节杆菌β-呋喃果糖苷酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、透析脱盐、Sepharose 6B凝胶色谱等分离纯化技术，从节杆菌培养液分离纯化了β-呋喃果糖苷酶，纯化倍数为18．29，回收率为44．81％，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后有一条明显的蛋白质谱带。相对分子量为55800~，该酶的最适pH为6．5，最适温度为30℃2，pH6．0～8．0之间和45℃以下稳定，Ag 和Cu^2 对该酶有较强烈的抑制作用，EDTA和镁离子对酶活的影响较小。     

米根霉葡萄糖淀粉酶的分离纯化及特性研究

葡萄糖淀粉酶是米根霉在淀粉质培养基中诱导分泌的一类胞外酶，其表达对米根霉转化淀粉生成L-乳酸的效率，以及L-乳酸分批发酵周期的长短有很大影响。本文对米根霉葡萄糖淀粉酶进行分离纯化，并研究其酶学性质，结论如下：经硫酸铵盐析、透析脱盐、Sephadex G-100柱层析等纯化步骤，葡萄糖淀粉酶比活力提高23倍。SDS-PAGE显示纯化后的酶为一条带，相对分子量约75．5kD。该酶以可溶性淀粉为底物时最适催化反应pH值为4．0～6．0，最适催化反应温度为40-50℃，在50℃下保持稳定。钙离了和锰离子对该酶活力有一定的增强作用，而铅离子和亚铁离子对其活力有明显的抑制作用。     

绿豆β-葡萄糖苷酶的分离纯化与性质研究

本文采用硫酸铵分级沉淀、超滤、DEAE-52离子交换、Sephadex G-100凝胶层析纯化的方法,对绿豆β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化,并对纯化酶的部分特性进行了研究。研究结果表明,绿豆中含有两种β-葡萄糖苷酶同功酶,两种同功酶分别被纯化了3.02倍和7．24倍,收率分别为46．75％和91.14％：同功酶的分子量分别为92．4kDa和140．0kDa,其中一种为双亚基蛋白酶：该同功酶的最适反应温度分别为50℃和20℃;最适反应pH值分别为6．0和5．0;两同功酶对对硝基苯-β-D-葡萄糖苷有相似的亲和力。     

节杆菌β-1,3葡聚糖内切酶的分离纯化与特性研究

通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和柱层析从节杆菌（Arthrobacter sp．）粗酶制剂分离纯化得到β-1,3葡聚糖内切酶。经SDS凝胶电泳和柱层析测得纯化酶为单体酶,分子量为32．5kDa;纯化酶N末端的10个氨基酸序列为APGDLLWSDE,在pH5～8之间稳定,最适pH6．5,最适温度55℃,但50℃以上失活很快。纯化酶对昆布4,5,6,7糖及昆布多糖底物的米氏常数分别为0．12,0．11,0．067,0．066mM和0．16mg／mL,也可水解热凝胶和地衣多糖,葡糖苷内切酶H（Streptomyces griseus）不能分解它,证明该酶不含糖基。该酶属于糖基水解酶16族系。     

甘薯β-淀粉酶的提取、纯化及其性质的研究

本文对两种甘薯皮、心层的β-淀粉酶进行提取测定，得知皮层中酶的含量比心层高。对混合酶液先进行纯化，再对粗、纯酶液的热、酸碱稳定性分析，结果表明：粗酶液最适反应温度为55℃，在50—60℃间较稳定；最适pH值6．0，在pH值为4．0-9．0间较稳定。纯酶液最适反应温度和pH值与粗酶液一样，但没有时段温度稳定性和酸稳定性。粗、纯酶液在强酸碱条件下，失活很快。结果显示β-淀粉酶的纯化方法是可行的。     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70％的（NH4）2S04及DEAE--琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28．7倍,酶回收率为45．2％。经SDS--PAGE分析,该酶分子量近似54．6KD。酶最适反应pH为5．0,最适温度为50℃。在pH3．0-5．0、温度30℃-70℃之间酶活相对稳定。Fe3＋、Mg2＋、Mn2＋以及Cu2＋对该酶有抑制作用,Zn2＋、Ca2和Fe2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。以上表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

鸭血浆胆碱酯酶的分离纯化和性质的研究

将鸭血浆用0．2mol／L pH7．2磷酸盐缓冲溶液等体积稀释后，以硫酸铵为盐析剂进行二次盐析、再经DEAE-52离了交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对胆碱酯酶进行分离纯化，可获得电泳纯的胆碱酯酶，纯化倍数为278．5倍，酶活回收为17．8％。实验表明，该酶的最适温度为37℃，最适pH为7．8，有过量底物抑制现象。     

耐高温α-淀粉酶产生菌的选育研究

从土壤中分离到1株能在55℃生长并分泌耐高温α-淀粉酶的菌株,其最适生长pH值为7．0-8．0,最适生长温度50℃。该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌,疑似微地衣芽孢杆菌,命名为DG-1。对该菌株分泌的耐高温α-淀粉酶的性质研究表明,最适作用pH值为7．0,在pH6．0-7．5的范围内有较高酶活。最适反应温度为95℃,95℃保温60min处理后酶活仅损失4．73％。经紫外线诱变处理,得到菌株DG-4,酶活较出发菌株提高了104．6％。     

一株产海藻糖合成酶嗜中温芽孢杆菌的鉴定及其酶学性质

由长白山温泉附近土壤中筛选得到产海藻糖舍酶菌株，为革兰氏阳性菌，具有芽孢和鞭毛，其最适生长温度为55℃，对这一菌株进行生理生化指标测定。进一步对该菌株所产海藻糖合酶的酶学性质进行研究，酶反应最适作用pH值为7．0，在pH6．6～7．4时该酶稳定，最适作用温度为35℃，在25-45℃时该酶可稳定保存。     

米曲霉M3中性蛋白酶的提取及酶学特性研究

采用硫酸铵沉降法分离纯化米曲霉M3所产中性蛋白酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达159781．1μ／g；该酶的最适反应温度为50℃，最适作用pH值为7．5；该酶在30～40℃时具有良好的热稳定性，在pH值6．5—7．5的条件下酶是稳定的；NH4^1 ，K^1 对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe^3 则对其表现出强烈的抑制作用。     

宇佐美曲霉木聚糖酶粗酶性质研究

本文对宇佐关曲霉(Asp．usamii)产木聚糖酶的产酶进程进行了分析，28℃固态静置培养72h，酶活力可达到7442IU／g干曲。粗酶酶学性质研究表明：该木聚糖酶的最适反应温度50℃，低于50℃时较稳定；酶的最适pH4．6，pH稳定范围为pH5．0-10．0。Ca^2 对酶有激活作用，而Mn^2 、Mg^2 、Ba^2 则具有强烈的抑制作用。     

高温紫链霉菌酸性耐热几丁质酶的纯化及性质研究

从高温紫链霉菌Z16发酵液中分离纯化得到一种酸性耐热几丁质酶,并对其酶学性质进行了研究。粗酶液经硫酸铵沉淀和离子交换层析纯化后得到电泳级纯酶,酶活力回收率为22．3％,纯化倍数为12．7倍,比活力由2．9U／mg提高到36．8U／mg。SDS—PAGE和凝胶过滤测定纯酶的分子量分别为41．6ku和40．8ku,表明该酶为单亚基蛋白。酶学性质测定结果表明,该几丁质酶为酸性酶,最适pH为4．0,在pH3．0～6．0时保持较高的酶活力。该几丁质酶的最适反应温度为60℃且具有较好的温度稳定性,在55℃和60℃时的半衰期分别为267min和132．9min。该几丁质酶能够水解胶体几丁质,水解产物主要为N-乙酰氨基葡萄糖和几丁二糖以及少量的几丁三糖。该酶优良的酶学特性使其具有广阔的工业应用前景。     

康氏木霉木聚糖酶酶学性质的研究

对1株康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适反应pH为6．0；该酶在20-60℃范围内能保持80％以上的酶活，在pH3．0-10．0的范围内能保持85％以上的酶活；金属离子Ba^2＋、Fd^2＋、Al^3＋，12mmol／L的Cu^2＋和Fe^3＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶反应则有促进作用。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

乳酸菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

本文采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化乳酸菌中β-葡萄糖苷酶.经SDS-PAGE测定其相对分子量约为60kD.该酶以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷为底物时,最适pH值和最适温度分别为6.0和40℃.在45℃以下,pH值在4.5～7.0之间酶活力相对稳定.Hg^2＋和Ag^＋对该酶活力有明显的抑制作用.     

酸性α-淀粉酶生产菌株的筛选和酶的纯化及酶的性质研究

从土壤中筛选得到一产酸性α-淀粉酶的野生青霉菌株，对其所产酸性α-淀粉酶进行分离纯化，该酶反应的最适pH值为4.4，最适温度为60℃，分子量约为85kD。薄层层析结果表明该酶水解淀粉生成糊精和多种低聚糖。     

琼胶酶生产菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

从青岛近海的红藻(Gelidium amansii)中分离筛选到一株高活力的海洋琼胶降解菌AT-22，生理生化试验鉴定该细菌为假单胞菌(Pseudomonas sp．)。对其生长、产酶特性和酶活力影响因素的研究结果表明：AT-22所产琼胶酶为诱导酶，0．2％葡萄糖的添加对菌株产酶有抑制作用。该酶作用的最适pH为6．0～7．0，最适温度为40℃，最适底物浓度为1．0％～1．2％，Ca^2 离了的添加对酶促反应有较强的促进作用，而Fe^3 、Mn^2 、Cu^2 和Hg^2 等离子有不同程度的抑制作用。     

β-1,3葡聚糖酶高产菌株的筛选及其产酶条件研究

从土壤中分离筛选出一株β-1，3葡聚糖酶活较高的菌株，编号为M014，初步鉴定为木霉。研究了碳源、氮源、培养温度与时间等因素对M014产酶的影响。实验结果表明，MOl4在含3％茯苓粉、0．5％酵母膏及一些无机盐的液体培养基中(pH6．0)，于30℃，150r／min振摇培养6d，β-1，3葡聚糖酶活最高，达到4．95U／ml。另外，还就β-1,3葡聚糖酶的酶解条件进行了研究，结果显示，β-1,3葡聚糖酶的最适反应pH为4．5,最适反应温度为60℃.粗酶液在40℃和50℃保温12h，酶活基本稳定，最适反应温度为60℃保温时，酶活迅速下降。     

拮抗性酵母几丁质酶的纯化、性质及抗菌活性

从番茄果实表面分离到一株陆生伊萨酵母（Issatchenkia terricola），它在几丁质诱导下能产生较高活性的几丁质酶。采用硫酸铵盐析、DEAE-纤维素（DE32）离子交换柱层析、SephadexG-100分子筛柱层析，获得了凝胶电泳均一的几丁质酶。用SDS-PAGE测得该酶的相对分子质量为42400；以胶体几丁质为底物的Km和Vmax分别为6．91mg／mL和12．95μmol／min；该酶反应的最适温度和最适pH值分别为50℃和7．0。在50℃条件下，酶蛋白在pH5．0～9．0较为稳定；抗菌活性实验表明，该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。     

影响面团褐变因素的研究

通过硫酸铵盐析、透析袋透析脱盐、Sephadex G-200柱层析的方法,从小麦全麦粉中分离纯化了多酚氧化酶。该酶为对热不稳定的酶,其最适反应湿度为50－60℃,最适反应pH为5．6－6．0。在以邻苯二酚为底物时,km为8．4mmol/l。小麦面粉出粉率越高、面团含水量越大、储藏温度越高,面团褐变速度越快,且褐色程度随时间的延长而加深。