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纳豆激酶的分离纯化及其特性研究 总被引:5,自引:0,他引:5
从实验室保存的1株高产纳豆激酶菌株出发,进行发酵产酶,确立具有纤溶活力的纳豆激酶的分离纯化工艺,主要通过硫酸铵分级盐析法和Phenyl Sepharose疏水柱层析进行分离纯化,用纤维蛋白平板法测定酶活力,用SDS-PAGE电泳验证为电泳纯,分子质量为28 ku。试验了不同作用温度、pH值和金属离子对NK活力的影响。结果表明,NK的适宜温度为25~50℃,适宜pH值为7.0,Cu2+,Mn2+,Hg2+是其抑制剂,而Mg2+,Ca2+为激活剂。 相似文献
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纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究 总被引:10,自引:0,他引:10
经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。 相似文献
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从日本传统食品纳豆中筛选获得一株高产纳豆激酶的盐芽孢杆菌菌株,其产酶能力为227IU/g。该菌株经过固体发酵后获得含酶发酵物,采用硫酸铵分步盐析的方法对纳豆激酶进行了分离纯化,其沉淀物即纳豆激酶,经过分步盐析纳豆激酶的纯化倍数为1.34。 相似文献
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以自制S-烷基-L-半胱氨酸为配基的亲和凝胶直接从独头蒜粉碎液中提取蒜氨酸酶.用自制亲和凝胶吸附蒜氨酸酶后,考察含0.2 mol·L-1葡萄糖溶液的洗脱效果.利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验,并研究温度、pH和底物浓度对酶活性的影响.结果表明,利用葡萄糖溶液洗脱,得到8.29倍的纯酶.而阴性对照纯化倍数为3.78倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为50 kDa和44 kDa.以合成的蒜氨酸为底物,蒜氨酸酶的最适温度是40℃,最适pH4.92,Kin为19.795μmol·mL-1,Vmax=8.446 μmol·mg-1·min-1. 相似文献
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通过6-His的分离标签,联合采取硫酸铵沉淀,生物半透膜透析和亲和层析等方法,纯化了目标酶。通过使用凝血酶切割DsbA-MalQ融合蛋白,证明酶切后酶蛋白仍具有麦芽糖转糖基酶活性。该酶的最适温度为37℃,最适pH值为6.5。当处理温度小于40℃时,酶的活力基本保持在最高活性的80%以上,相对稳定;在酶的pH耐受方面,在pH5.5~8.0范围内较稳定。金属离子和EDTA对酶活性的影响实验表明,EDTA对酶活的影响不大,但Zn2 、Cu2 、Hg2 、Ag 对酶蛋白有较强的抑制作用,而Ca2 、Mg2 、Mn2 等对表达的酶有一定的激活作用。在37℃,pH6.5时以麦芽三糖为底物测得酶促反应的Km值为0.378mmol/L,Vmax值为1.979mmol/(L·min)。 相似文献
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Isolation and purification of lysozyme from hen egg white was studied using a two-step procedure. The egg white was diluted 5- to 9-fold with sodium phosphate buffer, and then processed by sequential dilution diafiltration using a UF membrane (molecular weight cut-off 300,000 dalton). The membrane process increased the specific activity of lysozyme 6-fold, and recovered 96% of lysozyme activity. The permeate from diafiltration was further purified by affinity chromatography using chitin as adsorbent. The second step of the process yielded a product of specific activity of 70,400 units/mg protein. The overall lysozyme recovery was 79%. 相似文献