莱克多巴胺残留检测方法及其进展

本文系统介绍了食品安全中莱克多巴胺测试的意义,并对比分析了酶联免疫方法、免疫层析方法、高效液相法、质谱法、毛细管电泳法、免疫传感器法、化学发光免疫分析法的特点及优劣,并对其发展方向进行了分析和展望。     

猪肝中莱克多巴胺残留的分析研究

优化了莱克多巴胺的仪器分析条件。建立了适合于分析检测猪肝中莱克多巴胺的SPE前处理方法，样品加标回收率为53．75％。66．60％，变异系数0．87％-19.43％。     

利用生物素链霉亲和素放大酶联免疫方法检测猪肉中莱克多巴胺残留

以酶联免疫方法为基础.结合生物素-链霉亲和素系统的放大作用,建立直接竞争生物素链霉亲和素放大酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并将其用于猪肉肌肉组织中莱克多巴胺残留的检测,方法灵敏度(IC50)为(0.3±0.05)ng/mL,样品检出限为(0.3+0.1)ng/kg,平均加标回收率在84%以上.     

动物性产品中莱克多巴胺残留检测技术研究进展

许多国家都明令禁止在饲料中使用莱克多巴胺。有效的检测方法是监测莱克多巴胺滥用的关键。现对近年来国内外用于莱克多巴胺残留的检测方法、研究应用现状及其发展前景进行综述,旨在为动物性产品安全控制提供有益的参考。     

肉及肉制品中莱克多巴胺的ELISA检测方法的建立

建立一种肉及其制品中莱克多巴胺的酶联免疫分析方法。对莱克多巴胺残留量进行选择性(交叉反应)、特异性与检测限以及回收率和精密度测试。结果显示,选择酶联免疫法来检测样品中的莱克多巴胺准确性较好,其对莱克多巴胺结构类似物的交叉反应率都小于1%,出口猪肉罐头和牛肉中的检测限(LOD)分别为(0.28±0.30)μg/kg和(0.26±0.21)μg/kg,样品平均回收率在82.9%～91.1%之间,相对标准偏差为4.3%～8.7%,经高效液相色谱(HPLC)确证假阳性率小于等于2.0%,表明酶联免疫分析定量法可快速、准确实现对食品中莱克多巴胺残留量的快速筛选。     

莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立

以荧光微球作为新型标记物,采用EDC法进行偶联,制备莱克多巴胺抗体荧光微球复合物,复合物粒度均一、性质稳定,并以之为探针建立莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法,检测限为2.5ng/mL,且特异性强、检测范围宽。与胶体金免疫层析方法相比,荧光微球免疫层析方法的灵敏度更高,新型的荧光微球可以提高免疫层析方法的灵敏度。     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺的研究

本实验通过莱克多巴胺抗原抗体的制备、量子点的制备、试纸条的组装和测试等步骤研究一种将量子点应用于莱克多巴胺免疫层析试纸条的新方法。结果表明,莱克多巴胺快速检测试纸条的检测限为3ng/ml,检测时间为10min。本法使用方便、经济,适合于莱克多巴胺现场快速检测。     

动物源性食品中莱克多巴胺的检测

对莱克多巴胺样品提取和检测方法及其进展趋势进行综述,并且对这些检测方法进行总结和比较。     

时间分辨荧光免疫分析法测定莱克多巴胺

目的 用时间分辨荧光免疫分析( TRFIA)方法测定莱克多巴胺(ractopamine,RAC).方法 采用RAC与牛血清白蛋白( BSA)的偶联物(RAC-BSA)包被96孔板为固相抗原,与样品中游离的RAC共同竞争Eu3+标记的抗RAC抗体,用直接竞争法检测尿样中的RAC,并对此方法进行方法学评价.结果 分析灵敏度为0.01 ng/ml;剂量反应曲线线性相关系数绝对值|r| =0.998 5;回收率为91.6％ ～ 110.0％;与多巴酚丁胺、异舒普林、沙美特罗、非诺特罗、克伦特罗、特布他林和沙丁胺醇7种药物的交叉反应率分别小于0.8％、0.1％、0.1％、0.05％、0.01％、0.01％和0.01％;分析内相对标准偏差为2.38％ ～ 3.90％;分析间相对标准偏差为3.68％ ～ 5.43％;与进口ELISA试剂比较,检测结果相关系数r=0.928.结论 莱克多巴胺时间分辨荧光免疫分析法灵敏度比ELISA分析法更高、稳定性更好,具有良好的应用前景.     

莱克多巴胺人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究

盐酸莱克多巴胺（Ractopamine hydrochloride,RCT）是一种β-肾上腺素受体激动剂,即使极低剂量残留对人类健康也有危害。为了建立简单、快速并适应现场检测的免疫分析方法,必须先合成它的人工抗原并进行鉴定。通过对莱克多巴胺进行结构修饰,用碳二亚胺将结构修饰了的莱克多巴胺与牛血清蛋白相偶联,经透析得到纯的莱克多巴胺人工抗原并冷冻干燥备用。结果表明,紫外光谱图中合成的人工抗原的特征吸收峰介于蛋白质和莱克多巴胺的特征吸收峰之间;人工抗原红外光谱图中呈现莱克多巴胺和牛血清蛋白的红外特征吸收峰;通过竞争ELISA实验表明用合成的人工抗原免疫的Balb/c小鼠血清中产生了莱克多巴胺的抗体,三种方法综合鉴定结果表明,莱克多巴胺人工抗原合成成功,该人工抗原可以进一步用于制备抗莱克多巴胺的单克隆抗体。      

基于铜离子显色反应的磁珠免疫分析快速检测黄曲霉毒素B_1

本文提出了一种基于抗体功能化纳米氧化铜信号示踪的比色免疫分析检测黄曲霉毒素B_1。本方法的建立是基于羧基化磁珠表面共价结合抗体与黄曲霉毒素B_1高效结合后,再与静电吸附在纳米氧化铜表面的抗体特异性识别,定量结合的氧化铜标记物可经酸溶解释放出高浓度的铜离子,加入腙类铜离子显色剂即可生成红色络合物,紫外-可见吸收光谱法测定该红色溶液的吸光度,或直接通过目视比色法即可方便地实现免疫分析信号转导从而实现快速检测黄曲霉毒素B_1。结果表明,在培育时间为15 min及加入显色剂浓度为10μmol/L时,该方法具有较高的检测灵敏度并在0.01~100 ng/mL范围内具有良好的相关性,检测下限是0.035 ng/mL。此外,该方法已经成功应用于分析大米样品中的黄曲霉毒素B_1,其结果与GB 5009.22中的方法相一致。     

鱼肉和鹅肉中氯霉素的比色适配体传感器快速检测

本文提出了一种新颖的比色适配体传感器用于快速检测鱼肉和鹅肉中氯霉素(Chloramphenicol,CAP)。本方法的建立是基于核酸适配体特异性结合目标物的高选择性能和氧化钯纳米颗粒(Pd O)标记聚合酶螯合物(En Vision,EV)的双重信号放大效应,它能特异性、灵敏性地快速检测样品中痕量氯霉素。EV上含有大约100个辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP),它能够高效催化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)产生颜色变化,并且Pd O在一定程度上也能催化TMB出现蓝绿色,因此该方法可达到双重放大效果。同时,通过测定TMB吸光度的变化能对应计算真实样品中的氯霉素含量。结果表明,在最佳实验条件下,该方法具有较高的检测灵敏度并在0.02~150 ng/m L范围内具有良好的相关性,检测下限是0.01 ng/m L。此外,该方法已经成功地应用于分析鱼肉和鹅肉样品中的氯霉素,其结果与传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法相一致。     

基于适配体吸附金纳米颗粒比色传感检测组胺

建立一种基于核酸适配体吸附金纳米颗粒（gold nanoparticles,AuNPs）比色传感方法特异性检测组胺的方法。利用组胺的双重作用,1）能与其适配体特异性识别,暴露AuNPs表面;2）多余组胺中的咪唑环结构能取代AuNPs表面的柠檬酸根离子,破坏AuNPs间的相互静电作用,导致聚集现象,进而引起从红到蓝的颜色变化,从而实现组胺的定量检测。利用紫外-可见分光度计考察AuNPs的吸光度变化,得出比色方法的检测限为8.89 nmol/L,线性范围为50 nmol/L～1.2 μmol/L（R2=0.999）。同时,利用手机成像样品,并利用Image J软件分析各样品的红（R）、绿（G）、蓝（B）各通道的值,选用G/R作为检测信号,得出RGB方法的检测限为24.91 nmol/L,线性范围为150 nmol/L～1.0 μmol/L（R2=0.997）。此外,该方法对组胺具有很好的选择性,两种信号输出方式在水样中的加标回收率分别为91.82%～102.27%、98.96%～102.89%;在鱼肉样品中的加标回收率分别为89.77%～108.92%、88.96%～109.82%。本方法简单、快速、便携,尤其RGB方法无需借助精密仪器,即能实现现场即时分析样品的需求,以期该方法能推广于高灵敏监测动物源性食品的新鲜度。     

基于多壁碳纳米管免疫传感器法快速测定食品中的莱克多巴胺

以改性壳聚糖包埋固定羧基化多壁碳纳米管和莱克多巴胺抗体,构建免疫传感器用于莱克多巴胺的检测。以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法表征传感器构建过程和差分脉冲伏安法探究莱克多巴胺抗体/抗原间免疫反应对电流的影响。结果表明,在优化条件下,免疫响应电流与溶液中莱克多巴胺质量浓度的立方根在0.05～4.05 ng/mL范围内呈线性关系,其线性方程为Ip=－4.524 4CRAC1/3＋14.259（R2= 0.990 4 ）,最低检测限为0.08 ng/mL（RSN=3）;所构建的免疫传感器的特异性、稳定性和重复性良好。该法对猪肉、羊肉等样品进行检测,其检测结果与国标方法高效液相色谱法一致,检测快捷方便,可用于食品中莱克多巴胺的快速检测。     

直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37 ℃ 2 h后4 ℃过夜,封闭液为1%牛血清白蛋白,竞争反应1 h。该方法的线性检测范围为0.030～10.595 ng/mL,IC50为0.559 ng/mL;加标回收率为84.9%～103.4%,批内变异系数为3.4%～7.8%,批间变异系数为4.7%～11.8%;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查。     

基于上转换纳米材料与磁分离的荧光免疫分析方法检测食品中酪胺

实验基于间接竞争反应原理,结合上转换纳米材料与磁分离技术,建立分析食品中酪胺荧光免疫的方法,并进一步应用于肉制品、水产品及发酵制品中酪胺的检测.最佳实验条件为12μg抗体偶联NaYF4Yb,Tm上转换纳米材料制备信号探针,70μg包被原偶联磁性聚苯乙烯微球制备捕获探针,信号探针添加量为70μL,感应探针添加量为100μ...     

化学发光酶免疫分析法检测食品中赭曲霉毒素

目的：建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法：采用棋盘滴定法确定OABSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果：确定的检测工作条件为：OA-BSA 最佳包被质量浓度60ng/mL,抗OA 单克隆抗体的最佳工作稀释度1:400,校正曲线线性范围6～400ng/mL,赭曲霉毒素的检出限为0.02ng/mL,50% 抑制质量浓度145ng/mL,在100～2000ng/g 添加水平的回收率范围为83.6%～105.8%。用所建方法对质控样品进行了分析,检测结果符合率达到100%。结论：所建方法准确、灵敏,适用于食品中OA 的筛选。     

基于谷胱甘肽识别系统的胶体金比色法快速检测水中重金属铅离子

基于谷胱甘肽的胶体金比色法建立简单快速检测水中重金属铅离子的方法。利用谷胱甘肽能够抑制高浓度的盐溶液聚集,同时在加入Pb~(2+)的情况下,又能够使胶体金发生聚集,从而使胶体金的颜色发生变化。在优化条件下,比色法检测铅离子的线性范围为10.36~1 036 ng/mL,检出限为2.072 ng/mL,加标回收率为99.1%~103.6%,相对标准偏差小于4%。该方法检测灵敏度高,稳定性和重复性较好,可作为测定水中重金属铅离子含量的快速检测方法。     

诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化

采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07～31.8ng/mL,半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液中pH值和磷酸根离子浓度的最佳参数分别为7.4和10mmol/L;对甲醇和NaOH溶液(30mmol/L)的最佳调整体积分数分别为30%和10%。抗体具有广谱特异性,与环丙沙星(83.3%)、培氟沙星(78.9%)、依诺沙星(68.2%)、恩诺沙星(51.7%)和洛美沙星(41.7%)有较高的交叉反应率,可用于氟喹诺酮类药物(FQs)多残留检测方法研究。     

基于磁性金属有机框架分离的纳米金比色法检测单核细胞增生李斯特菌

以磁性金属有机框架复合材料作为捕获探针,免疫功能化纳米金作为信号探针,建立一种纳米金比色法快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。结果表明：在最适条件下,单核细胞增生李斯特菌的可视化检出限为1.2×10³ CFU/m L,紫外光谱检测结果在1.2×10¹～1.2×10⁸ CFU/mL范围内有良好的线性关系(Y=0.519-0.043X,R²=0.978),检出限低至0.45 CFU/mL,各浓度梯度的批内变异系数在0.31%～1.30%之间。将单核细胞增生李斯特菌接种到鸡胸肉上进行检测,其加标回收率在91.1%～108.7%之间,变异系数不高于7.4%,且结果与平板计数法一致。本方法具有准确、灵敏、快速等特点,在食源性致病菌检测方面具有较好的应用前景。