啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（一）

目的研制啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的准确高效测定。方法Z4蛋白质与弗氏佐剂乳化后免疫BALB／C小鼠,采用间接ELISA法筛选阳性克隆株。按照传统杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果成功地获得两株Z4蛋白质的单克隆抗体,为其啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质基础研究及其鉴定奠定了基础。     

啤酒中泡沫活性Z4蛋白质提取参数及与泡持性的关系研究

啤酒泡沫是消费者在接受啤酒时首先考虑的因素之一,也是啤酒的一项重要的感观指标.泡沫活性蛋白质是啤酒泡沫中最重要的组成部分,其中Z4蛋白质约占啤酒泡沫蛋白质Z的70%.主要研究了Z4蛋白质的提取条件,确定了Z4蛋白质的提取参数,为研究泡沫活性Z4蛋白质提供了理论依据.同时,还对泡持性与Z4蛋白质的关系进行了探讨.     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的提取及鉴定

主要研究了泡沫活性蛋白质中最重要的Z4蛋白的分离提纯,并利用蛋白免疫印记法(Western Blot)以及质谱(Mass Spectrometry)鉴定Z4蛋白质。此外,还探讨了Z4蛋白质的含量在酿造过程中的变化。实验结果表明,Z4蛋白质的pI值为5.5~6.0,分子质量为43ku,其抗体鉴定Z4有很高的相关性。在酿造过程中,泡沫活性蛋白质发生了很大的变化。     

双抗体夹心法测定啤酒中的泡沫活性蛋白的研究

啤酒泡沫是决定啤酒质量的重要因素之一,也是消费者评价啤酒质量好坏的第一特征.泡沫活性蛋白是啤酒泡沫中的重要成分,而Z4蛋白又是泡沫活性蛋白的主要成分.实验主要进行了Z4蛋白的提取纯化和Z4蛋白的单克隆抗体的开发,以及利用夹心法测定Z4蛋白的参数条件的优化和测定结果与泡持性的关系的研究.     

啤酒泡沫蛋白质的二级结构特点及其质谱鉴定

泡沫蛋白质对啤酒泡沫性能有重要影响。采用圆二色光谱技术研究啤酒泡沫蛋白质和麦芽蛋白质的二级结构构象特点,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D SDS-PAGE)与液质(LC-MS/MS)联用对啤酒泡沫蛋白质进行分离与鉴定。结果显示,麦芽蛋白质以α-螺旋结构为主,而啤酒泡沫蛋白质以β-折叠和无规则卷曲为主,并未表现出典型的α-螺旋双负峰特征,这种结构有利于泡沫蛋白质的疏水性,从而有利于啤酒泡沫的稳定性。经质谱检测,啤酒泡沫蛋白质中共鉴定出11种蛋白质,包括蛋白质Z4、LTP1、BDAI-1及部分酶抑制剂和少量醇溶蛋白片段。     

啤酒和啤酒泡沫中蛋白质组成的差异性比较

利用SDS-PAGE、双向电泳仪、氨基酸分析仪对啤酒和啤酒泡沫中蛋白进行了系统的检测,并探讨了泡沫活性蛋白的组成。结果表明：啤酒和啤酒泡沫蛋白的分子量分布相似,：均由43kD和7-17kD的蛋白组成;在分子量和等电点的分布上啤酒泡沫蛋白的分布要少于啤酒蛋白的分布;双向电泳未能成功检测出单向电泳可测出的在7～10kD间的丰富蛋白分布,但检测到了多个12kD和17kD蛋白;并得出除蛋白质Z、脂转移蛋白外。醇溶蛋白残片也应是泡沫蛋白的一个重要组成。     

抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及免疫学鉴定

通过碳化二亚胺法(EDC法)制备免疫原OTA-BSA,并免疫小鼠,经杂交瘤技术建立产抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株。通过体内诱生腹水法制备腹水,纯化后对其亚型、效价、灵敏性、亲和性、特异性等免疫学特性进行鉴定;单抗亚类为IgG1型,间接ELISA效价1:6.4×105,IC50为112.8pg/mL,亲和常数为9.74×1011L/mol,与赭曲霉毒素B交叉反应率为5.6%,与其他常见真菌产物交叉小于0.003%;本实验制备的抗OTA单克隆抗体具有高效、敏感、特异等特点,适合OTA的免疫学快速检测。     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

牛奶过敏原β-乳球蛋白抗体的制备及免疫检测方法的建立

本文将牛奶过敏原β-乳球蛋白抗原分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠制备其多克隆抗体和单克隆抗体,并对所获得的抗体进行了效价等特性测定;采用蛋白A亲和层析法将多克隆抗体进行了纯化,采用辛酸-硫酸铵法对单抗细胞株3A7进行了纯化;实验建立了双抗体夹心的ELISA检测方法,并对一些蛋白样品进行了初步的检测。实验结果表明,所制备的抗β-乳球蛋白兔多克隆抗体效价达到了1:6.56×106;Western-blotting鉴定结果显示所制备的多克隆抗体能够与β-乳球蛋白特异性反应;3株单抗的效价均在106以上,纯化后多抗仅与酪蛋白有一定的交叉反应,而纯化后单抗与乳中主要蛋白及其它过敏原蛋白基本没有交叉反应,特异性很好;利用所建立的方法对一些蛋白样品进行检测,准确率100%。     

啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化研究

泡沫蛋白质是啤酒泡沫的骨架,其含量和性质很大程度上决定了啤酒泡沫的质量.蛋白质Z和脂转移蛋白(LTP)是啤酒泡沫蛋白质中的关键组分,实验究考察了啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化过程.结果显示:在糖化过程中,分子量为53ku及20～40ku的蛋白质被分解,蛋白质Z及LTP的含量没有太大变化;麦汁煮沸过程中蛋白质含量逐渐减少,蛋白质Z、LTP1和LTP2分别减少了11％、32％及26％;主酵过程中,蛋白质Z、LTP1和LTP2的降幅较大,分别为12％、59％和31％;后酵过程中,蛋白质Z和LTP1的含量基本不变,LTP2的含量逐渐降低,到后酵结束,LTP2的降低幅度达22％.     

啤酒中疏水性蛋白质提取鉴定及其对于泡沫性能的影响的研究

利用蛋白疏水层析色谱法(HIC)从啤酒泡沫中分离疏水性蛋白,研究发现,HIC依次分离的蛋白组分表面疏水性增强的同时,泡沫稳定性随之增强,说明HIC分离得到强疏水性多肽对于啤酒泡沫稳定性具有较明显的积极作用,而弱疏水性多肽的影响效果不明湿.此外通过质谱(Mass Spectrometry)鉴定结果显示所得到的疏水性蛋白质为蛋白质乙,通过对啤酒酿造过程中的关键控制点的跟踪,确定了啤酒酿造过程中,发酵阶段疏水性蛋白质的损失最为严重,对啤酒泡沫质量的影响最大.     

蛋白质组成对啤酒浑浊和泡沫稳定性的影响

在中型(50L)和小型(700—800mL)酿酒试验中，利用免疫化学技术包括酶联免疫吸附法(ELISA)，对通过麦芽性状来预测啤酒质量的方法进行了研究报道。该方法主要在啤酒泡沫蛋白和利用硅胶提取的蛋白质中加入多克隆抗体和单克隆抗体，通过抗原抗体间的反应和免疫印迹进行鉴别，研究发现ELISA法可以鉴定不同的麦芽蛋白质。随着免疫化学技术的发展，该方法可为酿造者选择高质量的麦芽，以提高啤酒泡沫的稳定性和降低浑浊形成的机率提供依据。     

基于酿造大麦育种的DNA分子标记法结合啤酒泡沫稳定性的研究

啤酒的泡沫稳定性是直观评价啤酒品质的重要标准,和大麦品质有关。DNA分子标记是一种简单、高效评价大麦的方法,蛋白质Z4和Z7以往都是作为影响啤酒泡沫稳定性的潜在因素来研究的。本研究通过检测10个品种大麦制成的麦芽酿造的24个啤酒样品,发现啤酒中蛋白质和泡沫稳定性之间存在一定的联系。实验数据显示啤酒中蛋白质z4与蛋白质Z7分别对泡沫的稳定起积极作用和消极作用。通过研究DNA分子标记物连接不同品种间的大麦蛋白质Z4和Z7组分的核苷酸序列翻译起始密码子的位置,发现分别在蛋白质Z4和Z7中检测到了5号和23号核苷酸序列具有多态性。因此,用酶切扩增多态性序列（CAPS）标记物做进一步研究,CPAS标记蛋白质Z4和Z7,可将23种大麦组分有效的分成2个蛋白质Z4基因型（蛋白质Z4-H和蛋白质Z4-L）和3个蛋白质Z7基因型（蛋白质Z7-H,蛋白质Z7-L,蛋白质Z7-L2）单体,其中蛋白质Z4中蛋白质Z4-H含量较高,而蛋白质Z7中蛋白质Z7-H和蛋白质Z7-L2含量相对较低;蛋白质Z4-H和蛋白质Z7-L分别对啤酒泡沫稳定性的贡献高于蛋白质Z4-L和蛋白质Z7-H。实验结果表明：这些CAPS标记物为大麦育种过程中选择具有啤酒泡沫稳定性的大麦提供了有效的方法。     

芝麻过敏原油质蛋白O leosins单克隆抗体的制备与鉴定

利用细胞融合技术制备小鼠抗油质蛋白杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。获得10株杂交瘤细胞,分别命名为1B2、2D8、2F3、3A4、3D7、3F8、4A10、4F12、6A12、6E7,利用Ig亚类鉴定试剂盒鉴定各单克隆抗体的Ig亚型,除1B2、3D7、3F8为IgG1类外其余均为IgG2a类型。将杂交瘤细胞株注射入小鼠腹腔获取腹水,应用Protein A亲和层析法对腹水进行纯化。单抗效价有9株在2.0×105以上。ELISA和Western blotting分析表明这些单抗均能特异性识别芝麻过敏原油质蛋白。     

利用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定啤酒中泡沫活性蛋白的研究

利用多克隆抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定啤酒中泡沫活性蛋白的研究已有报道.现已有一些单克隆抗体用于啤酒泡沫活性蛋白的测定,这些单克隆抗体使我们能利用一种夹心酶联免疫吸附法检测啤酒泡沫活性蛋白,与我们以前的酶联免疫吸附法相比较,这种新的方法体系具有以下的优势测定泡沫活性蛋白的检出限大大提高,利用新体系定量测得的泡沫活性蛋白的量与啤酒泡沫的粘附力高度相关,这种体系被用于酿造过程中泡沫活性蛋白的评估.     

啤酒中浑浊敏感蛋白单克隆抗体制备及其鉴定

使用已纯化的浑浊敏感蛋白免疫BALB/c小鼠,利用传统杂交瘤技术制备单克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞株,及免疫印迹实验(Western blot)进行单抗特异性鉴定.获得针对浑浊敏感蛋白的特异性单克隆抗体共3株,经鉴定具有较好的反应特异性;有望应用于优化啤酒工艺中.具有潜在的应用价值.     

大米辅料啤酒中蛋白质疏水性与蛋白质泡沫稳定性的分析

着重探讨了添加大米辅料对啤酒中蛋白质疏水性和泡沫稳定性的影响。研究发现,大米辅料添加量从10%增加到30%,疏水性指数从118. 86逐渐减少至103. 87,而泡沫稳定性由62. 14%增加到68. 25%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析啤酒中来源于大米的蛋白质,发现大米啤酒中蛋白质Z含量较小而且含有一定量的RAG2蛋白,从而对啤酒泡沫稳定性形成一定的影响。     

单克隆抗体Sandwich-酶联免疫吸附法检测啤酒泡沫活性蛋白的进展

以前报道了以多克隆抗体为基础的酶联免疫吸附法（ELISA）测定泡沫性蛋白及混浊活性蛋白，与啤酒中泡沫活性蛋白对应的几种单克隆抗体的研究，使我们研发了一种通过sandwich-ELISA方法用单克隆抗体检测泡沫活性蛋白成为可能。与我们先前的ELISA方法相比，新的方法显示出了以下的优点：泡沫活性蛋白的检测极限得到了很大的提高，泡沫活性蛋白的含量与啤酒泡沫的附着力有更高的相关性，此系统被用于酿造过程中泡沫活性蛋白的评价。     

副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体,解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约,以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC 17802标准菌株免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选,获得稳定分泌抗副溶血性弧菌(ATCC 17802)菌株的单克隆杂交瘤细胞株3F7D7E8C4,通过体内诱生腹水大量制备抗体,用亚类试剂盒测定抗体亚类为Ig G1;采用辛酸硫酸铵沉淀法以及亲和层析柱对腹水进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳实验鉴定单克隆抗体的纯度。制备得到腹水抗体效价为1∶16 000,纯化后抗体效价为1∶8 000,抗体敏感性IC_(50)达到10~6 CFU/m L。纯化后的抗体与12株副溶血性弧菌均能特异性结合,与其他9种非副溶血性弧菌的食源性致病菌均无交叉反应。     

啤酒和泡沫蛋白的氨基酸分析

通过对啤酒和啤酒泡沫的氨基酸分布进行检测,发现如下规律:啤酒泡沫1相对啤酒的蛋白组成氨基酸的变化较小;而泡沫2蛋白的氨基酸组成较啤酒和啤酒泡沫1变化较大。啤酒、泡沫1、泡沫2 的相对理论疏水值均为负值,依次递增。就总游离氨基酸相对疏水程度的变化而言,啤酒、泡沫1、泡沫2 的值略呈下降趋势,但均为正值。啤酒泡沫蛋白实际上是包括蛋白质Z、脂转移蛋白、醇溶蛋白残片等在内的复杂蛋白。