HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究

单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统.本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率.结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显.     

新型CDK抑制剂联合ZD55-MnSOD溶瘤腺病毒体外抑制人结肠癌细胞增殖的研究

探究携带MnSOD的溶瘤腺病毒Ad-E1B55Kd-MnSOD(ZD55-MnSOD)联合小分子药物新型CDK抑制剂SNS-032对人结肠癌细胞株SW620、HCT116、HT-29生长的体外抑制效果,通过溶瘤病毒与药物联合,以期寻求较好的抗癌作用。实验采用MTT法检测5 MOI的ZD55-MnSOD与不同剂量的SNS-032(0、20、40、80、160ng/mL)联合处理人结肠癌细胞株,发现病毒与药物联合处理有促进肿瘤细胞凋亡的作用。ZD55-MnSOD(5 MOI)与SNS-032(80ng/mL)联合处理SW620、HT-29细胞,发现联合作用具有很大程度上的时间依赖性,Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡也显示ZD55-MnSOD与SNS-032联合处理组的细胞凋亡现象比二者单独使用均具有显著差异。该研究初步证实了ZD55-MnSOD与SNS-032联合具有互补作用,能有效地在体外抑制人结肠癌细胞的增殖。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合ZD55-TRAIL溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究

研究组蛋白去乙酰化抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合ZD55-TRAIL对人肝癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测SAHA、ZD55-TRAIL以及二者联合对肝癌细胞株Huh-7、Bel-7404、Hep3B以及人正常肝细胞株QSG-7701增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验进一步检测联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况;通过Western blot实验在蛋白水平上检测一些凋亡相关蛋白表达情况的变化.实验结果表明:SAHA联合ZD55-TRAIL处理3d后对肝癌细胞株Huh-7的增殖抑制率达到50％,对Hep3B、Bel-7404也达到近40％的杀伤效率,并且联合治疗后对人正常细胞株QSG-7701未见明显的毒副作用.同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力强于用SAHA或ZD55-TRAIL单独使用.Western blot实验证明了药物和病毒的联合作用使促凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL的表达量明显减少,caspase-8和caspase-9蛋白也有相应剪切现象的发生.流式细胞仪同样检测出SAHA和ZD55-TRAIL联合作用对肝癌细胞有很好的杀伤作用.     

苦参碱对肝癌细胞的作用

用浓度分别为0.25,0.5,0.75,1.0,2.0 mg/mL的苦参碱提取液分别体外培养SMMC-7721细胞24,48,72,96 h后,再用MTT法观察其对SMMC-7721细胞的生长抑制作用.结果表明：不同浓度的苦参碱具有抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导肿瘤细胞的凋亡的作用,呈明显的时间、剂量依赖性 各浓度和时间之间具有显著差异性.     

增殖性溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合丝裂霉素对肝癌细胞的杀伤

增殖性溶瘤腺病毒ZD55-IL-24是靶向p53缺失且携带肿瘤特异性的白细胞介素-24基因(IL-24);丝裂霉素(mitomycin C,MMC)是一种目前临床上癌症治疗常用化疗药物之一.研究联合应用ZD55-IL-24和MMC与单独使用对肝癌细胞株的杀伤效应及机制.结果表明,ZD55-IL-24比携带对照基因EGFP的腺病毒ZD55-EGFP对肝癌细胞具有更强的杀伤效果,而联合使用ZD55-IL-24与MMC比单独使用对肝癌细胞具更好的治疗作用,而对正常细胞的损伤仅来源于化疗药物MMC.此外,Hoechst33258染色和Western blot实验证明ZD55-IL-24与MMC联合处理诱导活化了肿瘤细胞的凋亡途径.以上结果显示肿瘤的传统疗法与新兴生物疗法相结合取得了更佳效果,本研究为临床肿瘤治疗提供理论和实验依据.     

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化.结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用.说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤.     

腺病毒介导miR-122联合化疗药物ADM对肝癌细胞杀伤作用的研究

采用CCK-8比色分析等方法开展腺病毒介导mi R-122联合化疗药物阿霉素(ADM)针对不同人肝癌细胞的杀伤情况的研究。希望通过对比研究,寻找解决化疗药物在临床使用中所出现的疗效低且毒副作用大等难题的方法。研究显示:低浓度的ADM对肝癌细胞的细胞毒作用比较小,但疗效也较差;当ADM浓度增高至80 ng/mL以上,尤其是80 ng/mL的ADM联合20 MOI Ad-mi R122杀伤各种肝肿瘤细胞的能力明显优于单独使用ADM或Ad-mi R122。     

二氯乙酸钠对溶瘤腺病毒ZD55-Smac抑制肝癌细胞生长的影响

研究了溶瘤腺病毒ZD55-Smac联合小分子药物二氯乙酸钠(DCA)对人肝癌细胞株的体外抑制效果.首先通过PCR及Western blot鉴定病毒构建正确与否及有无野毒污染,再用MTT 法分别检测DCA、ZD55、ZD55-Smac以及DCA与病毒联合对肝癌细胞株Huh-7、PLC、SMMC-7721及肝正常细胞QSG-7701生长的抑制作用;通过倒置显微镜观察了DCA、ZD55-Smac以及DCA和ZD55-Smac联合使用对肝癌细胞株PLC及肝正常细胞QSG-7701的细胞形态变化的影响;利用Hoechst33342染色观察了所处理细胞的凋亡形态学变化.结果表明DCA联合ZD55对肝癌细胞株Huh-7、PLC和SMMC-7721的抑制效果相比较单药物治疗或单病毒治疗有显著增加,而DCA联合ZD55-Smac对肝癌细胞的抑制效果比单病毒治疗有所减弱.该研究为进一步探究ZD55-Smac联合药物治疗打下基础.     

免疫抑制剂FK506对乳腺肿瘤细胞株的体外作用

利用FK506(Tacrolimus)对乳腺肿瘤细胞株MCF-7进行体外作用研究,发现FK506可以抑制其增殖.MTT检测结果显示,24 h与48 h的半抑制浓度基本一致,说明其在较短时间内即可发挥有效作用.细胞形态学观察以及细胞染色表明,FK506没有诱导细胞凋亡,而是阻抑了细胞的分裂.进一步经双向电泳(2-DE)蛋白质表达图谱和MALDI-TOF-TOF质谱分析,发现有17种蛋白在FK506处理细胞前后发生明显的表达量上的差异,并进一步从中鉴定出12种蛋白.这些蛋白,按其功能主要分为两大类:一类参与调节细胞骨架的装配与运输,从而影响到神经发育与细胞分裂;另一类,与基因存在密切的相互作用,参与了其复制、修复、转录调节以及翻译后蛋白的折叠,从而影响细胞分裂周期与凋亡.这些差异蛋白为明确FK506抑制细胞增殖的作用机制提供了基础,同时,FK506可以抑制乳腺肿瘤细胞增殖这一功能,也为其成为临床治癌药物提供了可能性.     

含羞草素对肝癌细胞QGY-7703周期同步化的作用

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一。肿瘤的发生发展本质上就是细胞无限制的周期性生长、增殖和分化的失调。细胞同步化是研究肿瘤发生发展及治疗的基础。实验以人肝癌QGY-7703细胞株为研究对象,考察含羞草素阻断对周期同步化的作用。并与胸腺嘧啶脱氧核苷阻断法相对照,研究含羞草素阻断去除后对QGY-7703细胞周期的影响。结果显示:QGY-7703细胞在含羞草素阻断后释放的第10h进入S期,第20h进入G2/M期,且最高同步率分别为G1期94.6%,S期86.0%。含羞草素能较好地使肝癌细胞株QGY-7703同步化于G1期和S期。     

PHA-767491联合IL-24基因对肝癌细胞的杀伤研究

利用最新发现的抗癌新药PHA-767491联合肿瘤基因治疗中最常用的杀伤基因IL-24共同处理肝癌细胞Bel-7404,采用20MOI携带IL-24基因的非复制型病毒Ad-IL-24联合不同浓度的PHA-767491对肝癌细胞Bel-7404进行治疗研究。western blot实验结果表明:PHA-767491对IL-24的表达无明显抑制作用;MTT和Ho-ceast33342染色实验表明二者联合对Bel-7404细胞表现出了较高协同杀伤作用。     

免疫细胞联合腺病毒Ad205-IL-15对肝癌细胞的杀伤研究

在已有腺病毒Ad205-IL-15的基础上尝试与过继免疫细胞CIK、NK92等联合开展对肝癌细胞的杀伤性研究。首次通过荧光化学发光的原理构连出携带表达萤光素酶报告基因的肝癌细胞系Huh7-Luc、MHCC97H—Luc来检测细胞的存活率。结果表明：免疫细胞联合Ad205-IL-15对Huh7-Luc、MHCC97H—Luc两株肝癌细胞表现出了较高协同杀伤作用。证明将免疫细胞与腺病毒联合可以相互弥补各自治疗的不足之处,提高了抗肿瘤效果。同时,由于操作方便,荧光素酶报告基因测定法也为检测细胞存活率提供了新的技术手段。     

携带Kallistatin的溶瘤腺病毒载体构建及其对肝癌细胞的体外杀伤效应

采用靶向基因-病毒治疗策略,通过同源重组的方式构建了携带Kallistatin（KAL）的重组溶瘤腺病毒ZD55-KAL,并研究其对肝癌细胞的杀伤作用。通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的杀伤能力和对正常细胞的安全性;结晶紫染色观察细胞凋亡现象。结果显示：经目的病毒ZD55-KAL感染后肝癌细胞出现明显的病变和生长抑制,而正常细胞未出现病变现象,表明目的病毒具有较高的安全性和对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。此外ZD55-KAL感染肝癌细胞后引起凋亡,所携带的治疗基因KAL能通过促进肿瘤的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。     

AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn- SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1 A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象.结...     

抗癌散对肿瘤细胞的作用研究

为了观察抗癌散中各提取部位在体外对人体肿瘤细胞的作用，利用MTT测定法观察从抗癌散中提取的乙醇部位、多糖部位、乙酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位、挥发油部位对肿瘤细胞的影响。结果证明正丁醇部位对HGC细胞和A549细胞的抑制率最大；Hela细胞随着用药浓度的增大，石油醚部位抗癌效果显著增强，正丁醇和挥发油部位在浓度为50μg／mL和100μg／mL时都很有效。     

6种化合物对肝癌细胞活性影响的比较

肝癌在全球,特别是在中国,有着很高的发病率。在中国,每10万人中约有将近40人罹患肝癌。在临床治疗肝癌等癌症的方法上,最常用最普遍的手段是手术治疗和化学治疗等方法。不同的化合物对不同的癌症细胞的细胞活力影响有很大的不同。为了比较不同的化合物对体外培养的肝癌细胞的细胞活力的影响,做了如下实验。利用MTT检测细胞活力的方法,分别检测了不同浓度的阿霉素,顺铂,依托泊苷,5-FU,甲硫哒嗪和白藜芦醇等6种常用化合物对肝癌细胞的细胞活力影响。实验结果表明,阿霉素,依托泊苷,甲硫哒嗪和白藜芦醇的IC50值分别为0.25μg/mL,20μg/mL,500μM,20μM。在一定的浓度范围内,随着阿霉素浓度的升高,肝癌细胞的细胞活力显著下降,正常肝细胞的活力也有一定的下降;随着依托泊苷的浓度的增加,肝癌细胞和正常肝细胞的细胞活力都显著下降;随着甲硫哒嗪的浓度的增加,肝癌细胞活力显著下降,正常肝细胞的活力几乎没有影响。     

毛冬瓜对肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用

研究用系统溶剂法对毛冬瓜80％甲醇微波提取物进行初步分离,应用MTT比色法测定毛冬瓜不同溶剂的提取部位对肝癌细胞株SMMC-77 21的生长抑制作用.结果表明,氯仿提取物和乙酸乙酯提取物表现出显著的抑制作用(IC50分别为221.82 μg/mL和563.64 μg/mL).对于正常肝细胞株L-02,氯仿提取物也具有显著抑制作用,乙酸乙酯提取物的抑制作用则不明显.     

磷灰石超微粉对癌细胞作用的初步研究

磷灰石超微粉由于其特殊的物理化学特性，对癌细胞的生长、增殖有一定的抑制作用。实验中采用磷灰石处理７种癌细胞发经磷灰石超微粉处理的癌细胞的形态、数量发生了明显的变化，癌细胞的生长，增殖受到明显的抑制。     

磷灰石超微粉对癌细胞作用的初步研究

磷灰石超微粉由于其特殊的物理化学特性,对癌细胞的生长、增殖有一定的抑制作用。实验中采用磷庆石处理7种癌细胞发现经磷灰石超微粉处理的癌细胞的形态.数量发生了明显的变化,癌细胞的生长,增殖受到明显的抑制。     

苏木总酚对宫颈癌细胞的作用

用浓度分别为0.5,1.0,l.5,2.0 mg/mL的苏木总酚分别体外培养Hela细胞24,48,72 h后,用MTT法观察其对Hela细胞的生长抑制作用。发现不同浓度的苏木总酚具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖和诱导肿瘤细胞的凋亡的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性。