产细菌素乳酸菌的筛选及其发酵特性

从传统发酵制品中分离出60株乳酸菌,在排除有机酸及过氧化氢的干扰后,从中筛选出抑菌活性较高的菌株P-319,经常规生理生化实验,鉴定该菌株为短乳杆菌。其发酵上清液经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌活性丧失;对其抑菌谱的测定表明,其能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长,但对霉菌和酵母菌没有任何抑制作用。产细菌素的发酵过程测定结果表明,该菌株在MRS培养基中30℃培养24 h时,抑菌活性达到最高。     

抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究

结合涂布平板法和温室盆栽植株法,测定了41株枯草芽孢杆菌发酵液对灰霉病病原菌及黄瓜灰霉病的抑制效果,以此筛选出针对灰霉病的生防菌株．结果表明,抑菌效果最好的枯草芽孢杆菌为BS01和BS03．采用涂布平板法研究了菌株BS01和BS03抑菌活性,结果表明,抑菌效果均为50％时,BS03比BS01的菌体浓度低,得到抑菌效果最好的菌株BS03．采用温室盆栽植株法测试了菌株BS03的抑菌活性,结果表明,菌悬液比发酵滤液的抑菌效果好,并且在菌悬液处理黄瓜苗后的第3天抑菌活性最高．     

嗜酸乳杆菌产细菌素的分离纯化研究

对一株嗜酸乳杆菌所产细菌素进行了分离纯化,并研究了其生物学特性.结果表明,嗜酸乳杆菌产的细菌素具有热稳定性,在120℃处理30 m in仍保留活性,该细菌素在pH2.0~9.0范围内有较好的稳定性.发酵上清液对蛋白酶敏感,表明此抑菌物质为蛋白类物质,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均有抑制作用.发酵上清液经过硫酸铵沉淀、透析后得到细菌素粗提液,然后利用SephadexG-50凝胶层析进行纯化,采用Tricine-SDS-PAGE电泳测其相对分子质量约为2 000.     

链霉菌TD-1菌株抑菌活性物质发酵条件的优化

利用正交设计法及均匀设计法对链霉菌TD-1菌株发酵条件进行了优化,研究不同发酵因子对链霉菌TD-1产抑菌活性物质的影响.结果表明,发酵培养基中影响抑菌活性大小的主要因素为葡萄糖、黄豆粉、硫酸亚铁、磷酸氢二钾及硝酸钾;抑菌活性物质较佳发酵条件为90 mL/250mL三角瓶,接种量的体积分数为0.06,发酵周期8 d,初始pH值为7.15.在此条件下,最终抑菌效率与原发酵液相比发酵液对串珠镰刀菌抑菌活性提高了53.38%.     

海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。     

海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。     

一株具抗菌活性的恒山黄芪内生真菌的分离与鉴定

从药用植物恒山黄芪的根、茎、叶中分离出49株内生真菌,经抗菌活性检测,筛选出1株具有高活性广谱抗菌的菌株AR08,经形态特征和ITS序列鉴定菌株AR08为烟曲霉(As-pergillus fumigatus).其抗菌谱表明,它对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及测试的植物病原真菌均具有很强的抗性.     

一株新型乳酸菌素产生菌的分离及其鉴定

从新鲜牛乳中分离得到乳酸菌Ｘ４。该菌株在发酵过程中产生的乳酸菌素有较广的抑菌谱,不仅对芽孢杆菌,葡萄球菌、链球菌等革兰氏阳性细菌的生长具有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阳性铁生长也具有较强的抑制作用。经鉴定,Ｘ４菌株为乳脂链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓｓｐ．Ｘ４）。     

一株拮抗绿脓杆菌的抗菌蛋白产生菌的分离与鉴定

获得了产生拮抗绿脓杆菌抗菌蛋白的菌株。从土壤样品中筛选拮抗绿脓杆菌的菌株,采用形态学和16S rDNA分析鉴定其分类地位,采用琼脂平板扩散法测定分离菌发酵产物拮抗绿脓杆菌的活性,采用硫酸铵沉淀、分子筛分离发酵上清中的目标蛋白,测定了目标蛋白的蛋白酶敏感性、高温耐受性。结果表明:从土壤中分离出的该株不动杆菌,从其发酵产物中纯化出的目标蛋白有拮抗绿脓杆菌的活性;该目标蛋白对蛋白酶K或高温敏感,处理后可降低或丧失抗绿脓杆菌的活性,该抗菌蛋白相对分子量约35 KD。     

干酪乳杆菌IMAU10041抗甜瓜枯萎病菌的作用及理化性质

从60株乳酸菌中筛选出22株具有抗甜瓜枯萎病菌活性的乳酸菌菌株,其中9株具有较强抗甜瓜枯萎病菌活性.对这9株乳酸菌的抗植物致病真菌谱进行研究发现,9株菌对番茄早疫病菌（Alternaria solani）、甜瓜疫霉菌（Phytophthora drechsleri Tucker）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulate）、灰葡萄孢霉菌（Botrytis cinerea）的生长均有抑制作用.其中干酪乳杆菌IMAU10041对甜瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用,并且对甜瓜疫霉和番茄早疫病菌有较高的抑菌活性.分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理干酪乳杆菌IMAU10041的发酵滤液后,发现干酪乳杆菌IMAU10041发酵液具有一定的热稳定性;在pH 4.0时具有最大抑菌活性,在碱性条件下抑菌活性迅速失活;发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,这表明干酪乳杆菌IMAU10041发酵液中可能含有一定的蛋白类抑菌物质.     

发酵条件对短乳杆菌P-347生长和产细菌素的影响

采用单因素法,以MRS培养基为基础培养基,对短乳杆菌P-347产细菌素的适宜碳源和氮源的种类、氮源的浓度、起始pH和培养温度进行了初步探索。以金黄色葡萄球菌AS1.72为指示菌,采用牛津杯定量扩散法检测发酵上清液的抑菌活性。结果表明,短乳杆菌P-347以葡萄糖为碳源,以大豆蛋白胨为氮源,在起始pH 5.0、37℃培养24h,可获得最大菌体密度;以2%葡萄糖为碳源,以1%酪蛋白胨为氮源,在起始pH 6.5、30~37℃培养24h,发酵上清液的抑菌活性最大,抑菌圈直径为32.5mm。     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测

将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15ku一致,其表达量占分泌总蛋白的32%。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋白对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用,表明在毕赤酵母中成功表达了重组人溶菌酶。     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测

将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确.电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15 ku一致,其表达量占分泌总蛋白...     

一株降胆固醇作用乳酸菌KF5的分离与鉴定

利用邻苯二甲醛法,从源于西藏Kefir粒的56株乳酸菌和实验室保存的9株乳酸菌中,筛选得到了一株降胆固醇效果明显的乳酸菌KF5．经生理生化实验及分子遗传学鉴定,该菌株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）．为了能够进一步研究KF5的降胆固醇功能,对其进行了生物学特性的考察．结果表明,KF5具有较好的耐酸性以及一定的胆盐耐受力．     

海绵中生物表面活性剂生产菌的筛选及菌种鉴定

海绵(Marine sponge)是一大类低等多细胞动物,其体内及体表富集了大量的、不同种类的微生物。本文分别从繁茂膜海绵和南海海绵中,经富集培养、血平板分离、油扩散技术和表面张力测定等方法分离到高效产生物表面活性剂的菌株H10和菌株S6X。采用16S rDNA基因分析方法和传统生理生化实验方法对这两株菌进行了菌种鉴定,最后鉴定H10为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus),S6X为帕氏假单胞菌(Pseudomonas palleronii)。     

海绵中生物表面活性剂生产菌的筛选及菌种鉴定

海绵（Marine sponge） 是一大类低等多细胞动物, 其体内及体表富集了大量的、不同种类的微生物.本文分别从繁茂膜海绵和南海海绵中,经富集培养、血平板分离、油扩散技术和表面张力测定等方法分离到高效产生物表面活性剂的菌株H10和菌株S6X.采用16S rDNA基因分析方法和传统生理生化实验方法对这两株菌进行了菌种鉴定,最后鉴定H10为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）,S6X为帕氏假单胞菌（Pseudomonas palleronii）.     

产共轭亚油酸乳酸菌的选育和鉴定

采用紫外分光光度法测定共轭亚油酸的含量,从13株实验室保存的乳酸菌中筛选出8株具有转化亚油酸生成共轭亚油酸能力的菌株.其中As1.2686产量最高,发酵液中共轭亚油酸含量达到13.63 mg/L;其次是菌株B11693,共轭亚油酸产量为11.55 mg/L.选择B11693做进一步的菌种鉴定,将传统的形态学、生理生化鉴定方法和细菌16SrDNA分子生物学鉴定方法相结合,鉴定菌株B11693为短乳杆菌.     

来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究

采用生长速率法测定植物乳杆菌Bx6．2的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝生长的影响,并对抑菌活性物质的理化性质进行了研究．结果表明,该菌的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝的生长有抑制作用．发酵液中的活性物质有较好的热稳定性,在pH6．0时抑菌效果较好,对酸性蛋白酶敏感,对中性蛋白酶不敏感,常温下10d的稳定性较好．通过调节pH、酶处理和加热处理实验,说明其抑菌活性物质不是乳酸,蛋白质类物质起了一定的抑菌作用,但其抑菌现象可能是与其他物质共同作用的结果．