抗沙丁胺醇单克隆抗体制备与鉴定

[目的]制备特异性抗沙丁胺醇单克隆抗体,为其免疫学检测方法的建立奠定基础.[方法]用SAL-BSA 抗原免疫BALB/c小鼠;使用细胞融合技术建立抗SAL 的单克隆抗体(SAL mAb)杂交瘤细胞株;体内诱生腹水法制备SAL mAb,并鉴定其免疫学特性.[结果]筛选出2D9和IC4两株杂交瘤细胞.其细胞培养上清效价达1:10<'4>,腹水效价达1:10<'6>;免疫球蛋白亚型鉴定为IgG<,1>;抗体对SAL 的半教抑制浓度(IC<,50>)为1.14ng/ml;与沙丁胺醇和盐酸克伦特罗的交叉反应率(CR)分别为100.00%和26.09%,与其他化合物无交叉反应.[结论]获得了高效价、敏感且异性的抗SAL 抗体,为沙丁胺醇残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

登革2型病毒B株E基因部分序列原核蛋白表达及单克隆抗体制备

目的 通过构建登革2型病毒B株E基因区1～476 bp的原核表达载体,进行原核表达,并制备单克隆抗体,为研制登革病毒诊断试剂奠定基础.方法 将登革2型病毒B株E基因序列克隆入原核表达载体pET28a(+),构建原核表达重组体pET28a(+)-E,将重组表达载体转化BL21(DE3)菌株进行原核表达.纯化后的蛋白免疫BALB/e小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体.结果 成功构建了pET28a(+)-E原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,获得了1株持续分泌抗E蛋白抗体的杂交瘤细胞株8B3,该单抗为IgG2a亚类.结论 成功制备了抗E蛋白mAb,为对登革病毒引起感染的早期诊断提供了有力的工具.     

利用接触跟踪机制实现Email蠕虫的检测

针对E-mail蠕虫逐渐成为一种主要的网络威胁,提出基于接触跟踪机制检测蠕虫的方法CTCBF.该方法利用"差分熵"对单个网络节点的异常连接行为进行检测,再通过异常节点之间的连接关系利用跟踪算法建立跟踪链,当跟踪链的长 度达到设定阈值时,跟踪链上的可疑节点被确认为感染节点.针对阈值的不确定性,提出了一种动态阈值方法,根据不同的网络感染等级自适应调整阈值大小.仿真试验表明,该方法能够快速、准确地检测出蠕虫的传播行为,同时为未知蠕虫的检测提供了一种新的模式.     

牛整合素β6基因的原核表达及其抗血清的制备研究

[目的]为深入研究ITGB6亚基的基因功能奠定基础.[方法]利用基因克隆技术获得整合素β6基因(ITGB6)胞外区,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,经鉴定及序列分析确定获得了重组阳性克隆;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IFTG诱导及蛋白纯化.[结果]SDS-PAGE结果显示,在94 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备ITGB6蛋白抗血清,Western-blot分析表明抗血清可与原核表达的ITGB6蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1:2560.[结论]成功表达了牛的重组整合素β6基因.     

应用酶联免疫吸附试验检测血清桥粒芯蛋白抗体水平监测寻常型天疱疮患者病情变化

目的:研究较大样本寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)患者,血清抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1和抗Dsg3特异性抗体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)指数长期的变化情况,观察其与病情变化的相关性,探讨其用于病情监测、预测疾病复发和指导治疗的可行性.方法:对20例确诊PV的患者进行长期随访,收集患者在各随访时间点的血清,记录每次随访时的病情并进行评分(autoimmune bullous skin disorder intensity score,ABSIS);检测患者血清的间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IIF)滴度、Dsg3 ELISA指数和Dsg1 ELISA指数;利用统计学方法和做图方法分析病情评分与Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度之间的关系.结果:PV患者皮肤和口腔的病情评分,分别与Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度均具有显著性关联(P＜0.01),患者疾病活动期和临床缓解期两组间Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度差异均有统计学意义(P＜0.01).各组患者相关性分析发现,Dsg3 ELISA指数、Dsg1 ELISA指数和IIF滴度几乎均与病情平行波动变化,ELISA指数优于IIF的平行性,并且ELISA指数可以预测病情是否会反复,从而指导治疗.结论:PV患者血清抗Dsg3抗体ELISA指数与病情变化平行波动,可以反映疾病的活动程度,可用于病情监测,并可为临床上预测疾病复发,指导临床调整治疗提供有利的实验室证据.     

延边黄牛气肿疽间接ELISA诊断方法的建立

[目的]检测延边黄牛气肿疽病原体,为牛气肿疽的检测提供科学方法和依据.[方法]采用气肿疽梭菌裂解菌体为抗原,建立检测该病原菌的酶联免疫吸附检测方法,确定其最适工作条件.[结果]气肿疽梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50 μg/ml;待检血清的最适稀释度为1∶ 200,酶标二抗的最适工作浓度为1∶ 2 000;对随机采集于延边地区的30份牛血清样品进行间接ELISA检测,阳性率为20%.[结论]建立的间接ELISA方法特异性和重复性好.     

破伤风疫苗免疫供血浆者抗-TT血浆效价观察与分析

目的 分析破伤风疫苗免疫对不同性别和年龄段供血浆者抗-TT效价变化,为提高抗-TT高效价血浆采集量提供参考依据.方法 对符合规定的志愿供血浆者按不同年龄段分组,以相同的疫苗剂量和免疫程序进行免疫.采用ELISA定量检测供血浆者抗-TT效价水平,将抗-TT、效价≥8IU/ml的供血浆者列为采集特免血浆对象.结果 不同年龄段供血浆者组别间相同剂量疫苗和免疫程序产生高效价抗-TT的比率比较差异明显;21～35岁组产生高效价的比率明显高于36～45岁组,46～55岁组产生高效价比例最低,而且年龄小的抗-TT高效价持续时间较年龄大的长.结论 采用40IU吸附破伤风疫苗,0、4、4周程序免疫,38%的供血浆者可获得高效价抗-TT原料血浆,各年龄段供血浆者的破伤风抗体水平均能够达到保护的浓度.     

淋巴细胞功能相关抗原-1/细胞间黏附分子-1介导的细胞因子诱导的杀伤细胞体外抑瘤机制

目的 探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)/细胞间黏附分子-1(ICAM-1)介导的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)的体外抑瘤机制.方法 从白血病患儿外周血分离淋巴细胞,经过干扰素-γ(IFN-γ)、抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)、白细胞介素-2(IL-2)诱导并与树突状细胞(DC)共培养,获得大量的DC-CIK.在经10、20μg/ml等不同质量浓度小鼠抗人LFA-1单克隆抗体处理后,采用MTT法研究DC-CIK细胞对多种白血病细胞株的杀伤活性,RT-PCR与Western blotting方法检测GATA-3和T-bet基因表达水平的变化.ELISA方法测定DC-CIK细胞释放细胞因子IL-12、IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果 诱导后的DC-CIK细胞形态规则,经不同浓度的LFA-1单克隆抗体处理后,MTT结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭组DC-CIK细胞对B95细胞杀伤作用下降最为明显(t=10.138,P＜0.05);RT-PCR与Western blotting结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭的B95细胞组,GATA-3基因mRNA水平和蛋白水平表达增加最为明显(t=16.386,P＜0.05;t=22.652,P＜0.05);同时T-bet基因mRNA水平和蛋白水平表达降低最为明显(t=17.728,P＜0.05;t=17.452,P＜0.05);ELISA结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭的B95细胞组中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α分泌水平下降最为明显(t=21.621,P＜0.05;t=13.739,P＜0.05;t=15.278,P＜0.05).结论 GATA-3和T-bet基因参与了LFA-1/ICAM-1介导的DC-CIK抑瘤途径,并且通过分泌Th1型细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α等发挥抑瘤作用.     

制备工艺对Nd8Fe82Co3Nb1B6纳米晶双相复合永磁体的影响

采用直接制备纳米晶和非晶晶化法获得了Nd8Fe82Co3Nb1B6纳米晶双相复合永磁合金,并借助XRD、VSM等分析手段比较了两种方法制备的永磁合金的显微结构及磁性能.结果表明,与非晶晶化方法相比,当辊速为20m/s时,可获得适当的过冷度,直接制备出晶粒尺寸较小的纳米晶双相永磁合金,获得较好的磁性能,其中,Br＝1.12T,Hcj＝381kA/m,(BH)max＝110.5kJ/m3.     

铬粉矿制备球团技术的试验及研究(Ⅲ)

根据与中南大学、郑州大学建立的铬粉矿制备球团技术研究项目。前两期针对铬粉矿制球的原材料及制备球团配比等进行综合试验分析。该部分主要对球团管炉烧结、链篦机-回转窑扩大试验及竖炉模拟试验分析研究。希望能为铬铁生产、球团制备及球团预还原技术提供基础依据。     

基于正交试验和神经网络的超细石英粉体制备

简要分析了高能球磨法制备超细石英粉体的基本原理;以正交试验设计技术为基础,研究了球磨法制备超细石英粉体的试验方法;应用人工神经网络技术,建立了基于BP网络的石英粉体粒径预测模型.试验结果表明:该模型具有较高的精度,较好地实现了球磨法制备石英粉体的粒径预测.该项技术为进一步研究工业化制备超细石英粉体工艺及其参数选择提供了理论指导.     

激光选区熔化技术应用于无损检测模拟试块制备的研究及试块表征分析

无损检测模拟试块在实际探伤领域有着重要应用,但试块及其缺陷的制备存在较大困难,增材制造由于独特的成型工艺,使得缺陷的自由设计及试块加工成型成为可能。实验利用激光选区熔化(Selective laser melting,SLM)增材制造技术制备了材质为316L不锈钢的无损检测模拟试块,在试块内部设计了缺陷孔径尺寸为ø0.1 mm～ø0.6 mm的6个数值梯度的模拟孔洞和裂纹类缺陷。研究结果表明:金属粉末经SLM方法成型试块后,化学成分无明显变化;缺陷设计孔径为ø0.4 mm～ø0.6 mm时,缺陷制备重复性较好,且形态相对均完整;由于成型过程中激光穿透作用和热影响区熔化粘粉现象导致缺陷形状精度变差。模拟孔洞和裂纹缺陷的超声波检测波形变化信息及规律与缺陷实际状态相符。激光选区熔化增材制造技术应用于无损检测模拟试块的制备具有可行性。     

系统性红斑狼疮患者血清增殖诱导配体水平的检测及其临床意义

目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎(RA)患者血清中增殖诱导配体(APRIL)的水平,探讨APRIL水平与SLE患者临床指标的相关性及APRIL在SLE发病中的作用.方法:采用ELISA法检测SLE患者组(48例)、RA患者组(16例)和正常对照组(16例)血清APRIL水平,并与SLE活动指数(SLEDAI)及实验室指标进行对比分析.结果:SLE组和RA组血清APRIL水平高于正常对照组(P<0.01),SLE组高于RA组(P<0.01).SLE组中抗Sm抗体阳性患者APRIL水平高于阴性患者( P<0.05).抗U1-RNP抗体阳性患者APRIL水平高于阴性患者( P<0.05),抗SSA /SSB抗体、抗ACL抗体、抗ds-DNA抗体阳性和阴性患者APRIL水平差异无统计学意义.SLE患者血清APRIL水平与其补体C3、C4呈负相关关系(r1=-0.819,P<0.01;r2=-0.549,P<0.01),与SLEDAI评分、免疫球蛋白、抗核抗体谱等免疫学指标无相关性.结论:APRIL在SLE患者中特异性升高,可能在狼疮发病中起重要作用;血清APRIL水平可能与SLE患者疾病活动程度有关联,但尚不能确定是否可作为疾病活动性指标.     

基于图像形状检测与坐标融合技术的鞍座坐标标定方法

为提高仓库内鞍座位置的标定效率,提出了一种适用于大场景的鞍座坐标标定方法.该方法首先使用图像形状检测技术提取物体的轮廓形状信息,然后使用基于坐标融合技术获得仓库内所有鞍座位置的整体场景坐标,最后利用图像识别与提取技术将整体场景坐标中的鞍座中心标识转换为天车坐标.为验证所提出方法的有效性,将该方法应用于某实验室搭建的试验...     

环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究

[目的]利用环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌.[方法]以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)作为靶序列,设计引物,优化Mg<'2+>浓度、Bst酶浓度等反应条件,建立LAMP反应体系.[结果]确定了环介导等温扩增技术检测志贺氏菌的适宜反应条件;该法检测志贺氏菌的灵敏度为62 cfu/ml.[结论]该研究初步建立了一种利用LAMP快速检测志贺氏菌的方法,为食品中志贺氏菌快速检测构建了一个技术平台.     

退火制度对TC25钛合金棒材组织和力学性能的影响

研究了不同退火制度对TC25钛合金棒材显微组织和力学性能的影响。结果表明：TC25钛合金棒材组织随退火温度的升高逐渐由等轴组织转变为双态组织,经920~940℃/1 h AC＋550℃/6 h AC双重退火处理后获得等轴组织,经960~980℃/1 h AC＋550℃/6 h AC双重退火处理后获得双态组织。TC25钛合金棒材的较佳热处理温度为960~980℃/1 h AC＋550℃/6 h AC,经该制度处理后棒材的室温拉伸性能和高温（500℃）拉伸性能均优良。     

千枚岩制备阻燃型填料试验研究

本文通过开展千枚岩废石预处理--超细加工试验、千枚岩微粉表面改性试验、千枚岩/PP复合材料制备及性能检测等系列试验研究工作,开发出利用酒钢千枚岩制备阻燃型填料技术,对同类产品的开发及降低阻燃型填料生产成本具有一定的借鉴和指导意义。     

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2 C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础.方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2 C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定.结果:获得编码人MASP-2 C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2 C端片段cDNA的重组克隆.重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2 C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2 C端的cDNA序列一致.结论:成功克隆了人MASP-2 C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2 C端多肽片段.     

用乳液法制备ZrO2纳米球形颗粒

利用二甲苯为油相,span-80为表面活性剂,Zr(NO3)4或NH3的水溶液为水相,采用单乳液和双乳液的方法制备了含3%(摩尔分数)Y2O3的ZrO2前驱体粉,经过600℃锻烧2h后获得了四方相ZrO2纳米粉.用TG-DTA、XRD、TEM、BET和激光粒度分析等分析手段对粉末及其前驱体进行了分析和表征,试验结果表明:二甲苯/span-80/水相体系具有较大的含水量,能改善目前用乳液法制粉产量低的缺点,利用该体系制粉的最佳体积配比为V(二甲苯):V(span-80):V(水相)＝95:5:25.按照该配比设计的单乳液法和双乳液法均能获得形状为球形、团聚较少的四方相纳米粉末,但采用双乳液法比单乳液法所获得的粉末粒度分布更均匀、粒径更小,粒径约15nm.     

下向水平分层进路充填采矿法在某铜矿的应用

为解决某铜矿原有采矿方法回采作业安全性差、采矿损失贫化大等问题,开展了下向水平分层进路充填采矿法试验研究。该采矿方法自上而下逐层进行,上下分层进路交错布置,分层进路分两步进行回采。现场工业试验结果表明:该方法取得了采场生产能力180 t/d,采矿损失率8%,矿石贫化率6%,采矿成本103. 30元/t,充填成本56. 36元/t的良好技术经济指标,能够实现该矿山安全高效回采的目的。