建立

利用水稻端粒酶对端粒序列的合成作用,对模板基因序列进行定点突变,构建了pCambia1301-T突变型、pCambia 1301-Y野生型载体.经农杆菌介导,选用水稻不同品种和组织,探索候选序列的鉴定体系.结果显示,不同水稻品种诱导愈伤,差异显著,其中中花11号可快速诱导愈伤,比广陆矮4诱导时间缩短一半,用成熟胚和幼胚分别诱导愈伤,无明显差异;对突变型、野生型、正常组织进行基因组DNA端粒鉴定和端粒酶活性分析,发现突变型端粒酶活性明显高于对照.这些均表明该鉴定体系完整、可靠,为端粒酶RNA模板基因序列的鉴定建立了有效的方法.     

拟南芥肌醇- 1-磷酸合酶类蛋白基因的克隆表达

以野生型拟南芥总RNA为模板,逆转录PCR反应获得拟南芥肌醇-1-磷酸合酶类蛋白基因cDNA（AtMIPS1）,开放读码框为1533bp,编码510个氨基酸．与已报道物种MIPS基因氨基酸序列比较分析表明,AtMIPS1与植物MIPS基因的氨基酸同源性和相似性较高达86％-90％与95％-96％,并含有MIPS基因的保守区域“334SYNHLGNNDG”．将该cDNA序列不改变阅读框架克隆到pET28a（＋）原核表达载体上,SDS—PAGE结果表明：在0．12g／LIPTG诱导2h的条件下得到最佳的蛋白表达效果,AtMIPS1的成功表达为其功能研究打下基础．     

嗜热噬菌体TSP4的一种非通读转录现象

转录是生物体基本的生命现象,原核生物的转录普遍存在"通读"的现象,多个ORF(Open Reading Frame)共同转录形成一条多顺反子mRNA.在转录时,当一次转录终止后,转录复合物解体,RNA聚合酶需要再次识别模板DNA上的启动子区并与之结合形成转录复合物才能启动下一次转录.然而,在研究嗜热噬菌体TSP4基因组中间隔仅8个残基的两个ORF(ORF47和ORF46)的转录时发现,这两个ORF的转录并没有得到一条与这两个ORF对应的mRNA,而是分别转录出两个独立的mRNA.对这一段DNA序列的基因克隆表达结果表明,仅有ORF47表达出蛋白.可见RNA聚合酶对这两个ORF的转录不是通读,而是被它们之间的长度仅为8 bp间隔序列所中断并独立转录成两个mRNA.嗜热噬菌体TSP4的独特非通读转录现象是否与其基因组小、结构紧凑以及调控机制相对简单有关,值得进一步研究.     

人端粒酶RNA突变对HeLa细胞作用

端粒存在于真核生物染色体末端,由特定的DNA重复序列及与之特异性结合的蛋白质构成。在正常人体细胞中,每一次细胞分裂,由于DNA复制时的方向必须是从5’到3’端,因而伴随着染色体末端的端粒逐渐缩短。当端粒缩短到一定程度时,细胞开始走向凋亡。同时,端粒能在端粒酶作用下延伸,利用自身的RNA为模板合成端粒DNA。文章通过突变端粒酶RNA靠近模板的序列碱基A^61 A^62／GG以及G^63 G^64／AA,构建穿梭质粒,转染HeLa细胞,研究端粒酶位点突变对细胞生长的影响。研究结果显示不同的突变位点对HeLa细胞分裂活性有明显影响,这为深入研究肿瘤的分子遗传机制提供参考。     

人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析

为了获得一种具有生物学活性的小分子多肽基因人α 防御素HNP 1,提取人外周静脉血液总RNA,反转录为cDNA作为模板,采用PCR的方法扩增得到长度约为380bp的防御素(De fensin)基因片段,并将该扩增产物连接入pMD18 T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行核苷酸序列测定,获得α 防御素HNP 1基因克隆。用序列处理在线工具包分析HNP 1基因结构。     

山药分子分类研究

提取山药基因组和叶绿体DNA作为模板,分别扩增山药核糖体18S rDNA和叶绿体核糖体16S rDNA片段.测序获得1646bp的山药核糖体18S rDNA和1351bp的山药叶绿体核糖体16S rDNA,GenBank登录号分别是JF703101和JF703100.将以上两个基因片段分别与GenBank中的一些物种的相关序列进行序列对比,结果表明,18S rDNA序列相似度较大,物种间差异较小.而叶绿体16S rDNA序列在分析不同科的物种演化关系上有较高的分辨率,为分子水平上山药资源的研究提供了资料.     

人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析

为了获得一种具有生物学活性的小分子多肽基因人α-防御素HNP-1，提取人外周静脉血液总RNA，反转录为cDNA作为模板，采用PCR的方法扩增得到长度约为380bp的防御素(Defensin)基因片段，并将该扩增产物连接入pMD18-T载体，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行核苷酸序列测定，获得α-防御素HNP-1基因克隆。用序列处理在线工具包分析HNP-1基因结构。     

FMS中加工质量故障预报的新方法

对引起加工质量故障的原因进行了研究,建立了用于加工中心加工质量故障分析的与/或故障树,提出了隐加工质量故障(FMQF)的概念和由·FMQF 找出制造系统故障的决策树方法.本文在模糊理论基础上,提出了隐加工质量故障识别的新方法,用这种方法可以根据控制图的变化进行设备状态估计.基于以上研究,建立了可用于柔性制造系统隐加工质量故障预测和预报的专家系统.     

立方准晶的反平面问题与Ⅲ型裂纹问题

发展了立方准晶材料的断裂理论 .通过应用Fourier分析和对偶积分方程理论 ,得到了立方准晶材料Ⅲ型裂纹问题的精确解析解 ,并由此确定了位移与应力场 ,应力强度因子和应变能释放率 .结果表明 ,应力强度因子与材料常数无关 ,而应变能释放率依赖于所有的材料常数 .这些为研究此新固体材料的变形和断裂提供了重要的信息 .     

Banach代数中的行列式理论

探讨了 Banach 代数中的行列式理论.给出了具有单位元的迹 Banach 代数具有行列式的充要条件.     

非织造布滤料性能及过滤过程的研究进展

对近年来非织造布滤料的研究进展做了简要综述,介绍了内部结构的研究及表征、过滤性能及其影响因素、过滤过程的计算机模拟,指出进一步发展所需要解决的问题。     

高师物理专业人才培养与基础教育衔接问题的研究

分析了当前高师物理专业人才培养与基础教育人才需求存在的问题,结合调查情况,提出了高师物理专业在培养目标、课程设置、教学内容、教学方法及实践教学环节方面的改革措施。     

JOURNAL OF BEIJING INSTITUTE OF TECHNOLOGY TOTAL CONTENTS(Vol.23)

正~~     

鞋面织物染整过程节能减排技术方法

鞋面织物染整是纺织工业中一个特殊分支,公司通过采用先进染色技术和工艺,可以从源头上达到节能和减少废水产生量的效果,废水产生后经过处理达标排放,部分经深度处理后回用。公司经长期实践后已经达到吨织物染整用水125m~3/t_(产品),吨织物排放废水79.2 m~3/t_(产品),水回用率达37.8%,吨产品蒸汽耗量从9t/t_(产品)下降到7 t/t_(产品),均达到国内国际先进水平。     

Genomics,metagenomics,and microbial oceanography—A sea of opportunities

Microbial oceanography is an emerging discipline resulted from the interaction,cross-fertilization and integration of life science and ocean science.Microbial oceanography integrates the principles of marine microbiology,microbial ecology and oceanography to study the role of microorganisms in the biogeochemical dynamics of natural marine ecosystems.The application of genomics tools to study marine microbes is resulting in rapid advancements in microbial oceanography that has important implications in globa...     

Information for Authors

正General Journal of Beijing Institute of Technology(JBIT),an English language journal sponsored by Beijing Institute of Technology,was established in 1992.JBIT mainly publishes research articles that reflect the latest achievements in basic theory and experimental studies in various engineering fields and in applied mathematics,mechanics,physics,chemistry,and so on.JBIT is listed in Ei,CA,SA,AJ,CSA,MR,ZM and many other abstracting indexes.     

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