RNA干扰抑制COX-2的重组腺病毒的构建及体外抗肿瘤活性

环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)是肿瘤治疗中的一个重要的靶向基因。可COX-2抑制剂因易引发肝损伤的副作用,影响了COX-2抑制剂在临床上的应用。本研究构建出运载小干扰RNA的重组腺病毒试图解决上述难题。实验结果显示:癌细胞系中的COX-2成功被抑制,同时活细胞计数实验结果表明COX-2在癌细胞中的抑制能促使癌细胞生长受到抑制,而正常细胞不受到影响,证明该载体系统能有效解决COX-2抑制剂易引发肝损伤的毒副作用,为其临床应用提供了坚实的基础。     

纳米技术在生物医学方面的应用

纳米颗粒（NPs）具有较高的科学研究价值,它是宏观物质和微观粒子之间的桥梁。本文阐述了纳米颗粒在生物医学中的应用,包括药物载体,表面拉曼增强效应,量子点,磁性纳米颗粒等。在治疗癌症,基因工程,生物代谢,胚胎发育等领域内的研究取得了突破性进展。     

用纳米技术诊断与治疗恶性肿瘤的进展

利用纳米技术进行恶性肿瘤早期诊断和治疗是目前国际生物技术领域中最前沿的研究课题，迄今实验室细胞模型（in vitro)研究和临床前动物模型（in vivo)研究已取得了重大进展，纳米生物技术将成为继放疗，化疗和手术，治疗后治疗基因疾病的更有效的方法，纳米生物技术涵盖纳米材料科学，构成纳米药物载体平台的纳米材料与药物或基因结合的组装技术以及随后与靶向物质结合的组装技术，目前，实现了纳米生物传感器在肿瘤细胞上的表达，纳米基因药物能够抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，但在临床治疗之前为了确保安全，有效，首先应该研制出针对部细胞表面配位子特意性更强的靶向物质，以减少对正常组织的损害，此外，还需提高纳米材料药物的装载量和稳定性，并研制出适宜的纳米材料以及相应的制备技术。     

纳米羟基磷灰石颗粒负载p53基因对肝癌干细胞抑制效果

为评估纳米羟基磷灰石颗粒负载p53基因对肝癌干细胞的抑制效果,采用化学沉淀法制备羟基磷灰石,对其进行表征,并检测其生物相容性。通过成球培养法获得肝癌干细胞,用经聚乙烯亚胺(PEI)修饰的纳米羟基磷灰石颗粒(HP)负载p53基因(HP-p53)处理肝癌干细胞,用MTT法、hoechst 33258染色综合评估杀伤效果。结果表明:所制备的纳米颗粒主要成分和晶型为羟基磷灰石,呈短棒状,长径为20~50nm,短径约为20nm,并具有良好的生物相容性和降解性;HP-p53处理后的肝癌干细胞存活率显著下降;用Hoechst 33258染色观察到HP-p53处理后的肝癌干细胞细胞核出现高亮光斑,细胞密度降低,表明所制备的纳米羟基磷灰石负载p53基因对肝癌干细胞具有显著的抑制效果。     

RNA干涉和小干涉RNA

RNA干涉(RNA interference.RNAi)可以抑制诸多真核基因的表达,小干涉RNA(small intmference
RNA,siRNA)是RNA干涉的引发物，不同的siRNA可以引导不同水平的RNA干涉，不同种细胞中siRNA的寡核苷
酸链的性质也有很大的不同.非编码RNA中的微小RNA(micnoRNA,miRNA)与siRNA在结构及作用方式等方面有
很多区别和联系.RNAi的作用机制大致有两种：在Drosophila中的一般作用模式和在C.elegans中的扩大作
用模式.利用RNA干涉技术可以通过抑制基因的表达来研究其功能；RNA干涉作为基因治疗的工具，在肝炎
和AIDS的治疗过程中有一定的作用.RNAi的高特异性、高效性、放大效应和无细胞特异性等特点在科研中
得到了广泛的应用.     

纳米羟基磷灰石的表面改性及其细胞毒性的研究

利用聚乙烯亚胺(PEI)和聚丙烯酸钠(PAA)对纳米羟基磷灰石(nHA)进行表面改性,并从影响细胞增殖和凋亡的角度出发,采用四唑盐比色法(MTT法)和荧光染色法对改性后的纳米羟基磷灰石颗粒进行了体外细胞毒性评价。结果表明:利用PEI和PAA可以显著地改变nHA的表面电性;而细胞的毒性与其共培养的颗粒表面电性、浓度和共培养时间有关,在较低浓度下,没有经过表面改性的纳米羟基磷灰石颗粒具有最好的细胞相容性,其细胞毒性为0级,PEI改性的纳米颗粒的细胞相容性最差,而PAA改性的纳米颗粒的细胞相容性介于二者之间。初步证明了表面电性对材料细胞毒性的影响,即正电性纳米颗粒的细胞毒性较大。     

接枝TAT和RGD对Mg-CaPNPs-CKIP-1siRNA载体系统的体外胞吞和生物学效应的影响

磷酸钙纳米粒(CaPNPs)作为基因载体具有良好的生物相容性;然而,CaPNPs通常表现出较低的转染效率.细胞穿透肽(TAT)可以增加纳米颗粒的摄取,但由于其非特异性而受到限制.纳米载体表面接枝细胞黏附肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸,RGD)可增强其靶向性.Plekho1基因编码酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(CKIP-...     

食管鳞癌中3个新miRNA的分子功能预测

为寻找食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)诊断与治疗的新分子标志物,利用实时定量荧光PCR技术检测ESCC中3个未知miRNAs(miR-3914、miR-8082和miR-4770)的表达状况;运用生物信息学方法分别对它们差异表达miRNA下游的候选靶基因做基因本体(gene ontology,GO)富集和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析;采用蛋白免疫印迹方法观察转染miRNA mimic后一些与癌症发生和发展相关蛋白的表达改变.结果显示,与食管癌癌旁正常组织和正常食管上皮细胞比较,在ESCC组织/细胞中的miR-3914和miR-8082表达均呈显著性降低(P 0. 05),但miR-4770无明显的表达变化. GO富集分析发现,miR-3914和miR-8082参与RNA聚合酶II启动子转录、蛋白结合和细胞凋亡等生物学过程; KEGG富集分析发现,miR-3914和miR-8082两者均与癌症相关通路有关,且均可调控LAMC2、CCDC6和PDGFB基因.当ESCC细胞分别转染miR-3914 mimic和miR-8082 mimic后,与未转染组比较,p53蛋白质表达增加,而c-Myc和Bcl-2蛋白质表达降低.研究结果表明,miR-3914和miR-8082各自均具有成为辅助ESCC早期诊断与精准治疗生物靶标的潜能.     

羟乙基纤维素接枝聚丙烯酸纳米颗粒的制备及药物缓释

羟乙基纤维素接枝聚丙烯酸共聚物(HEC—g—PAA)在选择性溶剂中进行自组装，制备了具有良好分散稳定性的纳米颗粒，用动态激光光散射和透射电子显微镜对纳米颗粒大小分布和形态进行了表征。以生物可降解的HEC—g—PAA接枝共聚物负载模型药物布洛芬(Ibuprofen)，制备载药纳米颗粒(Ib—HEC—g—PAA)，在37℃于不同pH的缓冲溶液中进行了体外释放研究，药物释放速率的测定结果表明，以HEC—g—PAA作为布洛芬的载体，可以在选择性条件下实现药物可控释放的目的。     

木质素基纳米颗粒的制备及应用研究进展

木质素纳米颗粒的制备为木质素的高价值化应用开辟了新的途径。基于近几年国内外最新研究进展,概述了木质素纳米颗粒的主要制备方法,包括反溶剂滴加法、二元乳化法、溶剂交换法和高效蒸发法等,分析了其在纳米载体(贵金属载体、药物运输载体、药物缓释剂)和纳米填料(紫外线吸收剂、水凝胶基体、稳定助剂)等领域的应用前景,为木质素纳米颗粒的可控制备及高值化应用提供理论基础。     

一种适合富含多糖、多酚植物的RNA提取方法

研究了一种适合富含多糖、多酚植物的RNA提取方法。采用CTAB(十六烷基溴化三甲胺)裂解植物材料,与细胞中的核酸形成核酸-CTAB复合体,然后用氯仿-异戊醇去除细胞裂解液中的蛋白,最后采用LiCl选择性沉淀其中的RNA。此方法适用于多种植物组织包括根、茎、叶、花、果实等的总RNA提取,所提RNA适合进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。     

基于禁忌遗传算法的RNA二级结构预测

生物RNA二级结构预测是生物信息学领域的一个重要研究问题.近来,研究人员提出应用元启发式算法来预测RNA二级结构.该文提出基于禁忌遗传算法的RNA二级结构预测方法(TGARNA),给出茎区相容性检测改进方法,保留最长茎区构造茎区相容个体,以改善种群性能;同时将禁忌搜索融入遗传操作以防止近亲繁殖,保持种群多样性.仿真实验...     

真菌中RNA的提取方法

采用异硫氰酸胍和Catrimox 14TM联合变性,酚、氯仿和异戊醇抽提的方法,对真菌总RNA进行提取。得到的RNA样品经过紫外分光光度法和甲醛变性凝胶电泳检测,证实为完整、均一的总RNA,为构建真菌的cDNA文库和筛选差异表达的基因奠定了基础。     

RNA在植物细胞中的定位及其研究进展

评述RNA在植物系统中的亚细胞定位、定位机制及活细胞中RNA成像的最新研究成果.指出RNA在细胞质内存在多处不同位点,且因存在多种不同的RNA定位途径将RNA运送并释放到特异位点.RNA的亚细胞定位与蛋白质定位、RNA存在状态、极性细胞的生长及RNA在细胞中的功能密切相关,该定位过程对植物建立和维持细胞极性生长有重要意义.目前RNA成像技术的不断更新,表现在利用基因工程技术构建RNA报告分子,直接标记RNA等方法的成功应用,对植物细胞中RNA的定位及其机制研究有很大的推进作用.     

高压脉冲电场促进啤酒酵母细胞RNA快速溶出的技术

以啤酒废酵母泥为原料,以啤酒废酵母细胞中的RNA溶出率为衡量指标,对比分析了高压脉冲电场(HPEF)技术对啤酒废弃酵母中RNA在水、乙醇、三氯乙酸3种提取溶剂中的溶出情况,并借助二次通用旋转组合实验设计,构建出HPEF快速提取啤酒废酵母细胞中的RNA的数学模型;对比发现,以乙醇为提取溶剂的RNA得率是水的1.69倍,RNA得率提高了40.86%,进而优化出HPEF提取RNA的最佳工艺参数为:以体积分数50%的乙醇为提取溶剂,电场强度为50kV/cm,脉冲数为2个(电场作用时间仅为0.0067s),液料比为30∶1,且在该条件下溶出的RNA得率达到0.85%。     

RNA二级结构预测SVMs模型研究

扩展NSSEL标签,对RNA分子中的stem-loop结构和伪结结构进行标记.将RNA分子序列中的碱基编码输入,经过支持向量机(support vector machines,SVMs)模型计算输出相应的结构标记.该模型经过训练后,待预测的RNA分子序列可得到对应的结构标识序列,这些标识序列可通过特定算法,唯一构建包括伪结在内的二级结构.实验结果表明,该算法在可接受的预测精度范围内具有较低的计算复杂度,克服了传统算法计算时间过长,无法在有限时间内得到有效结果的缺点.     

啤酒酵母RNA提取条件的优化及其磁性固定化

通过浓盐法对啤酒酵母RNA进行提取,以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛交联法对RNA进行磁性固定化。通过比较反应体系中的无机磷和总磷的质量分数,对RNA的提取条件和固定化条件进行优化。结果表明,RNA提取温度对提取率的影响最为显著;在提取时间4h、提取温度100℃、氯化钠质量分数为10%和酵母质量分数为8%的最优条件下,RNA提取率达到6.13%。戊二醛交联法磁性固定化RNA的最佳条件为:反应时间4h,温度40℃;RNA最佳添加量为30mL(质量浓度2mg/mL)。     

三种启动子shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸 (small interfering RNA siRNA)，设计采用特异性延伸引
物和上游、下游两条通用引物，通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6
+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子 小发夹状RNA（shRNA）表达框.用该方法制备的增
强型绿色荧光蛋白（EGFP）特异性三种启动子 shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因
表达，其中以tRNAVal shRNA表达框抑制效果最显著，且未检测到干扰素应答基因2'5'OAS mRNA的表达，
表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应，进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最
适搭配启动子.     

A study of the effect of Sudan Ⅰ, Ⅲ, and Ⅳ on the DNA/RNA ratio and 3D structure of HepG-2 using LCM

To explore the effect of sudan Ⅰ, Ⅲ, and Ⅳ on the DNA/RNA ratio and changes in the 3D structure of HepG-2. LCM and 3D images are used to detect the DNA/RNA ratio and changes in the 3D structure of HepG-2 when treated with different dosages of sudan Ⅰ, Ⅲ, and Ⅳ. The DNA/RNA ratio of the control group is 1. 223 2 ± 0. 084 4, while the fluorescence intensity of DNA in HepG-2 treated with sudan Ⅰ, Ⅲ, or Ⅳ is markedly greater than that of RNA, with the low-dosage group showing significant effect (P ＜ 0.01 ), yielding DNA/RNA ratios of 1. 609 6 ±0. 199 0, 1. 445 5 ±0. 163 3, 1. 708 1 ±0. 109 0 respectively; 3D images show that DNA fluorescence in HepG-2 is mostly concentrated in the nuclear region, and is denser and stronger than RNA fluorescence. The DNA/RNA ratio of a treated group increases after being treated with different dosages of sudan, but it declines with increasing dosage, and within a certain dosage range, sudan Ⅰ, Ⅲ, and Ⅳ are shown to promote the growth of HepG-2.