新型CDK抑制剂联合ZD55-MnSOD溶瘤腺病毒体外抑制人结肠癌细胞增殖的研究

探究携带MnSOD的溶瘤腺病毒Ad-E1B55Kd-MnSOD(ZD55-MnSOD)联合小分子药物新型CDK抑制剂SNS-032对人结肠癌细胞株SW620、HCT116、HT-29生长的体外抑制效果,通过溶瘤病毒与药物联合,以期寻求较好的抗癌作用。实验采用MTT法检测5 MOI的ZD55-MnSOD与不同剂量的SNS-032(0、20、40、80、160ng/mL)联合处理人结肠癌细胞株,发现病毒与药物联合处理有促进肿瘤细胞凋亡的作用。ZD55-MnSOD(5 MOI)与SNS-032(80ng/mL)联合处理SW620、HT-29细胞,发现联合作用具有很大程度上的时间依赖性,Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡也显示ZD55-MnSOD与SNS-032联合处理组的细胞凋亡现象比二者单独使用均具有显著差异。该研究初步证实了ZD55-MnSOD与SNS-032联合具有互补作用,能有效地在体外抑制人结肠癌细胞的增殖。     

溶瘤腺病毒ZD55-Mn-SOD联合TPL对骨髓瘤细胞的生长抑制效应

研究利用携带Mn-SOD的溶瘤腺病毒Ad-E1A-△E1B55Kd-Mn-SOD(ZD55-Mn-SOD)联合小分子化合物雷公藤内酯醇(Tnptolide,TPL)对骨髓瘤细胞株RPMI8226、U266生长的体外抑制效应,希望找到解决化疗药物在临床使用中所出现的疗效低及毒副作用大的方法.采用CCK-8比色分析方法表明100 MOI ZD55-Mn-SOD与TPL(2 ng/mL、4 ng/mL)联合处理后,RPMI 8226及U266的细胞存活率均显著低于单用ZD55-Mn-SOD或TPL(P＜0.05);用结晶紫染色法定性分析了ZD55-Mn-SOD联合TPL对两种骨髓瘤细胞的杀伤作用;最后Hoechst33342染色法观察细胞凋亡也显示联合应用ZD65-Mn-SOD与TPL处理组的细胞凋亡现象比二者单独使用均要显著.本研究初步证实ZD55-Mn-SOD与TPL联合具有协同作用,能有效地在体外抑制骨髓瘤细胞RPMI 8226和U 266的生长.     

二氯乙酸钠对溶瘤腺病毒ZD55-Smac抑制肝癌细胞生长的影响

研究了溶瘤腺病毒ZD55-Smac联合小分子药物二氯乙酸钠(DCA)对人肝癌细胞株的体外抑制效果.首先通过PCR及Western blot鉴定病毒构建正确与否及有无野毒污染,再用MTT 法分别检测DCA、ZD55、ZD55-Smac以及DCA与病毒联合对肝癌细胞株Huh-7、PLC、SMMC-7721及肝正常细胞QSG-7701生长的抑制作用;通过倒置显微镜观察了DCA、ZD55-Smac以及DCA和ZD55-Smac联合使用对肝癌细胞株PLC及肝正常细胞QSG-7701的细胞形态变化的影响;利用Hoechst33342染色观察了所处理细胞的凋亡形态学变化.结果表明DCA联合ZD55对肝癌细胞株Huh-7、PLC和SMMC-7721的抑制效果相比较单药物治疗或单病毒治疗有显著增加,而DCA联合ZD55-Smac对肝癌细胞的抑制效果比单病毒治疗有所减弱.该研究为进一步探究ZD55-Smac联合药物治疗打下基础.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合ZD55-TRAIL溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究

研究组蛋白去乙酰化抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合ZD55-TRAIL对人肝癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测SAHA、ZD55-TRAIL以及二者联合对肝癌细胞株Huh-7、Bel-7404、Hep3B以及人正常肝细胞株QSG-7701增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验进一步检测联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况;通过Western blot实验在蛋白水平上检测一些凋亡相关蛋白表达情况的变化.实验结果表明:SAHA联合ZD55-TRAIL处理3d后对肝癌细胞株Huh-7的增殖抑制率达到50％,对Hep3B、Bel-7404也达到近40％的杀伤效率,并且联合治疗后对人正常细胞株QSG-7701未见明显的毒副作用.同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力强于用SAHA或ZD55-TRAIL单独使用.Western blot实验证明了药物和病毒的联合作用使促凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达量明显减少,caspase-8和caspase-9蛋白也有相应剪切现象的发生.流式细胞仪同样检测出SAHA和ZD55-TRAIL联合作用对肝癌细胞有很好的杀伤作用.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制.实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western 印迹分别检测MG132 对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响.此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性.提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择.     

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化.结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用.说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤.     

HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究

单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统.本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率.结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-kB与凋亡蛋白PARP表达的影响.采用（CK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-kB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况.CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-kB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白.以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-kB信号转导通路,下调NF-kB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关.     

不同浓度血清对大鼠骨髓间充质干细胞生长的影响

血清缺乏是在细胞治疗中对供体BMSCs活性影响的重要因素之一。作者探讨了不同浓度血清对MSCs细胞凋亡的影响。体外培养大鼠MSCs,用不同浓度血清(FBS)处理MSCs,MTT法检测MSCs细胞生长曲线,用Hoechst33342/PI染色检查MSCs的细胞凋亡,并使用Western blot法分析细胞凋亡相关生物信号分子的表达。结果表明,血清缺乏培养条件下,MSCs在培养72h内出现细胞凋亡。并且,无血清培养直接引起了Casepase-3,Casepase-8和Casepase-9蛋白质表达量的增加,导致细胞凋亡的发生,从而致使细胞生长曲线的下降。此外,高浓度的血清对细胞凋亡具有保护作用。     

放线菌素D诱导的SL-1细胞凋亡的初步研究

研究了一定浓度的放线菌素D诱导SL-1细胞凋亡作用.以终浓度为50ng/mL,100ng/mL,200ng/mL,500ng/mL的放线菌素D处理正常SL-1细胞,24h后,终浓度为200ng/mL,500ng/mL的放线菌素D处理的细胞出现较明显的细胞凋亡现象,光学显微镜下可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞碎裂成凋亡小体;DAPI染色荧光显示细胞核逐渐形变,直至碎裂成小块而被凋亡小体包裹;DNA琼脂凝胶电泳呈典型的凋亡细胞DNA梯形条带;流式细胞仪检测结果,对照和以上四种浓度的放线菌素D处理的细胞凋亡率分别为3.43%,10.61%,15.60%,32.67%,72.24%.实验结果证明一定浓度的放线菌素D能诱导SL-1细胞凋亡,且成剂量正相关.     

大黄素抑制人鼻咽癌细胞CNE增殖及诱导凋亡作用

大黄素(emodin)是从大黄中提取的一种天然蒽醌类衍生物,具有明显的抗肿瘤活性。研究大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖的抑制作用以及其诱导凋亡的机制,对其抗肿瘤机制的研究具有积极的意义。利用MTT法检测大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制作用,通过Hoechst33342染色,观察大黄素处理人鼻咽癌细胞株的形态学变化,Western blot研究其诱导肿瘤细胞凋亡通路的变化。结果表明,对于试验细胞株,大黄素杀伤肿瘤细胞的作用,随大黄素浓度升高和作用时间的增加,呈剂量依赖性和时间依赖性;通过倒置显微镜观察细胞在给药后的直观形态学变化,给药后通过Hoechst33342染色进一步证明大黄素可诱导凋亡。给药后通过Western blot对其作用机制的初步探索表明,大黄素处理后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)发生剪切,增强Caspase依赖性细胞凋亡通路的信号。大黄素单药可以抑制人鼻咽癌细胞CNE的增殖,表明其有可能成为一种有效的治疗鼻咽癌的药物。     

顺铂增强携带IL-24基因的双调控溶瘤腺病毒对结肠癌细胞株的杀伤作用

研究端粒酶逆转录酶启动子hTERT启动子和缺氧反应元件HRE双调控的溶瘤腺病毒SG500-IL24联合化疗药物时人结肠癌细胞株的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒联合化疗对结肠癌细胞株HCT-116、SW620以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒一化疗疗法诱导的HTT-116细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测病毒-化疗疗法诱导的HCT-116细胞凋亡信号通路的变化.结果表明SG500-IL24或不携带外源基因的SG500联合低剂量的顺铂后,其对结肠癌细胞株HCT-116、SW620的杀伤作用显著提高(p<0.05);相同条件下对人正常细胞株L02无明显抑制作用.通过Western blot对联合疗法作用机制的初步探索表明,联合疗法增强caspase依赖性细胞凋亡通路的信号.     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒(ZD55-TRAIL-IETD-Smac)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL-IETD-Smac）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。     

AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn- SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1 A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象.结...     

溶瘤腺病毒联合不同浓度阿霉素对肝癌细胞增殖的抑制

研究肿瘤特异性增殖腺病毒联合不同浓度化疗药物阿霉素(ADM)对肝癌细胞增殖的抑制作用.肿瘤特异性增殖腺病AdCN103分别联合不同浓度的阿霉素处理肝癌细胞和正常肝细胞,用实时定量PCR分析腺病毒增殖能力,MTT法检测细胞存活率.结果表明,对于试验细胞株,不同浓度阿霉素存在时AdCN103的复制能力与AdCN103单独感染均没有显著差异.0.64～16 ng/mL ADM对肿瘤杀伤力弱;80～400 ng/mL ADM杀伤肿瘤细胞作用随浓度升高增强,并显著高于AdCN103或ADM单独施药组(p<0.05);但是过高浓度的ADM对正常细胞毒性大,并且与溶瘤病毒联用时失去协同作用.所以,溶瘤腺病毒与适当浓度阿霉素联合用药能显著提高对肝癌细胞的杀伤作用.     

冬凌草甲素诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡的探索

探讨冬凌草甲素(oridonin)对人乳腺癌细胞Bcap-37的增殖、凋亡以及引起细胞凋亡机制.以不同浓度的Ori处理Bcap-37细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞发生凋亡的机制.结果是48～96 μmol/L的Ori可显著抑制Bcap-37细胞的增殖(P＜0.05).48 μmol/L的Ori作用24 h后,细胞的增值抑制率达到了40％,而96 μmol/L的Ori只需处理12 h,增值抑制率竟达到了50％.96 μmol/L Ori处理24 h后,Bcap-37细胞的凋亡率为21.6％.Western Blot检测到了Fas的上调,细胞色素c的释放和随后Caspase 9的激活及其下游信号蛋白Caspase 3和它的底物PARP,ICAD的剪切.进一步检测到Survivin的下调和GADD34的上调.基于这些实验结果,推测冬凌草甲素作为一种潜在的抗乳腺癌制剂,诱导乳腺癌细胞Bcap37发生凋亡的发生可能与Survivin和GADD34相关.     

PHA-767491抑制肝癌细胞生长的研究

利用不同浓度的PHA-767491对多种肝癌细胞株进行杀伤研究,探讨PHA-767491对肝癌细胞的抑杀作用.MTT实验结果表明,PHA-767491能显著抑制多种肝癌细胞株的增殖.Hoechst 33342染色结果也表明PHA-767491可以诱导肝癌细胞进入凋亡.表明PHA-767491对肝癌细胞具有较高的杀伤作用,可能具有广阔的应用前景.     

石榴酸对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

利用MTT法检测石榴酸对T24细胞增殖的影响,利用Hoechst33342染色后观察细胞形态学的变化,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。MTT分析结果显示,石榴酸的半致死浓度(IC50)为30μmol/L。应用荧光显微镜观察Hoechst荧光染色后细胞核形态变化,石榴酸处理T24细胞后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光。应用流式细胞仪分析石榴酸对细胞凋亡的影响,发现石榴酸能够诱导膀胱癌T24细胞的凋亡,30μmol/L石榴酸处理细胞24h,凋亡率为49.4%。说明石榴酸能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效诱导T24细胞凋亡。